本文關(guān)鍵詞：YAP在哮喘發(fā)生過程中的表達(dá)情況及其功能探討

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【摘要】：目的:哮喘的主要特點(diǎn)是炎癥細(xì)胞的浸潤和組織重構(gòu)與結(jié)構(gòu)變化,其中包括氣管上皮纖維化和ASM細(xì)胞增殖。Hippo通路是一個關(guān)鍵的哮喘機(jī)制,主要監(jiān)管并參與細(xì)胞增殖,成纖維細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞分化。為了揭示哮喘和Hippo之間是否存在顯著性的關(guān)系,作為Hippo通路機(jī)制中最重要的基因靶點(diǎn)-YAP蛋白的表達(dá),則是主要的指針。我們通過慢性哮喘的支氣管平滑肌模型(CAM)對該蛋白的表達(dá)進(jìn)行了研究。方法:1:40只小鼠隨機(jī)分為空白對照組和模型實(shí)驗(yàn)組(利用雞卵清蛋白(OVA)誘喘制成慢性哮喘的支氣管平滑肌模型)。模型建立之后,通過HE染色法對空白對照組和模型實(shí)驗(yàn)組的老鼠在肺組織的病理變化方面進(jìn)行觀察。用免疫組織化學(xué)(IHC)的方法檢測是否存在YAP肺組織蛋白表達(dá)。2:通過構(gòu)建shRNA抑制YAP在mRNA和蛋白水平上的特異性表達(dá),研究溶血性脂肪酸流(LPA)和鞘氨醇-1-磷酸鹽(S1P)通過對YAP以及人氣道平滑肌細(xì)胞(airway smooth muscle cells,ASMCs)的影響。結(jié)果模型實(shí)驗(yàn)組的病理變化表明,經(jīng)過誘喘的小鼠存在大量炎癥細(xì)胞浸潤的現(xiàn)象,主要包括淋巴細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞的浸潤,還存在特定的氣道平滑肌增生的現(xiàn)象;IHC結(jié)果表明,模型實(shí)驗(yàn)組與空白對照組的YAP蛋白質(zhì)在表達(dá)中相比,有顯著增加(P0.01)。這一結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)了通過實(shí)時定量PCR(qPCR)和免疫印跡手段分析檢測到的YAP基因(P0.01)表達(dá)在模型實(shí)驗(yàn)組是有上調(diào)證據(jù)的準(zhǔn)確性;實(shí)驗(yàn)結(jié)果也顯示,被shYAP慢病毒條件轉(zhuǎn)染24h及以上的時間可以發(fā)現(xiàn)shYAP慢病毒轉(zhuǎn)染對ASMCs細(xì)胞內(nèi)YAP表達(dá)的抑制效應(yīng),即轉(zhuǎn)染是成功的,其質(zhì)粒也是有效的;而采用LPA和S1P對細(xì)胞的長期以及短期的干預(yù)均能夠增加ankrd1基因及其下游基因CTGF的表達(dá),從而顯著的增加YAP的活性;采用shyap抑制YAP細(xì)胞的表達(dá),然后加入對ASMCs干預(yù)LPA和S1P,結(jié)果發(fā)現(xiàn)shyap轉(zhuǎn)染CTGF和ankrd1,YAP和PCNA的表達(dá)減少,當(dāng)YAP受到抑制時,細(xì)胞的增殖也一定程度的受到影響;最后采用流式細(xì)胞儀檢測YAP對ASMCs細(xì)胞周期的實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)YAP的活性與細(xì)胞S期以及G2/M的細(xì)胞量存在著一定的相關(guān)性,即YAP活性越高,處于S期以及G2/M的細(xì)胞量就會越多,進(jìn)一步說明YAP能夠促進(jìn)細(xì)胞的增殖。結(jié)論總之,與空白對照組相比,在哮喘中,YAP蛋白具有明顯表達(dá),同時該現(xiàn)象可以作為哮喘一個指標(biāo),另外通過基因質(zhì)粒構(gòu)建的方式也進(jìn)一步的證明YAP的活性與細(xì)胞增殖存在著很大的關(guān)聯(lián)。
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R562.25

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 全國兒童哮喘防治協(xié)作組;中國城區(qū)兒童哮喘患病率調(diào)查[J];中華兒科雜志;2003年02期

2 陳愛歡;李昌崇;趙德育;陳志敏;洪建國;;兒童支氣管哮喘診斷與防治指南[J];中華兒科雜志;2008年10期

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本文編號：1264394