本文關(guān)鍵詞：KLF2調(diào)控S1PR1對(duì)類中性粒細(xì)胞遷移的影響

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【摘要】：目的和意義：支氣管哮喘是一種慢性氣道炎癥性疾病，約50%的哮喘與嗜酸性粒細(xì)胞炎癥有關(guān)，而其余的哮喘中大部分伴隨著中性粒細(xì)胞增多。在重癥哮喘患者的誘導(dǎo)痰中，中性粒細(xì)胞比例明顯增加。哮喘中性粒細(xì)胞增多與中性粒細(xì)胞凋亡延遲或減少有關(guān)，也與中性粒細(xì)胞表面粘附遷移分子表達(dá)增加，引起遷移增加有關(guān)。本文從細(xì)胞水平研究KLF2是否調(diào)控S1PR1，影響類中性粒細(xì)胞遷移。 方法： （1）將HL-60細(xì)胞用含1.3%DMSO培養(yǎng)5天后，，分化為類中性粒細(xì)胞，通過(guò)迪夫快速染色法觀察細(xì)胞核形態(tài)及Realtime PCR檢測(cè)中性粒細(xì)胞分化標(biāo)志物CD11b mRNA的表達(dá)，確定是否誘導(dǎo)成功。 （2）用空載及KLF2-RNAi慢病毒載體感染類中性粒細(xì)胞。應(yīng)用熒光顯微鏡鑒定感染率。應(yīng)用Western blot、Realtime PCR進(jìn)行KLF2敲減率鑒定。 （3）Realtime PCR檢測(cè)三組(空白組、空載組、干擾組)中KLF2、S1PR1mRNA的表達(dá)，Western blot檢測(cè)三組中KLF2、S1PR1蛋白的表達(dá)，免疫熒光檢測(cè)KLF2蛋白表達(dá)。 （4）應(yīng)用Transwell實(shí)驗(yàn)計(jì)數(shù)0.1μM S1P對(duì)三組類中性粒細(xì)胞的趨化遷移率。 結(jié)果： 1.成功的將HL-60細(xì)胞誘導(dǎo)成類中性粒細(xì)胞 將HL-60細(xì)胞用含1.3%DMSO培養(yǎng)5天后提取細(xì)胞，經(jīng)迪夫快速染色法發(fā) 現(xiàn)細(xì)胞體積變小，出現(xiàn)腎型核。Real-timePCR檢測(cè)CD11b mRNA表達(dá)情況， 類中性粒細(xì)胞CD11b表達(dá)明顯增加（P＜0.01）。 2.慢病毒轉(zhuǎn)染①熒光顯微鏡下觀察干擾組和空載組的感染效率，感染效率達(dá)到90%以上。②KLF2表達(dá)情況Real-timePCR結(jié)果中，干擾組較空白組、空載組KLF2表達(dá)明顯減少（P＜0.01），空載組和空白組KLF2表達(dá)基本相同（P＞0.05），計(jì)算其敲除率約為81%。慢病毒成功干擾KLF2基因表達(dá)，且排除病毒本身的干擾。免疫熒光顯示，干擾組較空白組、空載組KLF2表達(dá)減少。 3.S1PR1mRNA表達(dá)變化 Realtime PCR結(jié)果中，干擾組較空白組、空載組S1PR1表達(dá)明顯減少（P＜0.01）， 4.S1PR1蛋白表達(dá)變化 Western blot結(jié)果中，干擾組較空白組、空載組S1PR1表達(dá)明顯減少（P＜0.01）。 5.Transwell實(shí)驗(yàn)： 選取0.1μM濃度的S1P進(jìn)行Transwell實(shí)驗(yàn)，干擾組較空白組、空載組，遷移率明顯減少（P＜0.01）。 結(jié)論： KLF2通過(guò)上調(diào)S1PR1表達(dá)，促進(jìn)S1P趨化下的類中性粒細(xì)胞遷移。
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R562.25

【參考文獻(xiàn)】

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1 王梅芳;戴愛(ài)國(guó);胡瑞成;高軍麗;朱黎明;;轉(zhuǎn)錄因子Nrf2/Bach1及MAPK激酶調(diào)控γ-GCS在大鼠慢性阻塞性肺疾病中的作用[J];中國(guó)病理生理雜志;2009年05期

本文編號(hào)：1163076