本文關(guān)鍵詞：氣道平滑肌細(xì)胞內(nèi)mRNA結(jié)合蛋白HuR對(duì)α-肌動(dòng)蛋白表達(dá)的影響

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【摘要】：研究目的：人氣道平滑肌細(xì)胞作為氣道最主要的組成部分,其形態(tài)功能異常是哮喘的重要病理生理變化之一,血小板源性生長(zhǎng)因子在損傷的氣道上皮細(xì)胞中有較高的表達(dá),可以刺激平滑肌細(xì)胞的增生以及細(xì)胞內(nèi)多種蛋白的合成增加,從而引起平滑肌細(xì)胞形態(tài)、功能的改變,故血小板源性生長(zhǎng)因子在哮喘的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要的作用。a-肌動(dòng)蛋白是人氣道平滑肌細(xì)胞的特征性標(biāo)志物,其含量可以反映人氣道平滑肌細(xì)胞的數(shù)量及其收縮能力的改變。作為最具代表性的mRNA結(jié)合蛋白,HuR可與目的蛋白mRNA 3'UTR的AREs結(jié)合,從細(xì)胞核穿梭入細(xì)胞質(zhì),使mRNA翻譯增加,下游蛋白表達(dá)量增加；研究表明,α-肌動(dòng)蛋白mRNA的3’端也存在AREs,所以我們猜測(cè),HuR蛋白可能與α-SMA mRNA 3'UTR的AREs結(jié)合,增強(qiáng)其穩(wěn)定性,從而增加a-SMA蛋白量的表達(dá)。本研究采用體外培養(yǎng)人氣道平滑肌細(xì)胞的方法,應(yīng)用血小板源性刺激因子刺激模擬哮喘的病理狀態(tài),觀察HuR蛋白對(duì)人氣道平滑肌細(xì)胞中α-SMMA表達(dá)的影響。研究方法：1.分組：①PDGF 0 h組；②PDGF 6 h組；③PDGF 12 h組；④PDGF 24 h組； ⑤siRNA+PDGF 0 h組；⑥siRNA+PDGF 12 h組；⑦consiRNA+PDGF 0 h組； ⑧consiRNA+PDGF 12 h組；2.應(yīng)用Western blot,檢測(cè)血小板源性刺激因子刺激后,人氣道平滑肌細(xì)胞中人抗原R蛋白、α-SMA蛋白的水平。3.應(yīng)用RT-PCR方法,檢測(cè)各組人氣道平滑肌細(xì)胞中HuR及α-SMA的RNA水平。4.使用siRNA沉默HuR蛋白,研究血小板源性刺激因子對(duì)人氣道平滑肌細(xì)胞中α-SMA表達(dá)的影響。結(jié)果：血小板源性刺激因子呈時(shí)間依懶性增強(qiáng)細(xì)胞內(nèi)HuR及α-SMA的表達(dá),各組細(xì)胞HuR蛋白及mRNA相對(duì)表達(dá)量分別為：①PDGF刺激0 h組：0.23±0.09、1.00±0.00: ②PDGF刺激6 h組：0.42±0.11、1.09±0.03：③PDGF刺激12 h組：0.93±0.21、1.16±0.03；④PDGF刺激24 h組：1.37±0.28、1.27±0.02；(均P0.05)；各組α-SMA蛋白以及mRNA相對(duì)表達(dá)量分別為：①PDGF刺激0 h組：1.03±0.08、1.00±0.00；②PDGF刺激6 h組：1.20±0.09、1.17±0.02；③PDGF刺激12 h組：1.39±0.11、1.23±0.02；④PDGF刺激24 h組：1.58±0.10、1.45±0.03；(均P0.05)。siRNA特異沉默HuR后,α-SMA表達(dá)量也相應(yīng)減弱。HuR沉默后,平滑肌細(xì)胞中PDGF誘導(dǎo)的α-SMA的表達(dá)減少,HuR及α-SMA的蛋白相對(duì)表達(dá)量分別為：consiRNA+PDGF 0 h組：1.20±0.11、0.344±0.07；consiRNA+PDGF 12 h組：1.50±0.10、0.82±0.12; siHuR+PDGF 0h組：1.23±0.13、0.37±0.09；siHuR+PDGF12h組：0.89±0.11、0.35±0.08。siHuR+PDGF0h組與consiRNA+PDGF 0 h組HuR及α-SMA蛋白相對(duì)表達(dá)量差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P0.05),而特異的HuR干擾RNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞能顯著降低HuR的表達(dá),siHuR+PDGF 12h組HuR蛋白相對(duì)表達(dá)量顯著低于consiRNA+PDGF 12h組(P0.05)；同時(shí)PDGF誘導(dǎo)的a-SMA蛋白表達(dá)升高受到顯著抑制,siHuR+PDGF 12h組α-SMA蛋白相對(duì)表達(dá)量低于consiRNA+PDGF 12h組(P0.05)。結(jié)論：1.PDGF刺激可增力HBSMC中HuR及α-SMA的表達(dá)；2.HuR參與PDGF誘導(dǎo)的α-SMA表達(dá)過(guò)程。
【關(guān)鍵詞】：人抗原 氣道平滑肌細(xì)胞 血小板源性生長(zhǎng)因子 α-肌動(dòng)蛋白
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R56
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 符號(hào)說(shuō)明10-11
• 前言11-16
• 材料與方法16-27
• 結(jié)果27-28
• 附圖28-32
• 討論32-39
• 結(jié)論39-40
• 參考文獻(xiàn)40-44
• 致謝44-45
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文45-46
• 學(xué)位論文評(píng)閱及答辯情況表46

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本文編號(hào)：1107005