本文關鍵詞：基于腸道易吸收納米對比劑的大腸腫瘤MR成像研究

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【摘要】：目的以多功能固體脂質納米粒(solid lipid nanoparticles,SLNs)為載體,負載磁共振對比劑釓噴替酸葡甲胺(gadolinium diethylenetriaminepentaacetic acid,Gd-DTPA)及異硫氰酸熒光素(octadecylamine fluorescein isothiocyanate, FITC)而制備的腫瘤易吸收的多功能磁共振(magnetic resonance,MR)納米對比劑,通過該MR納米對比劑體外細胞及動物模型直腸給藥,體外細胞及大腸壁吸收納米對比劑后于SET1WI序列MR增強顯示不同細胞模型、正常腸壁及腫瘤,探討成像機制,以建立大腸腫瘤新型MR成像方法。材料與方法以硬脂酸、FITC及Gd-DTPA為原料,采用乳化-溶劑揮發(fā)法合成Gd-FITC-SLN.首先,通過激光粒度分析儀和掃描電鏡檢測納米顆粒粒徑,Zeta電位分析儀檢測其表面電荷,熒光分光光度計測試其包封率,最后通過加速穩(wěn)定性試驗測試納米材料的穩(wěn)定性,從而完成該材料的表征測試。其次,以人結腸癌細胞(HT29)和小鼠結腸癌細胞(CT26)為細胞研究模型,通過CCK-8,流式細胞術,免疫熒光結合共聚焦激光掃描顯微鏡,完成納米材料的細胞毒性、細胞吸收及亞細胞定位研究；并采用MR成像技術探索細胞水平成像機制。接著,取50只正常C57BL小鼠隨機分成兩組,分別予小鼠Gd-FITC-SLN(10g/Kg體重)或蒸餾水灌腸給藥,觀察實驗組(Gd-FITC-SLN)有無死亡或明顯毒性反應,并于14天后取結腸組織進行組織病理切片,并分析其血液學和血清生化學檢查,以完成納米材料對小鼠體內毒理試驗。然后,動物活體成像部分,通過氧化偶氮甲烷/葡聚糖硫酸鈉(azoxymethane/dextran sulfate sodium, AOM/DSS)誘導雌性C57BL小鼠結腸腫瘤(高級別上皮內瘤變),采用3.0-T高場強MR成像系統(tǒng)(GE, SIGNA HD)與特制鼠類專用線圈,將小鼠分為(1)實驗組Gd-FITC-SLN(40 mg/mL, N=4)與(2)對照組Gd-DTPA (13.92 mg/mL, N=4)兩組,分別進行對比劑直腸灌注,分別于灌腸前、保留灌腸后20分鐘、40分鐘、60分鐘和80分鐘動態(tài)掃描,主要掃描序列為SE Tl WI序列,基本參數(shù)如下：TR/TE,550/15 ms;四個不同的TI(500,650,800,950 ms)便于檢測T1值。最后,取正常大腸壁及病變組織進行組織細胞學分析。結果該納米對比劑平均粒徑220nm, Gd-FITC-SLNs中平均Gd-DTPA負載率為29.76±4.48%(w/w), Gd-DTPA的包封率為55.00%。兩種大腸癌細胞CT-26和HT-29細胞在Gd-FITC-SLNs的濃度范圍分別為0-200μg/mL和0-600μg/mL時無明顯細胞毒性(P0.05)；同時這兩種細胞對于Gd-FITC-SLNs有明顯攝取且具有濃度依賴性(P0.001),納米對比劑主要分布在細胞漿內。小鼠體內毒理試驗中,小鼠均沒有死亡或明顯的毒性反應。對于AOM/DSS誘導C57BL小鼠腫瘤模型活體成像,對比劑保留灌腸20分鐘,期間正常腸壁與腫瘤組織對于對比劑均有吸收強化,但兩者強化程度不同,腫瘤強化程度低于正常腸壁。實驗組中結腸腫瘤的信噪比(SNRs)增加了2.29倍,較對照組有顯著強化(P0.001)。共聚焦熒光顯微鏡也證實納米對比劑在腫瘤中的分布有差異,腫瘤包膜下分布較腫瘤實質內多。結論1.負載Gd-DTPA及FITC的固體脂質體納米粒具備腸道易吸收、Gd-DTPA負載量大、高順磁性以及組織學可直接檢測等特點。2.體外不同大腸癌細胞對于該納米對比劑均有明顯快速吸收,可以實現(xiàn)細胞水平成像。3.該納米對比劑細胞及小鼠體內毒理實驗驗證了安全性,有望實現(xiàn)臨床轉化。4.基于固體脂質體納米粒的新型MR大腸成像方法在大腸腫瘤模型中的應用表明該方法具有可行性,并有助于腫瘤早期診斷,開辟一種新型分子MR成像方法。
【關鍵詞】：固體脂質納米粒 釓噴替酸葡甲胺 異硫氰酸熒光素 磁共振成像 高級別上皮內瘤變
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R445.2;R735.34
【目錄】：

• 致謝4-5
• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-11
• 專業(yè)術語和縮寫詞表11-13
• 前言13-16
• 第一章 材料與方法16-24
• 第二章 結果24-39
• 第三章 討論39-42
• 第四章 結論42-43
• 參考文獻43-48
• 文獻綜述48-59
• 參考文獻54-59
• 個人簡歷59-60

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 Antonio Facciorusso;Matteo Antonino;Marianna Di Maso;Michele Barone;Nicola Muscatiello;;Non-polypoid colorectal neoplasms:Classification,therapy and follow-up[J];World Journal of Gastroenterology;2015年17期

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本文編號：957115