本文關(guān)鍵詞：miR-155對小鼠膿毒癥急性肺損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究

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【摘要】：目的通過建立膿毒癥急性肺損傷(ALI)小鼠模型,觀察膿毒癥小鼠肺組織內(nèi)miR-155表達(dá)變化,探討其對膿毒癥ALI的影響及機(jī)制。方法1.盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)(CLP)構(gòu)建膿毒癥ALI小鼠模型。實(shí)驗(yàn)分兩組:假手術(shù)對照組(Sham組)和手術(shù)組(CLP組);分別于術(shù)后0h、6h、12h、24h、48h取肺泡灌洗液(BALF)和肺組織標(biāo)本。2.SPF級BALB/c小鼠經(jīng)氣管內(nèi)滴入miR-155agomir轉(zhuǎn)染復(fù)合物,轉(zhuǎn)染后6h、12h、24h、36h、72h收集肺組織標(biāo)本,對照組滴入PBS、Negtive Control(NC);體內(nèi)轉(zhuǎn)染miR-155后1h進(jìn)行CLP術(shù),術(shù)后24h收集BALF和肺組織標(biāo)本。3.分別在光鏡下觀察小鼠肺組織病理改變;計(jì)算肺組織濕干重比值(W/D);采用ELISA檢測BALF中TNF-α、IL-1β水平,RT-q PCR檢測肺組織miR-155表達(dá),western blot檢測肺組織Caspase-1、LC3Ⅱ/Ⅰ、TAB2表達(dá),電鏡下觀察自噬小體數(shù)量。結(jié)果1.光鏡下觀察到Sham組肺泡結(jié)構(gòu)正常,CLP組肺泡結(jié)構(gòu)紊亂、消失,肺泡間隔增厚、斷裂,肺泡內(nèi)可見大量炎癥細(xì)胞浸潤及出血;與Sham組比較,肺組織W/D、Caspase-1表達(dá)和BALF中TNF-α、IL-1β水平均隨著CLP時(shí)間的延長逐漸增加,24h達(dá)到高峰(5.59±0.54vs4.03±0.18、2.15±0.30vs0.93±0.13和2367.35±624.35pg/ml vs 131.89±40.84pg/ml,152.97±52.27pg/ml vs 64.33±20.54pg/ml);miR-155從CLP術(shù)后6h開始時(shí)升高,24h達(dá)到高峰(15.66±2.06vs1.00±0.00);差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。表明CLP術(shù)后24h成功構(gòu)建小鼠膿毒癥ALI模型,且miR-155在膿毒癥ALI小鼠肺內(nèi)表達(dá)上調(diào)。2.轉(zhuǎn)染miR-155 agomir復(fù)合物24h后肺組織勻漿中miR-155表達(dá)倍數(shù)升高至(49.51±8.92)倍,miR-155在體內(nèi)可穩(wěn)定表達(dá)36h;在膿毒癥ALI小鼠肺內(nèi),轉(zhuǎn)染miR-155后,與NC組比較,光鏡下觀察到肺泡間隔增厚減輕、炎癥細(xì)胞浸潤減少,肺組織W/D及BALF中TNF-α、IL-1β水平均明顯下降(5.03±0.15vs5.62±0.52和783.53±229.11pg/mlvs2029.95±766.80pg/ml,109.13±13.10pg/mlvs209.85±50.06pg/ml),肺組織中Caspase-1表達(dá)下調(diào)(1.03±0.06vs0.48±0.26);差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。表明過表達(dá)miR-155能夠減輕膿毒癥ALI肺內(nèi)炎癥反應(yīng)。3.在膿毒癥ALI小鼠肺內(nèi),LC3Ⅱ/Ⅰ表達(dá)增加(2.6±0.20 vs 0.95±0.12),電鏡下觀察到自噬小體增加(4.8±0.84 vs 1.0±0.70);轉(zhuǎn)染miR-155后,在膿毒癥ALI小鼠肺內(nèi)TAB2表達(dá)下調(diào)(0.51±0.07vs1.11±0.13)、LC3Ⅱ/Ⅰ表達(dá)增加(1.89±0.15vs1.00±0.07),自噬小體數(shù)量增加(8.50±0.76vs3.33±0.42);差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。表明miR-155可能通過靶向TAB2上調(diào)膿毒癥ALI小鼠肺內(nèi)自噬。結(jié)論膿毒癥ALI小鼠肺組織中miR-155表達(dá)增加,miR-155可能通過靶向TAB2蛋白,上調(diào)自噬,抑制Caspase-1的表達(dá),減少IL-1β、TNF-α等炎癥因子的釋放,從而減輕膿毒癥ALI。
【關(guān)鍵詞】：微小RNA-155 膿毒癥急性肺損傷 自噬
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R459.7;R563
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-12
• 第1章 引言12-14
• 第2章 材料與方法14-27
• 2.1 主要試劑與儀器14-19
• 2.1.1 主要試劑14-15
• 2.1.2 主要試劑配置15-18
• 2.1.3 主要儀器18-19
• 2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物19
• 2.3 實(shí)驗(yàn)分組及處理19-20
• 2.4 實(shí)驗(yàn)方法及觀察指標(biāo)20-27
• 2.4.1 膿毒癥肺損傷模型建立20
• 2.4.2 體內(nèi)轉(zhuǎn)染20
• 2.4.3 肺組織及肺泡灌洗液收集20
• 2.4.4 HE染色20-21
• 2.4.5 ELISA檢測21
• 2.4.6 Western blot檢測21-22
• 2.4.7 實(shí)時(shí)定量PCR22-26
• 2.4.8 電鏡檢測自噬小體26
• 2.4.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法26-27
• 第3章 結(jié)果27-37
• 3.1 miR-155在膿毒癥ALI小鼠肺內(nèi)表達(dá)上調(diào)27-32
• 3.1.1 CLP術(shù)后 24h能夠構(gòu)建膿毒癥急性肺損傷模型27-31
• 3.1.2 CLP術(shù)后小鼠肺內(nèi)miR-155表達(dá)31-32
• 3.2 miR-155能減輕膿毒癥ALI小鼠肺內(nèi)炎癥反應(yīng)32-34
• 3.2.1 經(jīng)氣道內(nèi)轉(zhuǎn)染miR-155能夠在肺內(nèi)均勻分布32
• 3.2.2 轉(zhuǎn)染miR-155后膿毒癥ALI小鼠肺內(nèi)炎癥反應(yīng)減輕32-34
• 3.3 miR-155減輕膿毒癥ALI小鼠肺內(nèi)炎癥反應(yīng)的機(jī)制34-37
• 3.3.1 CLP術(shù)后小鼠肺內(nèi)自噬表達(dá)上調(diào)34-35
• 3.3.2 過表達(dá)miR-155后膿毒癥ALI小鼠肺內(nèi)自噬上調(diào)35
• 3.3.3 過表達(dá)miR-155后膿毒癥ALI小鼠肺內(nèi)TAB2表達(dá)下調(diào)35-37
• 第4章 結(jié)論37-38
• 第5章 討論38-41
• 致謝41-42
• 參考文獻(xiàn)42-45
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果45-46
• 綜述 microRNAs在急性肺損傷中的研究進(jìn)展46-49
• 參考文獻(xiàn)48-49

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