發(fā)布時(shí)間：2017-12-08 03:01

  本文關(guān)鍵詞：Rab26調(diào)節(jié)肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞β2-AR和TLR4受體失衡的作用及機(jī)制

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【摘要】：ALI/ARDS一直是危重病領(lǐng)域非常重視的研究熱點(diǎn),其基本病理生理特點(diǎn)明確為肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞、肺泡上皮細(xì)胞等的損傷,由此導(dǎo)致肺泡表面活性物質(zhì)減少,細(xì)胞通透性增加、多形核白細(xì)胞細(xì)胞大量聚集和炎癥激活,最終形成廣泛的肺水腫等病理表現(xiàn)�？梢�(jiàn)肺微血管內(nèi)皮的損傷在急性肺損傷及急性呼吸窘迫綜合征(ALI/ARDS)時(shí)處于首要地位,是疾病發(fā)生發(fā)展的主要原因之一。β2-AR和TLR4這兩類(lèi)受體均存在于PMECs并保持平衡,維持細(xì)胞正常生命活動(dòng)。主要是正常受體如β2-AR被激活,發(fā)揮生物性能。而病理情況下,PMECs應(yīng)答脂多糖等炎癥刺激時(shí),兩類(lèi)受體的表達(dá)和功能均要發(fā)生較大的變化,如TLR4受體將被激活,而正常受體如β2-AR會(huì)受損傷,從而打破了兩類(lèi)受體表達(dá)及介導(dǎo)炎癥功能的平衡,導(dǎo)致炎癥失控,最終引起ALI。Rab26為一種小G蛋白,屬于Ras超家族,在HEK293細(xì)胞中,Rab26可調(diào)控細(xì)胞表面α(2A)-AR和α(2B)-AR的表達(dá),同時(shí)ERK1/2被α(2)-AT激活,通過(guò)調(diào)節(jié)Rab分子和相互作用蛋白,對(duì)細(xì)胞分泌顆粒的成熟發(fā)揮效應(yīng)。但目前Rab26在肺組織細(xì)胞中研究甚少。因此,利用LPS刺激肺微血管內(nèi)皮后觀察細(xì)胞表面β2-AR和TLR4表達(dá)變化情況,以及相應(yīng)si RNA沉默和激動(dòng)劑處理細(xì)胞后二者的變化情況,進(jìn)一步探索兩受體失衡的現(xiàn)象,并初步研究Rab26質(zhì)粒對(duì)兩種受體失衡的調(diào)控作用。研究方法:1.應(yīng)用β2-AR和TLR4 si RNA轉(zhuǎn)染PMECs,檢測(cè)兩者m RNA和蛋白水平表達(dá)。2.應(yīng)用β2-AR和TLR4激動(dòng)劑處理PMECs,觀察兩種受體基因和蛋白表達(dá)。3.流式細(xì)胞儀檢測(cè)Rab26質(zhì)粒轉(zhuǎn)染PMECs的轉(zhuǎn)染效率,并應(yīng)用RT-PCR和Western Bolt檢測(cè)其表達(dá)情況。4.ELISA檢測(cè)PMECs處理后上清中各炎癥因子的表達(dá)。5.BSA檢測(cè)PMECs滲透性。研究結(jié)果:1.LPS處理HPMECs后,細(xì)胞表面β2-AR降低,而TLR4表達(dá)升高,初步證實(shí)受體失衡的現(xiàn)象。2.利用β2-AR和TLR4的si RNA轉(zhuǎn)染PMECs后,檢測(cè)結(jié)果顯示β2-AR si RNA作用后細(xì)胞表面TLR4表達(dá)有上調(diào),炎癥因子IL-6、IL-8、TNF-α表達(dá)升高;而TLR4si RNA處理后,HPMECs細(xì)胞內(nèi)β2-AR表達(dá)有升高趨勢(shì),炎癥因子的表達(dá)降低。3.依據(jù)時(shí)間濃度依賴(lài)曲線實(shí)驗(yàn)結(jié)果,β2-AR和TLR4激動(dòng)劑腎上腺素(EPI)和LPS最佳時(shí)間點(diǎn)為6h,濃度為50pmol/L和2ng/ul。結(jié)果表明EPI處理后β2-AR表達(dá)升高,而TLR4降低;在兩種激動(dòng)劑同時(shí)作用后,有一定的逆轉(zhuǎn)效應(yīng)。4.LPS處理HPMECs后,Rab26m RNA和蛋白表達(dá)降低;利用GDP活性質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后,Rab26 m RNA和蛋白表達(dá)降低,同時(shí)β2-AR表達(dá)亦降低,而TLR4表達(dá)升高,IL-6、IL-8、TNF-α分泌升高,細(xì)胞滲透性增加;GTP活性質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后,Rab26 m RNA和蛋白升高,β2-AR表達(dá)亦升高,而TLR4表達(dá)降低,IL-6、IL-8、TNF-α分泌減少,胞滲透性降低。結(jié)論:1.LPS刺激PMECs后,細(xì)胞表面存在β2-AR表達(dá)下調(diào)而TLR4表達(dá)上調(diào)失衡的現(xiàn)象;2.Rab26通過(guò)調(diào)節(jié)β2-AR在PMECs表面的轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)而調(diào)控LPS所引起的β2-AR和TLR4受體間的失衡。
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R563.8

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1 陳華萍;Rab26調(diào)節(jié)肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞β2-AR和TLR4受體失衡的作用及機(jī)制[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2016年

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本文編號(hào)：1264764