發(fā)布時間：2017-10-18 12:10

  本文關(guān)鍵詞：MLN4924對博來霉素誘導的小鼠肺纖維化的干預作用及機制研究

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【摘要】：肺纖維化是一種嚴重危害人類健康的疾病,通常是由于嚴重的外部創(chuàng)傷,感染,自發(fā)免疫反應,藥物不良副反應等因素,引起肺的永久性損傷,導致肺泡外基質(zhì)反復破壞,過度修復重建并沉積,最終導致正常肺組織結(jié)構(gòu)改變、功能喪失。肺纖維化發(fā)病過程是一個復雜的病理過程,每個過程有多種細胞及細胞因子參與其中,目前其發(fā)病機理尚未完全闡釋清楚。以往人們對于肺纖維化治療和發(fā)病機制研究大多主要集中于纖維化形成過程中起主要作用的成肌纖維細胞的增殖,凋亡和活化等方面,近年來大量的臨床與實驗研究證實在肺纖維化的形成過程中支氣管肺泡灌洗液BALF中的炎癥細胞、細胞因子、蛋白和酶異常增多,它們與肺組織細胞之間的相互作用在肺纖維化形成過程中具有重要作用,提示我們抑制早期炎癥反應可能也是預防纖維化形成的一種有效手段。MLN4924是最近報道的一種選擇性NEDD8活化酶(NAE)的小分子抑制劑,它是AMP類似物,主要通過與NAE形成NAE-MLN4924復合物抑制NAE活性,從而抑制了部分依賴于Cullin-Ring E3 ligase (CRL)酶的蛋白質(zhì)泛素化降解途徑(Neddylation),由此導致了此類蛋白質(zhì)的積聚,CRL的底物蛋白包括DNA復制剪切蛋白CDT1,ORC1,細胞周期抑制因子如p21,p27,Wee1。此前,關(guān)于MLN4924的研究報道多集中于其通過阻滯癌細胞周期或者引起細胞凋亡而發(fā)揮其抗腫瘤特性(6),而關(guān)于其在炎癥反應中的作用知之甚少,通過查閱文獻我們發(fā)現(xiàn)CRL的底物包括NF-KB抑制因子IκB-α,提示我們MLN4924在炎癥反應中應該有一定作用。本研究選取已經(jīng)證明具有抗腫瘤活性的MLN4924,通過建立小鼠急性肺損傷,肺纖維化疾病模型,探究MLN4924對于肺纖維化的治療作用及其具體機制。本論文主要通過以下幾個部分進行論述：1.MLN4924可以有效抑制博來霉素誘導的小鼠肺纖維化病變在本研究中,我們對C57BL/6小鼠氣管滴注博來霉素進行肺纖維化疾病模型造模。在滴注后第二天進行腹腔注射MLN4924干預治療,第28天處死小鼠,收集肺組織,右肺行蘇木精-伊紅(HE)和Masson三色染色,觀察肺部形態(tài)改變,并進行病理評分,左肺經(jīng)酸解法檢測肺組織羥脯氨酸(HYP)含量。實驗結(jié)果表明,與對照組相比,用MLN4924進行干預可以明顯改善博來霉素引起的小鼠肺泡炎、肺纖維化癥狀。2.MLN4924抑制博來霉素誘導的小鼠肺纖維化早期急性肺損傷在本研究中,我們利用氣管滴注LPS建立小鼠急性肺損傷模型,滴注LPS后進行腹腔注射MN4924進行干預治療,在不同時間點對實驗小鼠小鼠放血處死,收集標本,進行肺部蘇木精-伊紅(HE)染色,檢測肺部干濕比(W/D),同時行支氣管肺泡灌洗,檢測肺泡灌洗液(BALF)中總蛋白含量,有核細胞細胞總數(shù),中性粒細胞數(shù)目,巨噬細胞數(shù)目。各項生理指標和實驗結(jié)果表明,MLN4924可以有效減輕LPS誘導的小鼠急性肺損傷。3.MLN4924抑制小鼠急性肺損傷的分子機制眾所周知,核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB在炎癥反應中發(fā)揮著極其重要的調(diào)控作用,而其抑制劑IκBα是CRL的底物,因此我們很容易想到MLN4924對于肺纖維化早期炎癥的抑制作用與NF-κB通路有一定的關(guān)系,同時MAPK信號通路在免疫應答中也發(fā)揮著重要作用。在本節(jié)中,我們著重探究MLN4924在炎癥階段對于NF-κB和MAPK信號通路的影響。通過免疫印跡實驗我們驚喜地發(fā)現(xiàn),MLN4924處理后在免疫細胞和上皮細胞中均可以顯著抑制IκB-α的降解,從而抑制了NF-κB信號通路的活性,同時在上皮細胞中MLN4924還可以抑制MAPK信號通路中p38的磷酸化,從而抑制了肺損傷過程中MAPK信號的通路的活化。綜上所述,我們得出以下實驗結(jié)論：1.MLN4924通過抑制肺損傷早期的炎癥反應從而減緩后期的肺纖維化病變2.MLN4924通過影響NF-κB信號通路調(diào)控對于肺損傷引起的炎癥反應
【關(guān)鍵詞】：MLN4924 肺纖維化 急性肺損傷 NF-κB
【學位授予單位】：華東師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R563
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• ABSTRACT7-11
• 第一章 研究背景和文獻綜述11-22
• 一、肺纖維化概述11-12
• 二.肺纖維化發(fā)病機制12-22
• 1. 細胞因子失調(diào)在肺纖維化中的作用13-16
• 2. 參與肺纖維化的相關(guān)細胞16-20
• 3. 現(xiàn)有的肺纖維化治療方法20-22
• 第二章 材料與方法22-38
• 一、實驗材料22-26
• 二、常用試劑的配置方法26-28
• 三.實驗方法與實驗操作28-38
• 第三章 實驗結(jié)果及分析38-62
• 第一節(jié) MLN4924可以抑制博來霉素誘導的小鼠肺纖維化38-42
• 第二節(jié) MLN4924不影響TGF-β1介導的EMT過程42-45
• 第三節(jié) MLN4924抑制LPS引起的小鼠急性肺損傷45-51
• 第四節(jié) MLN4924對中性粒細胞凋亡的影響51-53
• 第五節(jié) MLN4924抑制炎癥過程中巨噬細胞炎性細胞因子的表達53-56
• 第六節(jié) MLN4924對肺上皮細胞趨化因子的影響56-58
• 第七節(jié) MLN4924對于NF-κB信號通路的影響58-62
• 縮略詞表62-64
• 參考文獻64-66
• 致謝66-68

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8 楊s，

本文編號：1054851