本文關(guān)鍵詞：γ分泌酶抑制劑阻斷Notch信號(hào)通路對(duì)BMSCs向肺泡上皮細(xì)胞分化的影響

  更多相關(guān)文章： 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 Notch信號(hào)通路 肺泡上皮細(xì)胞 分化

【摘要】：目的:骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)來(lái)源廣、易培養(yǎng)且具有誘導(dǎo)其定向分化目的細(xì)胞的潛能,在BMSCs分化的過(guò)程中有許多信號(hào)通路參與并發(fā)揮重要的作用,而Notch信號(hào)通路就是其中的一條。本實(shí)驗(yàn)利用骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)與肺泡上皮細(xì)胞(MLE-12)進(jìn)行非接觸共培養(yǎng),在共培養(yǎng)中加入γ-分泌酶抑制劑(DAPT)觀察其對(duì)BMSCs分化過(guò)程產(chǎn)生的影響,明確γ-分泌酶抑制劑(DAPT)阻斷Notch信號(hào)通路對(duì)BMSCs誘導(dǎo)分化肺泡上皮細(xì)胞過(guò)程中的影響。方法:取4周左右的小鼠脛骨及股骨,采用全骨髓貼壁細(xì)胞法進(jìn)行分離、培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,取第3代的骨髓充質(zhì)干細(xì)胞采用流式細(xì)胞學(xué)技術(shù)進(jìn)行鑒定。將純化后的第4代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與肺泡上皮細(xì)胞在Transwell體系下進(jìn)行非接觸共培養(yǎng),并在共培養(yǎng)的基礎(chǔ)上加入γ-分泌酶抑制劑DAPT。本實(shí)驗(yàn)分為3個(gè)組:空白對(duì)照組即為低糖培養(yǎng)基單獨(dú)培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與肺上皮細(xì)胞共培養(yǎng)誘導(dǎo)分化組、加入DAPT20ng/ml干預(yù)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與肺上皮細(xì)胞共培養(yǎng)誘導(dǎo)分化組。處理后用光鏡觀察共培養(yǎng)后BMCSs的形態(tài)結(jié)構(gòu)變化,并分別在共培養(yǎng)的第10天提取蛋白及RNA,用Western和RT-q PCR檢測(cè)Notch信號(hào)通路相關(guān)基因Notch1、HES1,Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞特異性表面活性蛋白(surfactant protein C,SPC)、Ι型肺泡上皮細(xì)胞標(biāo)志水通道蛋白(aquaporin5,AQP5)的表達(dá)含量以此評(píng)估γ-分泌酶抑制劑DAPT抑制Notch信號(hào)通路對(duì)BMSCs向肺泡上皮細(xì)胞分化的作用。結(jié)果:1.分離后BMSCs在光鏡下可觀察到其形態(tài)為短梭形,經(jīng)流式細(xì)胞術(shù)鑒定CD29、CD44表達(dá)陽(yáng)性,CD34、CD45表達(dá)陰性,表明已成功提取到BMSCs.2.在光鏡下觀察共培養(yǎng)誘導(dǎo)分化的BMSCs由梭形逐漸變?yōu)樗其伮肥瘶由掀ぜ?xì)胞形態(tài)。3.Notch信號(hào)通路在骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向肺泡上皮細(xì)胞分化時(shí)被激活,和空白對(duì)照組相比,Notch1蛋白表達(dá)和HES1m RNA表達(dá)升高(p0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在BMSCs與MLE-12進(jìn)行共培養(yǎng)的基礎(chǔ)上加入抑制劑DAPT濃度為20ng/ml后,和共培養(yǎng)組相比,Notch1蛋白和HES1m RNA的表達(dá)減少(p0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,表明在共培養(yǎng)誘導(dǎo)分化的過(guò)程中γ-分泌酶抑制劑DAPT能夠阻斷Notch信號(hào)通路發(fā)揮效應(yīng)。4.在共培養(yǎng)組、DAPT共培養(yǎng)組中將細(xì)胞培養(yǎng)10天后,經(jīng)Western和RT-q PCR可檢測(cè)到SPC、AQP5蛋白和m RNA。和空白對(duì)照組相比,共培養(yǎng)組和DAPT共培養(yǎng)組中SPC、AQP5蛋白及其m RNA的表達(dá)升高(p0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。DAPT共培養(yǎng)組與共培養(yǎng)組相比,SPC、AQP5蛋白及其m RNA的表達(dá)減少(p0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:1.骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在MLE-12誘導(dǎo)下可以定向分化為肺泡上皮細(xì)胞2.BMSCs在MLE-12誘導(dǎo)定向分化肺泡上皮細(xì)胞的過(guò)程中Notch信號(hào)通路被激活3.γ-分泌酶抑制劑DAPT阻斷Notch信號(hào)通路在BMSCs誘導(dǎo)分化肺泡上皮細(xì)胞的過(guò)程中可能起抑制作用
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R563.9

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 張冬;于占革;;Notch信號(hào)通路與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化的研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2013年22期

2 孟曉;宋穎;劉云鵬;楊向紅;;大鼠骨髓源內(nèi)皮祖細(xì)胞分化過(guò)程N(yùn)otch信號(hào)通路活化及欖香烯干預(yù)機(jī)制的探討[J];中華腫瘤防治雜志;2012年07期

3 王t，

本文編號(hào)：1191029