本文關(guān)鍵詞：鈴蟾肽標(biāo)記的氧化釓納米微粒的制備及其靶向成像實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：背景：前列腺癌是嚴(yán)重威脅人類健康的一種惡性腫瘤,在歐美男性中高發(fā),據(jù)美國(guó)癌癥協(xié)會(huì)統(tǒng)計(jì),2014年,男性腫瘤患者中,前列腺癌發(fā)病率居第一,為27%。前列腺癌早期癥狀不明顯或者沒有特異性,早期診斷困難,而早期診斷對(duì)治療效果和預(yù)后有著重要意義,目前主要通過(guò)直腸指診、前列腺特異性抗原生化指標(biāo),影像學(xué)檢查方法如超聲,CT和磁共振來(lái)做出診斷,目前的檢查方法對(duì)于早期診斷的敏感性和特異性不足,確診時(shí)多已為晚期。早期診斷對(duì)成像技術(shù)和方法提出了更高的要求。近年來(lái),分子影像學(xué)和納米技術(shù)的進(jìn)步使得多模態(tài)的納米材料有了較快的發(fā)展,可用于腫瘤的發(fā)現(xiàn)、診斷和治療。特異性分子靶點(diǎn)的發(fā)現(xiàn)、高親和力分子探針的設(shè)計(jì)及合成是推動(dòng)分子影像學(xué)發(fā)展的動(dòng)力。另外,由于腫瘤組織血管結(jié)構(gòu)不同而引起的增強(qiáng)的通透性及滯留效應(yīng)(EPR),有利于納米材料在腫瘤組織的富集。理想的分子探針為特異性強(qiáng)、成像質(zhì)量好,對(duì)比度高,生物安全性好的納米材料。胃泌素釋放肽受體(Gastrin releasing peptide receptor, GRPr)是一種G蛋白偶聯(lián)受體,在前列腺癌細(xì)胞,乳腺癌細(xì)胞等許多腫瘤細(xì)胞表面高表達(dá)。GRPr在前列腺癌細(xì)胞表面高表達(dá),而正常前列腺細(xì)胞和良性前列腺增生組織則不表達(dá)GRPr。鈴蟾肽(bombesin,BBN),是一個(gè)含有14個(gè)氨基酸殘基的多肽,由于其與27肽的胃泌素釋放肽的有著相似的結(jié)構(gòu),因此對(duì)于GRPr有著很高的親和力和特異性�？梢杂米鞣肿佑跋駥W(xué)的一個(gè)靶點(diǎn)。目前BBN及其類似物已經(jīng)開始用于GRPr陽(yáng)性的腫瘤的研究。氧化釓納米顆粒,在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域已有應(yīng)用,由于其實(shí)是順磁性物質(zhì),可以是縮短T1弛豫時(shí)間,可作為MR陽(yáng)性對(duì)比劑,在增強(qiáng)對(duì)比度的同時(shí)還可以與多種配體連接,可用于多模態(tài)活體成像。在本研究中,我們嘗試合成以GRPr為靶點(diǎn),鈴蟾肽BBN修飾、帶熒光標(biāo)記的順磁性雙模態(tài)納米微粒Gd2O3-FI-PEG-BBN,并且對(duì)所制備的Gd2O3-FI-PEG-BBN納米微粒的理化特性、細(xì)胞毒性、體外主動(dòng)靶向PC-3細(xì)胞以及體內(nèi)MR成像的效果等進(jìn)行了初步評(píng)價(jià),通過(guò)表面修飾使納米微粒能同時(shí)發(fā)揮順磁性及熒光對(duì)比劑的作用,可實(shí)現(xiàn)光學(xué)-MR雙模態(tài)成像的對(duì)比增強(qiáng),有利于早期診斷前列腺腫瘤及其轉(zhuǎn)移灶,也為實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)藥物療效與體內(nèi)分布情況等探索新的途徑。目的：1.制備鈴蟾肽和熒光素雙標(biāo)記的氧化釓納米微粒Gd2O3-FI-PEG-BBN,來(lái)作為一種靶向的MRI對(duì)比劑,并對(duì)其理化性質(zhì)進(jìn)行測(cè)定和評(píng)價(jià)。2.培養(yǎng)胃泌素釋放肽受體(GRPr)陽(yáng)性的人前列腺癌細(xì)胞系PC-3,評(píng)價(jià)Gd2O3-FI-PEG-BBN納米微粒的細(xì)胞毒性和體外靶向前列腺癌細(xì)胞的有效性。3.制備前列腺癌荷瘤裸鼠模型,探討Gd2O3-FI-PEG-BBN納米微粒活體腫瘤靶向成像的可能性和體內(nèi)成像的特點(diǎn)材料和方法：1.合成和評(píng)價(jià)1.1合成1.1.1 Gd2O3納米微粒的制備：取Gd(OAC)3 (670 mg,2 mmol)溶解在30 mLDMSO中,攪拌均勻后緩慢滴加四甲基氫氧化銨(TMAH,200 mg,5.6mmol)和10 mL無(wú)水乙醇混合物。溶液室溫下攪拌2h后離心分離,固體用乙醇洗滌三次得到Gd2O3。1.1.2 Gd2O3-FI的制備：取Gd2O3 (400mg)分散在DMSO中,加入5(6)-羧基熒光素(100mg),室溫下攪拌12h后離心分離,固體分別用DMSO,乙醇和二氯甲烷洗滌三次得到熒光素表面修飾的Gd203。1.1.3 Gd2O3-FI-PEG的制備：取Gd2O3-FI (200mg)分散在DMSO中,加入a-羧基,w-羥基聚乙二醇(分子量2000)(100mg),室溫下攪拌12h后離心分離,固體分別用DMSO,乙醇和二氯甲烷洗滌三次得到PEG和熒光素表面修飾的Gd2O3。1.1.4Gd2O3-FI-PEG-BBN的制備：采用傳統(tǒng)的FMOC固相合成方法合成的鈴蟾肽BBN(7-14),取Gd2O3-FI-PEG(100mg)分散在DMSO中,加入BBN (20mg), EDC.HCl (20mg)和4-二甲氨基吡啶DMAP (10mg),室溫下攪拌12h后離心分離,固體分別用DMSO,乙醇和二氯甲烷洗滌三次得到攜BBN、PEG和熒光素表面修飾的Gd2O3。1.2評(píng)價(jià)和表征1.2.1采用TEM觀察Gd2O3-FI-PEG-BBN納米微粒形態(tài)、大小Gd2O3-FI-PEG-BBN納米微粒用去離子水稀釋后,滴于敷有雙面支撐膜的銅網(wǎng)上,靜置約5分鐘后,用濾紙小片從銅網(wǎng)邊緣吸干多余液體,靜置干燥后,置透射電子顯微鏡下觀察納米微粒子的大小和形態(tài)。1.2.2采用Malvern-3000HS激光粒度分析儀進(jìn)行納米微粒粒徑及分布的測(cè)定用Malvem Zetasizer 3000HS激光散射粒度分析測(cè)定Gd2O3-FI-PEG-BBN納米微粒的粒徑及分布,取5u1,用蒸餾水稀釋至測(cè)量杯中,放入樣品槽中測(cè)試。1.2.3傅里葉變換紅外光譜分析儀(FTIR)分析Gd2O3 and Gd2O3-FI-PEG-BBN納米微粒的紅外光譜將Gd203納米微粒、Gd2O3-FI-PEG-BBN納米微粒懸液滴在硒化鋅窗片上,吹干,用FTIR儀掃描,掃描范圍為4000-400 cm-1。1.2.4通過(guò)熱重力分析(TGA)來(lái)測(cè)定Gd2O3-FI-PEG-BBN的成分取3.0mg Gd2O3-FI-PEG-BBN樣品,使用Netzsch TG 209F1 Iris熱重分析儀,溫度在氮?dú)饬魉俾蕿?00mL/min的條件下,以10℃/min的速率升至710℃。1.2.5不同濃度Gd2O3-FI-PEG-BBN納米微粒MR成像。將Gd2O3-FI-PEG-BBN納米微粒,溶解于去離子水中,配成含Gd濃度分別為0、0.25、0.5、1.0、2.0、4.0mmol/L有濃度梯度的溶液,分裝在7個(gè)EP管中,每管4m1,采用philips 3.0T磁共振,8通道頭線圈進(jìn)行掃描,掃描參數(shù)為：TR：100,200,400,600,800,1000ms, TE:10ms,層厚：4mm,層間距：0.5mm, FOV:120×100×60mm,NSA:2,2. Gd2O3-FI-PEG-BBN腫瘤靶向體外實(shí)驗(yàn)研究選用的GRPr表達(dá)陽(yáng)性的人前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C-3來(lái)自美國(guó)ATCC,用含10%胎牛血清、1%青霉素和鏈霉素雙抗的的DMEM高糖培養(yǎng)液,放入5%CO2、37℃培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。選擇對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)細(xì)胞備用。2.1 Gd2O3-FI-PEG-BBN體外細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)通過(guò)MTT法和PC-3細(xì)胞來(lái)檢測(cè)Gd2O3-FI-PEG和Gd2O3-FI-PEG-BBN納米微粒的毒性。接種3000個(gè)PC-3細(xì)胞／孔于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板上,培養(yǎng)過(guò)夜。細(xì)胞已貼壁,吸去培養(yǎng)液,每孔加入經(jīng)0.45um過(guò)濾器濾過(guò)除菌的Gd2O3-FI-PEG或Gd2O3--FI-PEG-BBN納米微粒培養(yǎng)基懸液,設(shè)6個(gè)濃度梯度,分別為每孔含Gd0.125、0.25、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0mmol/L,每組設(shè)6個(gè)復(fù)孔,僅含培養(yǎng)基無(wú)細(xì)胞的6個(gè)孔作為調(diào)零孔,含等量細(xì)胞的不加藥的完全培養(yǎng)基的6個(gè)孔作為對(duì)照組。分別培養(yǎng)24h和48h后,加MTT (5mg/mL)溶液20μL,繼續(xù)培養(yǎng)4h后吸除培養(yǎng)液,每孔加入150μl DMSO,平板震蕩儀震蕩10min,在酶標(biāo)儀(ELX80,BIOTEK, USA)中測(cè)定490nm波長(zhǎng)處的吸光度值(OD值),按照此公式計(jì)算細(xì)胞存活率：細(xì)胞存活率(%)=(實(shí)驗(yàn)孔OD值-調(diào)零孔OD值)／(對(duì)照孔OD值-調(diào)零孔OD值)×100%。2.2體外靶向攝取實(shí)驗(yàn)2.2.1熒光顯微鏡觀察靶向攝取實(shí)驗(yàn)將PC-3細(xì)胞的單細(xì)胞懸液,調(diào)整細(xì)胞密度,以4×105個(gè)/每孔接種于6孔細(xì)胞培養(yǎng)板上,在5%CO2、37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18h,吸去培養(yǎng)液,分為3組,每組2孔,實(shí)驗(yàn)組每孔加入溶有Gd2O3-FI-PEG-BBN納米微粒(含Gd 0.8 mmol/L)的DMEM完全培養(yǎng)液2m1,對(duì)照組每孔加入溶有Gd2O3-FI-PEG納米微粒(含Gd 0.8 mmol/L)的DMEM完全培養(yǎng)液2m1,空白對(duì)照組每孔加入DMEM完全培養(yǎng)液2m1,繼續(xù)孵育4h后,吸去上清培養(yǎng)液,再用PBS液洗滌三遍,每孔加入4%多聚甲醛溶液0.5m1,固定15min后,用PBS液洗三遍,每孔加入DAPI染液100u1,室溫下染3-5mmin后用PBS液洗三遍,每孔滴加約100u1的PBS液,倒置熒光顯微鏡下觀察標(biāo)記成功率。2.2.2流式細(xì)胞儀證實(shí)靶向攝取實(shí)驗(yàn)將PC-3細(xì)胞的單細(xì)胞懸液,調(diào)整細(xì)胞密度,以4×105個(gè)／每孔接種于6孔細(xì)胞培養(yǎng)板上,在5%C02、37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18h,吸去培養(yǎng)液,分為3組,每組2孔,實(shí)驗(yàn)組每孔加入溶有Gd2O3-FI-PEG-BBN納米微粒(含Gd 0.8 mmol/L)的DMEM完全培養(yǎng)液2m1,對(duì)照組每孔加入溶有Gd2O3-FI-PEG納米微粒(含Gd 0.8 mmol/L)的DMEM完全培養(yǎng)液2m1,空白對(duì)照組每孔加入DMEM完全培養(yǎng)液2m1,繼續(xù)孵育4h后,吸去上層培養(yǎng)基,用PBS洗3遍,取出未結(jié)合的納米微粒,加入胰酶消化,將細(xì)胞按分組收集,離心,細(xì)胞沉淀再用PBS洗2遍,離心,收集細(xì)胞沉淀,用500gL的PBS重懸,流式細(xì)胞儀檢測(cè)分組檢測(cè)熒光強(qiáng)度。2.2.3體外標(biāo)記細(xì)胞的MR成像PC-3細(xì)胞均勻接種于6個(gè)直徑為10cm的培養(yǎng)皿中,培養(yǎng)18h,分為三組,每組2皿,實(shí)驗(yàn)組每皿加入溶有Gd2O3-FI-PEG-BBN納米微粒(含Gd 0.8mM)的DMEM完全培養(yǎng)液6m1,對(duì)照組每皿加入溶有Gd2O3-FI-PEG納米微粒(含Gd 0.8mM)的DMEM完全培養(yǎng)液6m1,空白對(duì)照組每皿加入DMEM完全培養(yǎng)液6ml,37℃,5% CO2條件下孵育4h后用PBS沖洗3遍,胰酶消化1min,離心、收集細(xì)胞沉淀,細(xì)胞沉淀用PBS洗3遍,每皿細(xì)胞計(jì)數(shù)約3.0x106個(gè),將洗凈的細(xì)胞沉淀按分組分別置于3個(gè)1.5ml EP管內(nèi),重懸于500ul 1%的瓊脂糖溶液中,以500u1的僅含1%的瓊脂糖溶液的EP管做空白對(duì)照,將4支EP管編號(hào)并置于試管架上,放在裝有去離子水的水槽中,采用臨床用Philips Achieva 3.0T進(jìn)行磁共振成像,選擇8通道頭部線圈,TSE序列的T1WI。掃描參數(shù)：翻轉(zhuǎn)角90°,TR:500ms, TE:10ms,層厚：4mm,層間距：0mm, FOV:100×60×20mm,NSA：2。測(cè)量每組信號(hào)強(qiáng)度和噪聲,采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件,靶向組、非靶向組和空白對(duì)照組之間的信噪比比較應(yīng)用單向方差分析,兩兩比較采用SNK法,P0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3. Gd2O3-FI-PEG-BBN腫瘤靶向體內(nèi)成像研究3.1建立前列腺癌荷瘤裸鼠模型在無(wú)菌條件下,將含有6×106個(gè)PC-3細(xì)胞的150gL細(xì)胞懸液注射入裸鼠的右側(cè)肩背部皮下,約30天后,腫瘤直徑達(dá)到1.0-2.0cm,隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組(靶向組)和對(duì)照組(非靶向組),備用。3.2腫瘤靶向MRI成像對(duì)兩組荷瘤裸鼠經(jīng)尾靜脈分別注射Gd2O3-FI-PEG-BBN或者Gd2O3-FI-PEG(含Gd 4mmol/L,注射500uL),每只荷瘤裸鼠在注射前、注射后0.5h、1 h、2h、4h、8h和24 h行MR掃描,觀察其對(duì)腫瘤T1WI信號(hào)的影響,探討其用于體內(nèi)腫瘤MR成像的可行性。采用臨床用3.0T磁共振,選擇小鼠線圈,TSE序列的T1WI,俯臥位采集冠狀位圖像,掃描參數(shù)為：TR:500ms, TE:10 ms, FOV:100×100×17mm,層數(shù)：8,層厚：2 mm,層間距：0mm, NSA:3。將采集到的原始數(shù)據(jù)導(dǎo)入Image J軟件進(jìn)行偽彩處理,將采集到的原始數(shù)據(jù),通過(guò)phlips后處理工作站進(jìn)行分析處理,選擇腫瘤顯示最清楚的層面,以腫瘤中心實(shí)行部分作為ROI,測(cè)量腫瘤區(qū)域平掃和增強(qiáng)后不同時(shí)間段的信號(hào)強(qiáng)度,計(jì)算出不同時(shí)間點(diǎn)的增強(qiáng)率。兩組比較采用兩獨(dú)立樣本T檢驗(yàn),P0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.3腫瘤組織的熒光免疫病理學(xué)檢測(cè)MR掃描結(jié)束后立即頸椎脫白法處死裸鼠,快速取其腫瘤組織,避光制作冰凍切片來(lái)觀察腫瘤組織的熒光。結(jié)果：1制備和評(píng)價(jià)1.1 TEM觀察Gd2O3-FI-PEG-BBN納米微粒形態(tài)、大小Gd2O3-FI-PEG-BBN在透射電子顯微鏡下粒子呈球形,大小均勻,僅有少量聚集現(xiàn)象,分布較均勻,電子顯微鏡下估算其平均粒徑大小約50-60nm。1.2Malvern-3000HS激光粒度分析儀進(jìn)行納米微粒粒徑及分布的測(cè)定Gd2O3-FI-PEG-BBN納米微粒通過(guò)Malvern-3000HS激光粒度分析儀來(lái)測(cè)定,Gd2O3-FI-PEG-BBN納米微粒粒徑分布集中,峰數(shù)為1,平均粒徑約為90nm。1.3傅里葉變換紅外光譜分析紅外光譜分析,可以得到納米粒子的化學(xué)結(jié)構(gòu)信息,Gd203最顯著的峰出現(xiàn)在1400-1600 cm-1范圍內(nèi),主要是由反對(duì)稱的及對(duì)稱的COO-產(chǎn)生,屬于羧酸鹽伸縮模式,還有在3427 cm-1附近、1110cm-1附近出現(xiàn)強(qiáng)而寬的羥基鍵(-OH)和伸縮振動(dòng)的C-O吸收峰,在2922 cm-1處出現(xiàn)弱的烷基鍵(C-H)吸收峰,在1600 cm-1附近出現(xiàn)羰基(C=0)吸收峰,BBN和PEG連接到Gd203表面之后,增加了甲硫氨酸的巰基,巰基的伸縮振動(dòng)在2550-2590cm-1,但是一般較弱難以識(shí)別。1.4 Gd2O3-FI-PEG-BBN的熱重力分析當(dāng)加熱到700℃時(shí),Gd2O3-FI-PEG-BBN納米顆�？偸е�51%,400℃-700℃區(qū)間曲線趨于平坦。1.5 Gd2O3-FI-PEG-BBN納米微粒MR成像隨著Gd濃度的逐漸升高,Tl信號(hào)明顯增強(qiáng),在濃度為1mmol/L的時(shí)候已經(jīng)有很明顯的T1信號(hào)增強(qiáng)效果。2.Gd2O3-FI-PEG-BBN腫瘤靶向體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)研究2.1體外細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)在Gd濃度為0-8mmol/L的范圍內(nèi),Gd2O3-FI-PEG-BBN和Gd2O3-FI-PEG納米顆粒引起PC-3細(xì)胞生存率下降趨勢(shì)不明顯,共孵育24h或48h,PC-3細(xì)胞短期生存率均大于80%,表示所合成的納米微粒具有良好的生物安全性。2.2體外靶向攝取實(shí)驗(yàn)2.2.1熒光顯微鏡觀察靶向攝取實(shí)驗(yàn)加入Gd2O3-FI-PEG-BBN的實(shí)驗(yàn)組,PC-3細(xì)胞形態(tài)正常,與空白對(duì)照組無(wú)區(qū)別。PC-3細(xì)胞核被染成明亮的藍(lán)色,胞質(zhì)充滿綠色熒光,為內(nèi)吞的Gd2O3-FI-PEG-BBN納米微粒。而加入Gd2O3-FI-PEG的對(duì)照組以及未加藥空白組,細(xì)胞核被染成亮藍(lán)色,但是胞質(zhì)內(nèi)無(wú)綠色熒光或僅有本底的綠色熒光。2.2.2流式細(xì)胞儀證實(shí)靶向攝取實(shí)驗(yàn)以細(xì)胞熒光強(qiáng)度來(lái)表示納米粒子的標(biāo)記成功率,空白組FI熒光強(qiáng)度為296,實(shí)驗(yàn)組FI熒光強(qiáng)度為15326,而對(duì)照組為2067。流式細(xì)胞儀的結(jié)果也進(jìn)一步驗(yàn)證了熒光顯微鏡觀察的結(jié)果,靶向組Gd2O3-FI-PEG-BBN通過(guò)GRPr受體介導(dǎo)的內(nèi)吞被PC-3細(xì)胞攝取,而非靶向組Gd2O3-FI-PEG僅有少量非特異性攝取。2.2.3標(biāo)記細(xì)胞的MR成像Gd2O3-FI-PEG-BBN納米微粒共孵育的實(shí)驗(yàn)組信噪比(SNR)明顯高于與Gd2O3-FI-PEG納米微粒共孵育的對(duì)照組、空白細(xì)胞對(duì)照組及瓊脂糖對(duì)照組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而Gd2O3-FI-PEG納米微粒共孵育的對(duì)照組與空白細(xì)胞對(duì)照組的SNR無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義((P0.05)),Gd2O3-FI-PEG-BBN向能通過(guò)受體選擇性的能被細(xì)胞攝取,攝取的Gd2O3-FI-PEG-BBN可以引起MR T1 WI信號(hào)增強(qiáng)。3.Gd2O3-FI-PEG-BBN腫瘤靶向體內(nèi)成像研究3.1建立前列腺癌荷瘤裸鼠模型成功建立了前列腺癌荷瘤裸鼠模型,動(dòng)物狀態(tài)良好,由于腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛,體重偏輕,腫瘤直徑約為1.0-2.0cm,表面無(wú)潰爛,成瘤率100%。隨機(jī)分為2組,每組5只。3.2腫瘤靶向MRI成像荷瘤裸鼠尾靜脈注射Gd2O3-FI-PEG-BBN或者Gd2O3-FI-PEG之后,腫瘤信號(hào)逐漸增強(qiáng)并于2h左右達(dá)到峰值,對(duì)比注射前和注射后2h腫瘤信號(hào),注射Gd2O3-FI-PEG-BBN的靶向組,腫瘤區(qū)域在注射后T1WI信號(hào)強(qiáng)度2h信號(hào)明顯增高,而注射Gd2O3-FI-PEG的對(duì)照組,信號(hào)增高不明顯。靶向組強(qiáng)化率為27.95±5.86%,而對(duì)照組的強(qiáng)化率為4.02±2.24%,采用兩獨(dú)立樣本T檢驗(yàn),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.3腫瘤組織的熒光免疫病理學(xué)檢測(cè)冰凍切片熒光顯微鏡下可見腫瘤區(qū)域細(xì)胞核藍(lán)染,周圍可見豐富的綠色焚光圍繞,而非靶向?qū)φ战M僅有少量綠色熒光,證明通過(guò)BBN與GRPr受體的結(jié)合,綠色熒光素FI標(biāo)記的Gd2O3-FI-PEG-BBN可被腫瘤細(xì)胞選擇性攝取,并能有效地在腫瘤組織中富集。結(jié)論：本研究成功制備了鈴蟾肽BBN和熒光素Fl雙標(biāo)記的氧化釓納米顆粒Gd2O3-FI-PEG-BBN分子探針,有較好的水溶性、生物相容性、熒光顯像及MRIT1增強(qiáng)效果好,能選擇性地在前列腺癌腫瘤組織富集,能有效進(jìn)行熒光顯像和MR成像,可用于光學(xué)-MR雙模態(tài)前列腺癌靶向成像。
【關(guān)鍵詞】：氧化釓 胃泌素釋放肽受體 鈴蟾肽 分子影列腺癌靶向像學(xué) 磁共振 前列腺癌
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.25;R445.2
【目錄】：

• 摘要3-12
• ABSTRACT12-25
• 前言25-29
• 第一章 Gd_2O_3-FI-PEG-BBN制備與評(píng)價(jià)29-38
• 1.1 材料與方法29-31
• 1.1.1主要試劑29
• 1.1.2 主要儀器29
• 1.1.3 方法29-31
• 1.2 結(jié)果31-34
• 1.2.1 制備31
• 1.2.2 TEM觀察Gd_2O_3-FI-PEG-BBN納米微粒形態(tài)、大小31-32
• 1.2.3 Malvern-3000HS激光粒度分析儀進(jìn)行納米微粒粒徑及分布的測(cè)定32
• 1.2.4 傅里葉變換紅外光譜分析32-33
• 1.2.5 熱重力分析TGA33-34
• 1.2.6 Gd_2O_3-FI-PEG-BBN納米微粒MR成像34
• 1.3 討論34-37
• 1.4 結(jié)論37-38
• 第二章 Gd_2O_3-FI-PEG-BBN腫瘤靶向體外實(shí)驗(yàn)研究38-50
• 2.1 材料和方法38-41
• 2.1.1 所用細(xì)胞及試劑38
• 2.1.2 儀器及耗材38-39
• 2.1.3 細(xì)胞培養(yǎng)39
• 2.1.4 體外細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)39-40
• 2.1.5 體外靶向攝取實(shí)驗(yàn)40-41
• 2.2 結(jié)果41-45
• 2.2.1 體外細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)41-42
• 2.2.2 體外靶向攝取實(shí)驗(yàn)42-45
• 2.3 討論45-49
• 2.4 結(jié)論49-50
• 第三章 Gd_2O_3-FI-PEG-BBN腫瘤靶向體內(nèi)成像研究50-58
• 3.1 材料和方法50-52
• 3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料和儀器50
• 3.1.2 方法50-52
• 3.2 結(jié)果52-55
• 3.2.1 建立前列腺癌荷瘤裸鼠模型52
• 3.2.2 荷瘤裸鼠MRI成像52-54
• 3.2.3 腫瘤組織的熒光免疫病理學(xué)檢測(cè)54-55
• 3.3 討論55-57
• 3.4 結(jié)論57-58
• 參考文獻(xiàn)58-63
• 中英文縮略詞對(duì)照63-65
• 攻讀碩士學(xué)位期間的成果65-66
• 致謝66-67

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 程華;巖黃連細(xì)胞培養(yǎng)合成生物堿研究[D];華中科技大學(xué);2006年

2 高識(shí);~(99m)Tc-RGD-BN在乳腺腫瘤中的診斷價(jià)值研究[D];吉林大學(xué);2014年

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本文編號(hào)：823384