本文關(guān)鍵詞：MLN4924對博來霉素誘導(dǎo)的小鼠肺纖維化的干預(yù)作用及機(jī)制研究

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【摘要】：肺纖維化是一種嚴(yán)重危害人類健康的疾病,通常是由于嚴(yán)重的外部創(chuàng)傷,感染,自發(fā)免疫反應(yīng),藥物不良副反應(yīng)等因素,引起肺的永久性損傷,導(dǎo)致肺泡外基質(zhì)反復(fù)破壞,過度修復(fù)重建并沉積,最終導(dǎo)致正常肺組織結(jié)構(gòu)改變、功能喪失。肺纖維化發(fā)病過程是一個復(fù)雜的病理過程,每個過程有多種細(xì)胞及細(xì)胞因子參與其中,目前其發(fā)病機(jī)理尚未完全闡釋清楚。以往人們對于肺纖維化治療和發(fā)病機(jī)制研究大多主要集中于纖維化形成過程中起主要作用的成肌纖維細(xì)胞的增殖,凋亡和活化等方面,近年來大量的臨床與實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)在肺纖維化的形成過程中支氣管肺泡灌洗液BALF中的炎癥細(xì)胞、細(xì)胞因子、蛋白和酶異常增多,它們與肺組織細(xì)胞之間的相互作用在肺纖維化形成過程中具有重要作用,提示我們抑制早期炎癥反應(yīng)可能也是預(yù)防纖維化形成的一種有效手段。MLN4924是最近報(bào)道的一種選擇性NEDD8活化酶(NAE)的小分子抑制劑,它是AMP類似物,主要通過與NAE形成NAE-MLN4924復(fù)合物抑制NAE活性,從而抑制了部分依賴于Cullin-Ring E3 ligase (CRL)酶的蛋白質(zhì)泛素化降解途徑(Neddylation),由此導(dǎo)致了此類蛋白質(zhì)的積聚,CRL的底物蛋白包括DNA復(fù)制剪切蛋白CDT1,ORC1,細(xì)胞周期抑制因子如p21,p27,Wee1。此前,關(guān)于MLN4924的研究報(bào)道多集中于其通過阻滯癌細(xì)胞周期或者引起細(xì)胞凋亡而發(fā)揮其抗腫瘤特性(6),而關(guān)于其在炎癥反應(yīng)中的作用知之甚少,通過查閱文獻(xiàn)我們發(fā)現(xiàn)CRL的底物包括NF-KB抑制因子IκB-α,提示我們MLN4924在炎癥反應(yīng)中應(yīng)該有一定作用。本研究選取已經(jīng)證明具有抗腫瘤活性的MLN4924,通過建立小鼠急性肺損傷,肺纖維化疾病模型,探究MLN4924對于肺纖維化的治療作用及其具體機(jī)制。本論文主要通過以下幾個部分進(jìn)行論述：1.MLN4924可以有效抑制博來霉素誘導(dǎo)的小鼠肺纖維化病變在本研究中,我們對C57BL/6小鼠氣管滴注博來霉素進(jìn)行肺纖維化疾病模型造模。在滴注后第二天進(jìn)行腹腔注射MLN4924干預(yù)治療,第28天處死小鼠,收集肺組織,右肺行蘇木精-伊紅(HE)和Masson三色染色,觀察肺部形態(tài)改變,并進(jìn)行病理評分,左肺經(jīng)酸解法檢測肺組織羥脯氨酸(HYP)含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,與對照組相比,用MLN4924進(jìn)行干預(yù)可以明顯改善博來霉素引起的小鼠肺泡炎、肺纖維化癥狀。2.MLN4924抑制博來霉素誘導(dǎo)的小鼠肺纖維化早期急性肺損傷在本研究中,我們利用氣管滴注LPS建立小鼠急性肺損傷模型,滴注LPS后進(jìn)行腹腔注射MN4924進(jìn)行干預(yù)治療,在不同時(shí)間點(diǎn)對實(shí)驗(yàn)小鼠小鼠放血處死,收集標(biāo)本,進(jìn)行肺部蘇木精-伊紅(HE)染色,檢測肺部干濕比(W/D),同時(shí)行支氣管肺泡灌洗,檢測肺泡灌洗液(BALF)中總蛋白含量,有核細(xì)胞細(xì)胞總數(shù),中性粒細(xì)胞數(shù)目,巨噬細(xì)胞數(shù)目。各項(xiàng)生理指標(biāo)和實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,MLN4924可以有效減輕LPS誘導(dǎo)的小鼠急性肺損傷。3.MLN4924抑制小鼠急性肺損傷的分子機(jī)制眾所周知,核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB在炎癥反應(yīng)中發(fā)揮著極其重要的調(diào)控作用,而其抑制劑IκBα是CRL的底物,因此我們很容易想到MLN4924對于肺纖維化早期炎癥的抑制作用與NF-κB通路有一定的關(guān)系,同時(shí)MAPK信號通路在免疫應(yīng)答中也發(fā)揮著重要作用。在本節(jié)中,我們著重探究MLN4924在炎癥階段對于NF-κB和MAPK信號通路的影響。通過免疫印跡實(shí)驗(yàn)我們驚喜地發(fā)現(xiàn),MLN4924處理后在免疫細(xì)胞和上皮細(xì)胞中均可以顯著抑制IκB-α的降解,從而抑制了NF-κB信號通路的活性,同時(shí)在上皮細(xì)胞中MLN4924還可以抑制MAPK信號通路中p38的磷酸化,從而抑制了肺損傷過程中MAPK信號的通路的活化。綜上所述,我們得出以下實(shí)驗(yàn)結(jié)論：1.MLN4924通過抑制肺損傷早期的炎癥反應(yīng)從而減緩后期的肺纖維化病變2.MLN4924通過影響NF-κB信號通路調(diào)控對于肺損傷引起的炎癥反應(yīng)
【關(guān)鍵詞】：MLN4924 肺纖維化 急性肺損傷 NF-κB
【學(xué)位授予單位】：華東師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R563
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• ABSTRACT7-11
• 第一章 研究背景和文獻(xiàn)綜述11-22
• 一、肺纖維化概述11-12
• 二.肺纖維化發(fā)病機(jī)制12-22
• 1. 細(xì)胞因子失調(diào)在肺纖維化中的作用13-16
• 2. 參與肺纖維化的相關(guān)細(xì)胞16-20
• 3. 現(xiàn)有的肺纖維化治療方法20-22
• 第二章 材料與方法22-38
• 一、實(shí)驗(yàn)材料22-26
• 二、常用試劑的配置方法26-28
• 三.實(shí)驗(yàn)方法與實(shí)驗(yàn)操作28-38
• 第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析38-62
• 第一節(jié) MLN4924可以抑制博來霉素誘導(dǎo)的小鼠肺纖維化38-42
• 第二節(jié) MLN4924不影響TGF-β1介導(dǎo)的EMT過程42-45
• 第三節(jié) MLN4924抑制LPS引起的小鼠急性肺損傷45-51
• 第四節(jié) MLN4924對中性粒細(xì)胞凋亡的影響51-53
• 第五節(jié) MLN4924抑制炎癥過程中巨噬細(xì)胞炎性細(xì)胞因子的表達(dá)53-56
• 第六節(jié) MLN4924對肺上皮細(xì)胞趨化因子的影響56-58
• 第七節(jié) MLN4924對于NF-κB信號通路的影響58-62
• 縮略詞表62-64
• 參考文獻(xiàn)64-66
• 致謝66-68

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8 楊s，

本文編號：1054851