發(fā)布時間：2017-11-09 18:25

  本文關鍵詞：KLF2調控S1PR1對類中性粒細胞遷移的影響

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【摘要】：目的和意義：支氣管哮喘是一種慢性氣道炎癥性疾病，約50%的哮喘與嗜酸性粒細胞炎癥有關，而其余的哮喘中大部分伴隨著中性粒細胞增多。在重癥哮喘患者的誘導痰中，中性粒細胞比例明顯增加。哮喘中性粒細胞增多與中性粒細胞凋亡延遲或減少有關，也與中性粒細胞表面粘附遷移分子表達增加，引起遷移增加有關。本文從細胞水平研究KLF2是否調控S1PR1，影響類中性粒細胞遷移。 方法： （1）將HL-60細胞用含1.3%DMSO培養(yǎng)5天后，，分化為類中性粒細胞，通過迪夫快速染色法觀察細胞核形態(tài)及Realtime PCR檢測中性粒細胞分化標志物CD11b mRNA的表達，確定是否誘導成功。 （2）用空載及KLF2-RNAi慢病毒載體感染類中性粒細胞。應用熒光顯微鏡鑒定感染率。應用Western blot、Realtime PCR進行KLF2敲減率鑒定。 （3）Realtime PCR檢測三組(空白組、空載組、干擾組)中KLF2、S1PR1mRNA的表達，Western blot檢測三組中KLF2、S1PR1蛋白的表達，免疫熒光檢測KLF2蛋白表達。 （4）應用Transwell實驗計數(shù)0.1μM S1P對三組類中性粒細胞的趨化遷移率。 結果： 1.成功的將HL-60細胞誘導成類中性粒細胞 將HL-60細胞用含1.3%DMSO培養(yǎng)5天后提取細胞，經(jīng)迪夫快速染色法發(fā) 現(xiàn)細胞體積變小，出現(xiàn)腎型核。Real-timePCR檢測CD11b mRNA表達情況， 類中性粒細胞CD11b表達明顯增加（P＜0.01）。 2.慢病毒轉染①熒光顯微鏡下觀察干擾組和空載組的感染效率，感染效率達到90%以上。②KLF2表達情況Real-timePCR結果中，干擾組較空白組、空載組KLF2表達明顯減少（P＜0.01），空載組和空白組KLF2表達基本相同（P＞0.05），計算其敲除率約為81%。慢病毒成功干擾KLF2基因表達，且排除病毒本身的干擾。免疫熒光顯示，干擾組較空白組、空載組KLF2表達減少。 3.S1PR1mRNA表達變化 Realtime PCR結果中，干擾組較空白組、空載組S1PR1表達明顯減少（P＜0.01）， 4.S1PR1蛋白表達變化 Western blot結果中，干擾組較空白組、空載組S1PR1表達明顯減少（P＜0.01）。 5.Transwell實驗： 選取0.1μM濃度的S1P進行Transwell實驗，干擾組較空白組、空載組，遷移率明顯減少（P＜0.01）。 結論： KLF2通過上調S1PR1表達，促進S1P趨化下的類中性粒細胞遷移。
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R562.25

【參考文獻】

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1 王梅芳;戴愛國;胡瑞成;高軍麗;朱黎明;;轉錄因子Nrf2/Bach1及MAPK激酶調控γ-GCS在大鼠慢性阻塞性肺疾病中的作用[J];中國病理生理雜志;2009年05期

本文編號：1163076