本文關(guān)鍵詞：KLOTHO在人支氣管上皮細(xì)胞炎癥和氧化損傷中的作用及機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： 支氣管上皮細(xì)胞 香煙 炎癥 氧化應(yīng)激 Klotho

【摘要】：【目的】人Klotho(KL)是一種對(duì)炎癥和氧化損傷有保護(hù)作用的抗衰老蛋白,我們前期結(jié)果已經(jīng)證明KL在人肺組織主要沿氣道上皮分布,且KL蛋白含量在吸煙者和慢性阻塞性肺病患者肺組織中依次降低。本研究旨在進(jìn)一步探索KL蛋白人氣道上皮細(xì)胞中的表達(dá)、作用及相關(guān)調(diào)控機(jī)制�！痉椒ā矿w外培養(yǎng)人支氣管上皮細(xì)胞(16HBE),將香煙提取物(CSE)或腫瘤壞死因子-α(TNF-α)與細(xì)胞共培養(yǎng),采用RT-PCR、蛋白印記(WB)及酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)方法分別檢測(cè)KL的表達(dá)及分泌,研究吸煙及炎癥對(duì)細(xì)胞內(nèi)KL表達(dá)含量的影響;以小干擾RNA(small interference RNA,si RNA)抑制對(duì)胞內(nèi)KL基因轉(zhuǎn)錄,CSE或過氧化氫(H2O2)刺激16HBE,分別用實(shí)時(shí)定量PCR(Real time PCR,RT-PCR)、酶聯(lián)免疫吸附劑試驗(yàn),Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)檢測(cè)細(xì)胞因子(IL-8、IL-6、MCP-1)m RNA水平及蛋白分泌水平;流式細(xì)胞術(shù)衡量細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷和凋亡水平;同時(shí)免疫熒光、蛋白印記雜交(Western Blot是,WB)方法對(duì)KL相關(guān)通路進(jìn)行探索。【結(jié)果】CSE和TNF-α能夠抑制氣道上皮細(xì)胞中KL的表達(dá),并減少其分泌(P0.05),同時(shí)還伴隨促炎因子釋放增多(P0.05),核因子κB(NF-κB)通路抑制劑JSH23可明顯逆轉(zhuǎn)TNF-α的這種作用(P0.05);KL si RNA可顯著降低細(xì)胞內(nèi)KL的m RNA和蛋白表達(dá)水平,胞內(nèi)炎癥細(xì)胞因子(IL-8、IL-6、MCP-1)m RNA水平表達(dá)增加、細(xì)胞活力降低以及凋亡比率增加(P0.05);在CSE刺激下,胞內(nèi)KL表達(dá)不足可提高炎癥因子(IL-8)的表達(dá)和分泌水平,并加劇相關(guān)炎癥通路(主要為NF-κB和ERK1/2通路)的異�；罨�(P0.05);此外,KL缺失的細(xì)胞對(duì)H2O2誘導(dǎo)的氧化損傷也更為敏感,表現(xiàn)為細(xì)胞活力降低、活性氧簇(ROS)產(chǎn)生增多以及細(xì)胞凋亡加劇(P0.05),這可能與蛋白激酶B(Akt/PKB)、細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶(ERK1/2)和p38 MAPK通路的異�；罨约凹�(xì)胞內(nèi)抗氧化核轉(zhuǎn)錄因子NRF2過度消耗有關(guān)(P0.05)�！窘Y(jié)論】在慢性阻塞性肺病形成過程中,氣道上皮內(nèi)KL表達(dá)降低參與了氧化應(yīng)激、炎癥、凋亡等重要病理過程。我們的結(jié)果不僅是對(duì)同領(lǐng)域研究成果的補(bǔ)充,并且為抑制加速衰老以及逆轉(zhuǎn)COPD肺老化的自然發(fā)展開拓了新視野。
【關(guān)鍵詞】：支氣管上皮細(xì)胞 香煙 炎癥 氧化應(yīng)激 Klotho
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R563.9
【目錄】：

• 主要英文縮略語詞表5-7
• 中文摘要7-9
• Abstract9-11
• 引言11-12
• 材料與方法12-22
• 結(jié)果22-34
• 討論34-39
• 小結(jié)39-40
• 本研究的不足之處40-41
• 參考文獻(xiàn)41-46
• 附錄 綜述46-59
• 參考文獻(xiàn)53-59
• 在讀期間文章發(fā)表情況59-60
• 致謝60

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本文編號(hào)：1102458