發(fā)布時(shí)間：2017-11-18 03:17

  本文關(guān)鍵詞：多重耐藥肺炎克雷伯菌質(zhì)粒介導(dǎo)的喹諾酮類耐藥基因的檢測(cè)及其與可移動(dòng)遺傳元件的相關(guān)性研究

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【摘要】：目的:1.了解南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院2012年~2013年間臨床分離多重耐藥肺炎克雷伯菌的分布情況及耐藥特性,為臨床抗菌藥物選擇提供依據(jù)。2.研究2012年~2013年多重耐藥肺炎克雷伯菌臨床連續(xù)分離株中質(zhì)粒介導(dǎo)喹諾酮類耐藥基因的分布和特性。3.研究質(zhì)粒介導(dǎo)的氟喹諾酮類耐藥基因與移動(dòng)基因元件攜帶率的相關(guān)性,并分析其與不同抗菌藥物耐藥性的關(guān)系。方法:1.收集南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院臨床標(biāo)本中分離的多重耐藥肺炎克雷伯菌40株,采用最低抑菌濃度(MIC)法測(cè)定抗菌藥物對(duì)細(xì)菌的敏感性,藥敏結(jié)果按照美國臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)(CLSI)2012推薦標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判讀。2.采用PCR法檢測(cè)質(zhì)粒介導(dǎo)的氟喹諾酮類耐藥基因(PMQR),包括qnr基因、藥物外排泵蛋白qep A和氨基糖苷乙酰轉(zhuǎn)移酶的變異基因aac(6’)-Ib-cr,陽性結(jié)果測(cè)序,測(cè)序結(jié)果在Genbank比對(duì)。對(duì)PMQR基因陽性菌株進(jìn)行接合轉(zhuǎn)移試驗(yàn)。ERIC-PCR及MLST分析是否克隆傳播。3.PCR擴(kuò)增部分可移動(dòng)遺傳元件遺傳元件(插入序列IS26、IS2、ISCR1、ISEcp1,整合子int I1、int I2、int I3)。經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳,檢出的陽性基因測(cè)序并比對(duì);PCR-mapping對(duì)移動(dòng)元件下游是否攜帶PMQR基因進(jìn)行檢測(cè),研究分析它們之間的相關(guān)性。結(jié)果:1.本研究共收集2012年~2013年多重耐藥肺炎克雷伯菌40株,藥敏結(jié)果顯示耐藥率最高的是氨芐西林,耐藥率為100%;而頭孢唑啉,頭孢他啶,頭孢曲松,氨曲南,厄他培南,慶大霉素的耐藥率為80%~97.5%;亞胺培南的耐藥率為77.5%;耐藥率最低的是左氧氟沙星,但也達(dá)到了55%。ERIC-PCR及MLST結(jié)果顯示,存在多個(gè)克隆株,主要為ST11/A型,但也存在ST340/A型、ST437/A型及ST147/J型等克隆株。2.40株多重耐藥肺炎克雷伯菌中,其中有37株(92.5%)檢測(cè)出含有qnr基因的陽性菌株,qnr A共33株,均為qnr A1型;qnr B共12株,均為qnr B4型;qnr S共16株,均為qnr S1型,并且有4株同時(shí)攜帶三種以上qnr基因,qnr C、qnr D和qep A基因本次實(shí)驗(yàn)均未檢出,另外檢測(cè)出含aac(6’)-Ib基因28株,測(cè)序比對(duì)分析發(fā)現(xiàn)12株為aac(6’)-Ib-cr基因;40株P(guān)MQR基因陽性菌株中,接合轉(zhuǎn)移試驗(yàn)成功8株,接合子與受體菌相比,對(duì)氟喹諾酮類藥物的MIC值提高了2~32倍,部分或全部qnr基因轉(zhuǎn)移到接合子上。3.40株肺炎克雷伯菌中,檢出ISCR1基因陽性30株,檢出ISEcp1基因陽性40株,整合子intl1陽性32株,檢出IS2基因陽性16株,檢出IS26基因陽性10株;PCR-mappin擴(kuò)增及序列分析ISCR1連接qnr A1共15株,ISCR1連接qnr B4有共2株,ISCR1連接qnr S1共4株;ISEcp1連接qnr B4共9株,ISEcp1連接qnr A1共4株,ISEcp1連接qnr S1共1株;IS2連接qnr S1共8株。結(jié)論:1.臨床分離的40株肺炎克雷伯菌株耐藥嚴(yán)重,對(duì)多種臨床常用的抗菌藥物耐藥率達(dá)55%以上,應(yīng)加強(qiáng)對(duì)肺炎克雷伯菌的耐藥監(jiān)測(cè),并規(guī)范臨床抗菌藥物的使用。2.本院肺炎克雷伯菌PMQR基因以qnr基因?yàn)橹?其次是aac(6’)-Ibr基因,qnr基因以qnr A為主,其次是qnr S和qnr B,亞型包括qnr A1、qnr B4、qnr S1和aac(6’)-Ib-cr,未檢出qnr C、qnr D和qep A基因。3.本院分離的多重耐藥肺炎克雷伯菌株檢測(cè)出可移動(dòng)遺傳元件攜帶率很高,且以多種共存的方式存在,ISCR1下游以連接qnr A1為主,ISECP1下游以連接qnr B4為主,IS2下游以連接qnr S1為主。
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R446.5;R563.1

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