本文關(guān)鍵詞：環(huán)境雌激素MEHP通過(guò)ROS介導(dǎo)的線粒體損傷在TRALI中的作用機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： MEHP TRALI HUVEC ROS 線粒體損傷 細(xì)胞凋亡

【摘要】：研究背景及目的： 輸血相關(guān)急性肺損傷(TRALI)是一種罕見(jiàn)但可能致命的輸血反應(yīng),是目前輸血相關(guān)死亡的首要原因[1]。盡管TRALI的危害已經(jīng)被人逐漸認(rèn)識(shí)到,但對(duì)這種并發(fā)癥的重視程度仍尚顯不夠[2]。目前TRALI的診斷根據(jù)臨床癥狀主要是輸血后6小時(shí)內(nèi)發(fā)生急性呼吸窘迫的非心源性肺水腫[3]。TRALI的病理生理機(jī)制第一步涉及輸血血液成分中含有獻(xiàn)血者血漿中存在的白細(xì)胞的抗體,其中最常見(jiàn)的是人類白細(xì)胞抗體(HLA) I類和Ⅱ型抗體[4]。第二步機(jī)制涉及到中性粒細(xì)胞底物激活的肺生物活性因子造成直接肺血管內(nèi)皮損害,毛細(xì)血管滲漏和急性肺損傷[5,6]。無(wú)論哪種機(jī)制,最后釋放哪種因子最后都是直接作用于肺血管內(nèi)皮從而引起輸血相關(guān)急性肺損傷。 鄰苯二甲酸二乙基已酯(DEHP)及代謝產(chǎn)物鄰苯二酸-單2乙基已酯(MEHP)是環(huán)境雌激素(EEs)中鄰苯二甲酸酯類(PAEs)的一種,被大量應(yīng)用于聚氯乙烯塑料制品中,是在環(huán)境中廣泛存在,可以在人類羊水,臍帶血,人類乳汁,精液,唾液檢測(cè)到[7]。 根據(jù)美國(guó)Swedish醫(yī)療中心2009年的一份研究報(bào)告顯示：在使用血液袋,輸液袋等含鄰苯二甲酸酯的醫(yī)療器械時(shí),血液袋內(nèi)容物中脫落的DEHP及MEHP可以經(jīng)靜脈內(nèi)給藥而直接吸收。使用液相色譜/質(zhì)譜(LCMS)技術(shù)檢測(cè)獻(xiàn)血中心有效期內(nèi)第1天至第42天輸血袋上清液中的DEHP和MEHP含量顯示：DEHP的含量從第1天的34.3μM(20.0±SD)顯著增加至第42天的433.2μM(131.2μSD); MEHP顯著從第1天的3.7μM(2.8±D)增加至第42天的74.0μM (19.1±SD)。由此可見(jiàn)使用庫(kù)血制品中含量超標(biāo)的的DEHP和MEHP可能是輸血相關(guān)急性肺損傷(TRALI)發(fā)生的一個(gè)重要因素。 細(xì)胞凋亡作為細(xì)胞生物學(xué)在過(guò)去的10年研究最多的領(lǐng)域之一,是細(xì)胞程序性死亡的主要的研究形式,它在組織穩(wěn)態(tài)發(fā)展過(guò)程中的核心作用[8-14]。其中細(xì)胞凋亡的眾多信號(hào)通路中,Bcl-2家族蛋白是主要參與者。它們的主要功能是調(diào)節(jié)線粒體外膜(OMM)的通透性,釋放不同的凋亡因子,即細(xì)胞色素C,Smac/DIABLO, Omi/HtrA2,核酸內(nèi)切酶g,和AIF。Bax作為促凋亡蛋白與鑒定為抗凋亡蛋白的Bcl-2蛋白,同屬Bcl-2家族[15,16]。 N-乙�；腚装彼�(NAC)在谷胱甘肽形成的時(shí)候起著重要作用,它直接影響了萃取蛋白質(zhì)的能力,被認(rèn)為是一種強(qiáng)大的抗氧化劑,可以減輕細(xì)胞損傷作用[17]。 為了探究MEHP (DEHP在人體內(nèi)會(huì)轉(zhuǎn)化生成MEHP)導(dǎo)致輸血相關(guān)急性肺損傷(TRALI)發(fā)生的原因和機(jī)制,我們建立體外細(xì)胞染毒模型,探討MEHP對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞HUVEC的直接毒效應(yīng)及其機(jī)制。 試驗(yàn)方法和結(jié)果： 實(shí)驗(yàn)方法： 1、將HUVEC細(xì)胞在含10%胎牛血清濃度的1640培養(yǎng)基培養(yǎng)條件下培養(yǎng),培養(yǎng)狀態(tài)穩(wěn)定后,用不同濃度的MEHP (0、6.25、12.5、25、50、100μM)染毒一定時(shí)間。 2、用MTT法、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞的細(xì)胞活力和細(xì)胞凋亡率以檢測(cè)MEHP對(duì)細(xì)胞的毒性作用。 3、用DCFH-DA熒光探針、JC-1熒光探針等分別檢測(cè)細(xì)胞胞內(nèi)ROS的產(chǎn)生以及線粒體膜電位的變化。 4、用試劑盒檢測(cè)細(xì)胞胞內(nèi)氧化應(yīng)激指標(biāo)包括胞內(nèi)丙二醛(MDA)水平、谷胱甘肽(GSH)含量以及超氧化物歧化酶(SOD)酶活力的情況。 5、用酶標(biāo)學(xué)的方法檢測(cè)細(xì)胞凋亡可能存在的凋亡通路,檢測(cè)caspase-3、caspase-8、 caspase-9三種酶的活力以驗(yàn)證內(nèi)源性和外源性凋亡通路。 6、用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)細(xì)胞裂解液中Bax, Bcl-2的含量。 7、Western blot檢測(cè)細(xì)胞裂解液中Bax, Bcl-2,細(xì)胞色素-c蛋白質(zhì)的表達(dá)水平。 8、利用用還原劑NAC預(yù)處理后,通過(guò)檢測(cè)ROS的產(chǎn)生、細(xì)胞活力和凋亡率,看ROS是否介導(dǎo)了MEHP的毒效應(yīng)。 結(jié)果： 1、細(xì)胞活力顯著下降,細(xì)胞活力呈劑量和時(shí)間依賴性下降。 2、細(xì)胞內(nèi)ROS的生成,隨著濃度的增加,中、高劑量組胞內(nèi)ROS的含量明顯增加。 3、MEHP誘導(dǎo)HUVEC凋亡而導(dǎo)致胞內(nèi)氧化應(yīng)激指標(biāo)紊亂。 4、MEHP通過(guò)內(nèi)源性和外源性途徑共同誘導(dǎo)HUVEC凋亡。 5、MEHP可以引起細(xì)胞內(nèi)Bax和Bcl-2mRNA水平的改變。 6、HUVEC細(xì)胞胞內(nèi)蛋白質(zhì)水平Bax與Bcl-2比值隨著MEHP濃度增加而增加呈劑量依賴性,提示胞內(nèi)促細(xì)胞凋亡的存在,而NAC孵育后可以減輕細(xì)胞凋亡。 結(jié)論：MEHP誘導(dǎo)HUVEC細(xì)胞線粒體的損傷,引起氧化應(yīng)激和脂質(zhì)過(guò)氧化；并能通過(guò)ROS介導(dǎo)的內(nèi)源性細(xì)胞凋亡通路誘導(dǎo)HUVEC細(xì)胞凋亡。MEHP可能誘導(dǎo)肺血管內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡進(jìn)而導(dǎo)致輸血相關(guān)急性肺損傷(TRALI)的發(fā)生。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R563.8

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 鄧冬富;閆玉蓮;謝小軍;;長(zhǎng)江朱楊段和沱江富順段魚類體內(nèi)6種鄰苯二甲酸酯的含量[J];淡水漁業(yè);2012年02期

2 李嵐;施衛(wèi)星;陳樞青;;環(huán)境污染物內(nèi)暴露與兒童肥胖發(fā)生發(fā)展的關(guān)系[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(衛(wèi)生學(xué)分冊(cè));2009年01期

3 李倩;應(yīng)倩;丁之德;;雙酚A對(duì)哺乳動(dòng)物生殖系統(tǒng)影響的研究進(jìn)展[J];國(guó)際生殖健康/計(jì)劃生育雜志;2012年06期

4 高福梅;沈浣;;鄰苯二甲酸酯類化合物與自然流產(chǎn)的研究進(jìn)展[J];國(guó)際生殖健康/計(jì)劃生育雜志;2013年05期

5 Yu-Shan Chen;Xiao-Bo Qiu;;Ubiquitin at the crossroad of cell death and survival[J];Chinese Journal of Cancer;2013年12期

6 郭孝涵;賀晶;;環(huán)境因素與出生缺陷[J];國(guó)際婦產(chǎn)科學(xué)雜志;2013年06期

7 仲米貴;王鄭;徐晶晶;程星星;蔡孟哲;徐海強(qiáng);;活性炭-凹凸棒復(fù)合濾料對(duì)水中DBP的吸附研究[J];化工技術(shù)與開發(fā);2014年01期

8 楊君;魏進(jìn)旺;梁?jiǎn)?劉凱;何家驥;賈創(chuàng)創(chuàng);;小骨窗開顱與立體定向穿刺手術(shù)治療高血壓腦出血的對(duì)比分析[J];甘肅醫(yī)藥;2014年02期

9 陳思懷;石志敏;;全氟烷酸類化合物的毒理學(xué)研究[J];中國(guó)醫(yī)藥科學(xué);2014年02期

10 曠毓嬋;李英文;譚號(hào);郭學(xué)鳴;吳迪;劉智皓;;內(nèi)分泌干擾物對(duì)雄激素受體功能的干擾[J];重慶師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2014年02期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 趙巖;李露茜;蔣蓉芳;謝長(zhǎng)明;梁園;陳尚勤;張?zhí)N暉;;環(huán)境水平的鄰苯二甲酸酯暴露對(duì)產(chǎn)婦11β-HSD2酶活性的影響[A];2013中國(guó)環(huán)境科學(xué)學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)浦華環(huán)保優(yōu)秀論文集[C];2013年

2 石鳳瓊;林欽;柯常亮;孫閏霞;;農(nóng)產(chǎn)品中鄰苯二甲酸酯殘留與健康風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)研究[A];農(nóng)業(yè)環(huán)境與生態(tài)安全——第五屆全國(guó)農(nóng)業(yè)環(huán)境科學(xué)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2013年

3 馬旭;Jia Zhou;Cheng-Xiang Zhang;Xiu-Ying Li;Nan Li;Rui-Jun Ju;Wan-Liang Lu;;小檗堿靶向性脂質(zhì)體及其抗乳腺癌干細(xì)胞作用機(jī)制與效應(yīng)研究(英文)[A];第十一屆全國(guó)博士生學(xué)術(shù)年會(huì)（生物醫(yī)藥專題）論文集（上冊(cè)，，大會(huì)報(bào)告）[C];2013年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 葉俊麗;HSP70介導(dǎo)細(xì)胞氧化應(yīng)激反應(yīng)及扇貝多肽的神經(jīng)保護(hù)作用研究[D];中國(guó)海洋大學(xué);2010年

2 劉瑩;典型環(huán)境雌激素對(duì)九孔鮑胚胎變態(tài)發(fā)育的急性毒性研究[D];清華大學(xué);2010年

3 史俊;石杉?jí)A甲-磷酸川芎嗪復(fù)方干預(yù)阿爾茨海默癥的研究[D];華東理工大學(xué);2012年

4 楊烈;過(guò)氧化物酶體增殖因子活化受體δ（PPARδ）在大腸癌發(fā)生中的作用研究[D];四川大學(xué);2007年

5 李惠俠;Wnt/β-catenin信號(hào)通路在豬ADSCs向脂肪細(xì)胞分化中的作用及機(jī)理研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2008年

6 王飛;環(huán)境微生物與環(huán)境污染物的相互作用機(jī)制及環(huán)境行為[D];中國(guó)地質(zhì)大學(xué);2010年

7 于敏莉;維甲酸對(duì)雞胚生殖細(xì)胞增殖和減數(shù)分裂調(diào)控的研究[D];浙江大學(xué);2012年

8 朱淑云;水飛薊籽仁蛋白和油的主要特性與生物活性研究[D];江蘇大學(xué);2013年

9 王云霞;XAF1在卵巢癌組織中的表達(dá)及作用機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究[D];山東大學(xué);2013年

10 金兌煥;Khz（靈芝，豬苓融合菌絲體提取物）誘導(dǎo)人類癌細(xì)胞凋亡的機(jī)制[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2013年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 王開亮;高效液相色譜法檢測(cè)孕婦血清中BBP、DBP的含量及其可能的毒理學(xué)意義[D];華中科技大學(xué);2009年

2 秦潔芳;鄰苯二甲酸酯類化合物對(duì)翡翠貽貝、紅鰭笛鯛和紫紅笛鯛的毒性效應(yīng)[D];上海海洋大學(xué);2011年

3 鮑園;大氣中環(huán)境激素氧化降解機(jī)理的理論研究[D];山東大學(xué);2011年

4 莊合林;維生素C、D_3和9順式維甲酸對(duì)豬脂肪細(xì)胞增殖與分化的影響[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2007年

5 王蕾;三丁基錫對(duì)非洲爪蟾和紅鯽的毒性效應(yīng)[D];華東師范大學(xué);2008年

6 吳宗松;miR-27b通過(guò)靶向于PPARγ觸發(fā)脂肪細(xì)胞分化[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2009年

7 劉榮鑫;氧化應(yīng)激以不依賴Wnt/β-catenin通路的方式抑制豬前體脂肪細(xì)胞成脂分化[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2010年

8 朱嘉月;鄰苯二甲酸二丁酯對(duì)青春期雌性大鼠生殖毒性及其作用機(jī)理的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2010年

9 洪春苗;水中難降解有機(jī)污染物去除方法的研究[D];天津理工大學(xué);2012年

10 李荔群;鄰苯二甲酸二丁酯對(duì)子代生殖發(fā)育毒性的影響及相關(guān)人群暴露途徑的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2012年

本文編號(hào)：1195676