本文關(guān)鍵詞：IL-33在慢性阻塞性肺疾病發(fā)病機(jī)制中的作用研究

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【摘要】：目的：慢性阻塞性肺疾病(COPD)是一種肺部慢性炎癥性疾病,其特征是炎癥細(xì)胞活化和炎癥介質(zhì)的釋放。白細(xì)胞介素-33(IL-33)是具有免疫調(diào)節(jié)作用的白細(xì)胞介素-1(IL-1)家族新成員,在各種炎癥和免疫疾病中起著重要作用,但I(xiàn)L-33是否參與COPD發(fā)病機(jī)制仍不清楚。本部分實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑谟谔接慖L-33及其受體ST2和IL-1受體輔助蛋白(IL-1RAcP)在COPD患者中的表達(dá)水平。 方法：應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)112例COPD患者和115例對(duì)照組血漿IL-33、ST2、IL-1RAcP的濃度,并用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血細(xì)胞IL-33表達(dá)情況；將12例因肺部非腫瘤性疾病行肺葉切除術(shù)患者按肺功能情況分為COPD組(6例)和對(duì)照組(6例),用免疫熒光染色法檢測(cè)氣道IL-33的表達(dá)情況,并用Western Blot方法對(duì)氣道組織中IL-33蛋白水平進(jìn)行分析。 結(jié)果：與對(duì)照組相比,COPD組血漿IL-33、ST2、IL-1RAcP濃度均升高,外周血中IL-33主要由淋巴細(xì)胞表達(dá),COPD組IL-33陽(yáng)性淋巴細(xì)胞比例明顯高于對(duì)照組,中性粒細(xì)胞中IL-33陽(yáng)性比例較低,兩組無(wú)顯著性差異。IL-33在肺內(nèi)主要表達(dá)在氣道上皮細(xì)胞,COPD組平均熒光強(qiáng)度高于對(duì)照組,且COPD組氣道組織中IL-33蛋白水平較對(duì)照組明顯升高。 結(jié)論：IL-33、ST2和IL-1Racp在COPD患者中的表達(dá)均升高,且IL-33主要來(lái)源于外周血淋巴細(xì)胞和氣道上皮細(xì)胞。 目的：吸煙是COPD發(fā)病的重要危險(xiǎn)因素,香煙中的有害成分刺激機(jī)體產(chǎn)生多種炎癥介質(zhì),參與COPD的發(fā)生和進(jìn)展,香煙煙霧是否可以直接誘導(dǎo)IL-33的表達(dá)尚不清楚,因此,研究香煙煙霧對(duì)IL-33表達(dá)和釋放的影響是本部分實(shí)驗(yàn)的目的。 方法：12只小鼠隨機(jī)被分為對(duì)照組和熏煙組；熏煙組小鼠分別暴露于香煙煙霧中8個(gè)月,用HE染色法觀察肺組織形態(tài)學(xué)改變,Real-time PCR法檢測(cè)小鼠PBMCs中IL-33和ST2的轉(zhuǎn)錄,ELISA方法檢測(cè)小鼠血漿IL-33和ST2的釋放,Western Blot法檢測(cè)小鼠氣道中IL-33的蛋白表達(dá)量；培養(yǎng)HBE細(xì)胞,分成4組：對(duì)照組(CM組),CSE組,LPS組,CSE+LPS組；Western Blot法檢測(cè)各組IL-33的表達(dá)水平,ELISA方法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-33水平,Annexin V-FITC/PI雙染法流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞的損傷和凋亡。 結(jié)果：與對(duì)照組相比,熏煙組小鼠肺泡間隔破壞明顯；熏煙組小鼠PBMCs的IL-33和ST2基因轉(zhuǎn)錄水平和血漿IL-33和ST2濃度較對(duì)照組升高,熏煙組小鼠氣道中IL-33的蛋白表達(dá)也明顯升高；另外,體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證實(shí)CSE和LPS能夠刺激HBEs IL-33表達(dá)增加,細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-33的濃度也呈現(xiàn)相應(yīng)的增高趨勢(shì)。 結(jié)論：吸煙可以刺激IL-33在機(jī)體內(nèi)的表達(dá)和釋放,在體外條件下,CSE和LPS能夠促HBE中IL-33表達(dá)和釋放。 目的：探討TLR4是否參與調(diào)節(jié)香煙煙霧致IL-33的表達(dá),研究TLR4基因單核苷酸多態(tài)性與吸煙者IL-33的差異表達(dá)的關(guān)系。 方法：24只小鼠隨機(jī)分為4組：對(duì)照組,TAK242腹腔注射組,香煙煙霧暴露組,TAK242腹腔注射+香煙煙霧暴露組,每組6只；Western blot法檢測(cè)TLR4和IL-33在小鼠氣道中的蛋白表達(dá)量,Real-time PCR法檢測(cè)小鼠PBMCs TLR4和IL-33基因的轉(zhuǎn)錄水平；培養(yǎng)HBE細(xì)胞,分成6組：對(duì)照組,TAK242組,CSE組,CSE+TAK242組,LPS組,LPS+TAK242組,Real-time PCR法和Western Blot法檢測(cè)各組IL-33和TLR4的基因轉(zhuǎn)錄和蛋白表達(dá)。測(cè)序法檢測(cè)20例吸煙健康者和20例吸煙COPD患者中TLR4基因rs4986790、rs4986791和rs11536889位點(diǎn)多態(tài)性。 結(jié)果：動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中,與對(duì)照組相比,小鼠氣道組織中TIL4和IL-33的蛋白表達(dá)水平在S組顯著升高,小鼠PBMCs TLR4和IL-33的基因轉(zhuǎn)錄水平在S組也明顯升高,且TAK242可以明顯抑制香煙煙霧暴露小鼠氣道和PBMCs中IL-33的表達(dá)。體外細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中,與對(duì)照組比較,CSE可以誘導(dǎo)HBEs TLR4mRNA轉(zhuǎn)錄和蛋白表達(dá)水平增加,且TAK242可以明顯抑制CSE和LPS誘導(dǎo)的IL-33表達(dá)。TLR4基因單核苷酸多態(tài)性檢測(cè)結(jié)果顯示：在所有研究對(duì)象中,rs4986790位點(diǎn)和rs4986791位點(diǎn)均未發(fā)現(xiàn)等位基因,健康吸煙者組和COPD患者組之間rs11536889位點(diǎn)等位基因的頻率無(wú)顯著性差異,兩組中來(lái)自rs11536889位點(diǎn)GG基因型的受試者與來(lái)自CG基因型的受試者血漿IL-33蛋白水平比較均未見(jiàn)顯著性差異。 結(jié)論：TLR4參與香煙煙霧誘導(dǎo)的IL-33表達(dá)調(diào)控,TLR4基因單核苷酸多態(tài)性可能與吸煙者IL-33的差異表達(dá)無(wú)關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：慢性阻塞性肺疾病 白細(xì)胞介素-33 ST2 IL-1受體輔助蛋白 慢性阻塞性肺疾病 白細(xì)胞介素-33 ST2 香煙煙霧提取物 人支氣管上皮細(xì)胞 慢性阻塞性肺疾病 白細(xì)胞介素-33 ST2 香煙煙霧提取物 人支氣管上皮細(xì)胞 TLR4
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R563.9
【目錄】：

• 前言7-10
• 中文摘要10-13
• ABSTRACT13-17
• 第一部分 白介素-33及其受體在慢性阻塞性肺疾病患者中的表達(dá)變化17-38
• 1. 材料和方法18-26
• 2. 結(jié)果26-27
• 3. 討論27-30
• 參考文獻(xiàn)30-34
• 圖表34-38
• 第二部分 香煙煙霧促進(jìn)慢性阻塞性肺疾病中IL-33的表達(dá)和釋放38-56
• 1. 材料和方法39-46
• 2. 結(jié)果46-47
• 3. 討論47-49
• 參考文獻(xiàn)49-51
• 圖表51-56
• 第三部分 TLR4在香煙煙霧致IL-33表達(dá)增高中的作用56-77
• 1. 材料和方法57-65
• 2. 結(jié)果65-66
• 3 討論66-69
• 參考文獻(xiàn)69-72
• 圖表72-77
• 綜述 IL-33在疾病中作用的研究進(jìn)展77-89
• 參考文獻(xiàn)83-89
• 附錄1 英文縮略詞表89-90
• 附錄2 攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表的論文90-91
• 致謝91

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本文編號(hào)：1084544