本文關(guān)鍵詞：γ分泌酶抑制劑阻斷Notch信號通路對BMSCs向肺泡上皮細胞分化的影響

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【摘要】：目的:骨髓間充質(zhì)干細胞(BMSCs)來源廣、易培養(yǎng)且具有誘導(dǎo)其定向分化目的細胞的潛能,在BMSCs分化的過程中有許多信號通路參與并發(fā)揮重要的作用,而Notch信號通路就是其中的一條。本實驗利用骨髓間充質(zhì)干細胞(BMSCs)與肺泡上皮細胞(MLE-12)進行非接觸共培養(yǎng),在共培養(yǎng)中加入γ-分泌酶抑制劑(DAPT)觀察其對BMSCs分化過程產(chǎn)生的影響,明確γ-分泌酶抑制劑(DAPT)阻斷Notch信號通路對BMSCs誘導(dǎo)分化肺泡上皮細胞過程中的影響。方法:取4周左右的小鼠脛骨及股骨,采用全骨髓貼壁細胞法進行分離、培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細胞,取第3代的骨髓充質(zhì)干細胞采用流式細胞學(xué)技術(shù)進行鑒定。將純化后的第4代骨髓間充質(zhì)干細胞與肺泡上皮細胞在Transwell體系下進行非接觸共培養(yǎng),并在共培養(yǎng)的基礎(chǔ)上加入γ-分泌酶抑制劑DAPT。本實驗分為3個組:空白對照組即為低糖培養(yǎng)基單獨培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細胞、骨髓間充質(zhì)干細胞與肺上皮細胞共培養(yǎng)誘導(dǎo)分化組、加入DAPT20ng/ml干預(yù)骨髓間充質(zhì)干細胞與肺上皮細胞共培養(yǎng)誘導(dǎo)分化組。處理后用光鏡觀察共培養(yǎng)后BMCSs的形態(tài)結(jié)構(gòu)變化,并分別在共培養(yǎng)的第10天提取蛋白及RNA,用Western和RT-q PCR檢測Notch信號通路相關(guān)基因Notch1、HES1,Ⅱ型肺泡上皮細胞特異性表面活性蛋白(surfactant protein C,SPC)、Ι型肺泡上皮細胞標志水通道蛋白(aquaporin5,AQP5)的表達含量以此評估γ-分泌酶抑制劑DAPT抑制Notch信號通路對BMSCs向肺泡上皮細胞分化的作用。結(jié)果:1.分離后BMSCs在光鏡下可觀察到其形態(tài)為短梭形,經(jīng)流式細胞術(shù)鑒定CD29、CD44表達陽性,CD34、CD45表達陰性,表明已成功提取到BMSCs.2.在光鏡下觀察共培養(yǎng)誘導(dǎo)分化的BMSCs由梭形逐漸變?yōu)樗其伮肥瘶由掀ぜ毎螒B(tài)。3.Notch信號通路在骨髓間充質(zhì)干細胞向肺泡上皮細胞分化時被激活,和空白對照組相比,Notch1蛋白表達和HES1m RNA表達升高(p0.05),差異有統(tǒng)計學(xué)意義。在BMSCs與MLE-12進行共培養(yǎng)的基礎(chǔ)上加入抑制劑DAPT濃度為20ng/ml后,和共培養(yǎng)組相比,Notch1蛋白和HES1m RNA的表達減少(p0.05),差異有統(tǒng)計學(xué)意義,表明在共培養(yǎng)誘導(dǎo)分化的過程中γ-分泌酶抑制劑DAPT能夠阻斷Notch信號通路發(fā)揮效應(yīng)。4.在共培養(yǎng)組、DAPT共培養(yǎng)組中將細胞培養(yǎng)10天后,經(jīng)Western和RT-q PCR可檢測到SPC、AQP5蛋白和m RNA。和空白對照組相比,共培養(yǎng)組和DAPT共培養(yǎng)組中SPC、AQP5蛋白及其m RNA的表達升高(p0.05),差異有統(tǒng)計學(xué)意義。DAPT共培養(yǎng)組與共培養(yǎng)組相比,SPC、AQP5蛋白及其m RNA的表達減少(p0.05),差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論:1.骨髓間充質(zhì)干細胞在MLE-12誘導(dǎo)下可以定向分化為肺泡上皮細胞2.BMSCs在MLE-12誘導(dǎo)定向分化肺泡上皮細胞的過程中Notch信號通路被激活3.γ-分泌酶抑制劑DAPT阻斷Notch信號通路在BMSCs誘導(dǎo)分化肺泡上皮細胞的過程中可能起抑制作用
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R563.9

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1 張冬;于占革;;Notch信號通路與骨髓間充質(zhì)干細胞分化的研究進展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2013年22期

2 孟曉;宋穎;劉云鵬;楊向紅;;大鼠骨髓源內(nèi)皮祖細胞分化過程Notch信號通路活化及欖香烯干預(yù)機制的探討[J];中華腫瘤防治雜志;2012年07期

3 王t，

本文編號：1191029