本文關(guān)鍵詞：放射性肺損傷的臨床和實驗研究

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【摘要】：目的:探討肺癌患者接受常規(guī)適形放射治療時,在發(fā)生RILI患者中,MMP-9、TIMP-1在不同照射劑量下的表達(dá)及其臨床意義,分析其是否可成為RILI的預(yù)測因素。觀察小鼠在高海拔地區(qū)X線照射下發(fā)生RILI小鼠模型MMP-9、TIMP-1的表達(dá),探討在不同照射劑量下,MMP-9、TIMP-1表達(dá)的差異;運用GSH對RILI小鼠進(jìn)行藥物干預(yù),觀察該藥的防治作用。方法:收集青海大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院放療科2014年3月至2015年2月首次接受放射治療的54例非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)患者的一般資料,包括患者的年齡、性別、籍貫、民族、職業(yè)史、首診時間、首診癥狀、KPS評分、影響肺功能相關(guān)疾病史、吸煙、飲酒、飲水及飲食習(xí)慣、腫瘤病變位置、病理類型、診斷及TNM分期、治療方案、TPS物理參數(shù)及血常規(guī)等,對發(fā)生RILI與未發(fā)生RILI的危險因素進(jìn)行單因素χ2檢驗和多因素Logistic分析,建立RILI多因素Logistic回歸模型。并對54例患者隨訪1年并發(fā)癥發(fā)生率進(jìn)行Kaplan-Meier分析。用酶聯(lián)免疫吸附實驗(Elisa)檢測放療前(0Gy)、中(40Gy)、后(54Gy以上)不同時間空腹靜脈血中的MMP-9和TIMP-1表達(dá)含量,并判斷其與RILI相關(guān)性。選取100只BALB/c系健康7~8周SPF級體重20±2 g小鼠,隨機分為5組,每組小鼠20只,包括空白對照組、15 Gy單純照射組、15 Gy+GSH照射組、30 Gy單純照射組、30 Gy+GSH照射組,于照射前5 min腹腔注射0.5%戊巴比妥納0.2 m L進(jìn)行麻醉,放療加GSH組于麻醉后2 min腹腔注射240 mg/m L的GSH 0.2 m L,空白組小腹腔注射等體積生理鹽水作對照。進(jìn)行照射的小鼠采用仰臥位固定,在小鼠胸部設(shè)定1x2 cm2照射野,用醫(yī)用電子直線加速器6Mv X線,源皮距98 cm,劑量率300 c Gy/min,對小鼠進(jìn)行不同劑量的一次照射,建立RILI實驗小鼠動物模型。照射后1周采用頸椎脫臼法處死小鼠,獲取肺組織進(jìn)行切片和HE染色,判斷實驗小鼠是否發(fā)生RILI,以確定是否成功建立RILI實驗動物模型。小鼠在照射前和照射后1、2、3周稱重后取眼球獲取實驗血液樣本,同時取肺組織標(biāo)本。用100μL全血在全自動血液分析儀中分析血常規(guī),剩余血樣立即用5000轉(zhuǎn)/分鐘,離心10 min,取血清存于-800C冰箱待測,實驗標(biāo)本收集完成后,用Elisa法檢測MMP-9、TIMP-1表達(dá)水平。肺組織經(jīng)10%中性甲醛浸泡,經(jīng)脫水、包埋、固定、切片、HE染色拍片并觀看肺組織病理變化。運用AVONA分析照射后小鼠的活動度、體重變化,血常規(guī)、MMP-9、TIMP-1在不同時間不同照射劑量下表達(dá)的差異性。結(jié)果:54例肺癌患者首程接受放射治療后,23例發(fā)生不同程度的RILI,其發(fā)生率為42.59%,1-2級16例(29.6%),3-4級7例(13.0%)。對影響RILI危險因素行χ2檢驗,RILI與年齡、性別、病理類型、病變位置、治療方案、KPS評分無關(guān)聯(lián),與吸煙、COPD、V20、MLD等因素有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。放療開始后短期內(nèi)血象會相應(yīng)下降,之后上升并保持相對平穩(wěn)狀態(tài)。對單因素檢驗有意義的危險因素進(jìn)行多因素Logistic回歸分析,治療過程中合并肺炎和V20≥25%是影響RILI發(fā)生的獨立危險因素(P0.05),建立Logistic回歸模型為:Y=-15.58+2.71X2+4.35X4。Elisa檢測肺癌患者M(jìn)MP-9、TIMP-1表達(dá),其含量在不同放療劑量下存在統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。劑量越高,MMP-9表達(dá)越多,與未發(fā)生RILI組比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。對兩組患者均隨訪1年,觀察兩組患者并發(fā)癥發(fā)生率,RILI組并發(fā)癥中位發(fā)生期為8.7個月,與未發(fā)生RILI組9.9個月比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=5.78,P=0.02)�？瞻讓φ战M小鼠肺泡組織結(jié)構(gòu)清晰完整,未見明顯的炎癥細(xì)胞滲出、浸潤、出血,照射后1周小鼠肺組織中可見大量炎癥細(xì)胞浸潤伴肺泡間隔明顯水腫、出血,結(jié)構(gòu)不完整,說明RILI實驗小鼠動物模型建立成功。與空白組小鼠肺組織比較,單純照射組小鼠肺組織中可見大量炎癥細(xì)胞浸潤伴肺泡間隔水腫、出血,肺泡壁受損傷,結(jié)構(gòu)不完整。相同劑量照射下,小鼠肺組織間炎癥細(xì)胞浸潤、水腫,第3周較第1周更少,結(jié)構(gòu)更清晰、完整,肺組織結(jié)構(gòu)得到自我修復(fù)。與空白組比較,單純照射后,小鼠活動度、紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板、血紅蛋白、TIMP-1表達(dá)均明顯下降,差異有顯著性統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),MMP-9表達(dá)上升(P0.05)。30Gy劑量照射小鼠后,肺組織損傷明顯較15Gy組損傷嚴(yán)重,各指標(biāo)與15Gy單純照射組比較有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。隨著照射后時間的延長,白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血小板、血紅蛋白、TIMP-1上升,MMP-9下降,與照射前比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。使用GSH藥物干預(yù)后,小鼠RILI程度明顯下降。相同照射劑量下,GSH組小鼠肺組織損傷明顯較單純組減輕,并且低劑量照射下,GSH防治作用更強。結(jié)論:MMP-9、TIMP-1表達(dá)水平隨著放射劑量增加、照射范圍增大而增加,可作為放療前判斷是否發(fā)生RILI重要的可預(yù)測指標(biāo)之一。
【關(guān)鍵詞】：放射性肺損傷 危險因素 臨床研究 藥物干預(yù) 實驗研究
【學(xué)位授予單位】：青海大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R734.2;R730.55
【目錄】：

• 中文摘要7-10
• ABSTRACT10-14
• 附錄 中英文縮略詞對照14-16
• 研究過程技術(shù)路線圖16-18
• 第一部分：肺癌患者M(jìn)MP-9、TIMP-1 表達(dá)及生物學(xué)意義研究18-47
• 引言18-21
• 材料與方法21-29
• 1 材料21-24
• 1.1 病例來源21
• 1.2 納入標(biāo)準(zhǔn)21
• 1.3 排除標(biāo)準(zhǔn)21
• 1.4 診斷標(biāo)準(zhǔn)21-22
• 1.5 急性放射性肺炎分級標(biāo)準(zhǔn)22-23
• 1.6 Karnofsky[20]（卡氏）功能狀態(tài)評分23
• 1.7 療效判定標(biāo)準(zhǔn)23
• 1.8 研究主要設(shè)備與試劑23-24
• 2 方法24-28
• 2.1 研究方法24-26
• 2.2 放療實施流程圖26-27
• 2.3 實驗方法（Elisa法）27-28
• 2.4 定義相關(guān)變量28
• 3 統(tǒng)計學(xué)28-29
• 結(jié)果29-40
• 1 RILI發(fā)生情況29
• 2 細(xì)胞因子表達(dá)29-33
• 2.1 MMP-9、TIMP-1 在肺癌患者放療后中的表達(dá)29-30
• 2.2 兩組患者放療后不同時間MMP-9、TIMP-1 表達(dá)30-33
• 2.3 MMP-9、TIMP-1 與RILI的關(guān)系33
• 3 影響RILI的因素33-37
• 3.1 54例肺癌患者的基本資料33-35
• 3.2 RILI的危險因素35-36
• 3.3 V20、MLD與RILI的關(guān)系36
• 3.4 影響RILI危險因素的Logistic分析36-37
• 4 放療后療效比較37
• 5 放療對血液的影響37-38
• 5.1 不同時間RILI患者的血液毒性比較37-38
• 5.2 放療后兩組患者的血液毒性比較38
• 6 放療后各組患者的1年并發(fā)癥比較38-40
• 討論40-42
• 參考文獻(xiàn)42-47
• 第二部分：建立RILI小鼠模型并檢測MMP-9、TIMP-1 表達(dá)研究47-73
• 引言47-49
• 材料與方法49-55
• 1 材料49-50
• 1.1 實驗動物49
• 1.2 試劑49
• 1.3 主要儀器49-50
• 2 研究方法50-51
• 2.1 建立RILI小鼠模型50
• 2.2 小鼠活動度測量50
• 2.3 取材50-51
• 2.4 因子檢測51
• 2.5 病理切片制作與HE染色51
• 2.6 外周血細(xì)胞計數(shù)51
• 2.7 GSH干預(yù)實驗51
• 3 實驗方法51-54
• 3.1 Elisa檢測血清中MMP-9、TIMP-1 含量51-52
• 3.2 組織切片及HE染色52-54
• 4 統(tǒng)計學(xué)54-55
• 結(jié)果55-65
• 1 RILI小鼠實驗?zāi)Ｐ痛_定55
• 2 照射后小鼠細(xì)胞因子變化情況55-56
• 2.1 照射后MMP-9 表達(dá)情況55
• 2.2 照射后TIMP-1 表達(dá)情況55-56
• 3 肺組織病理變化56-57
• 4 照射后小鼠一般情況57-61
• 4.1 各組不同時間小鼠活動度情況57-58
• 4.2 各組小鼠不同時間的體重比較58-59
• 4.3 照射后小鼠外周血白細(xì)胞變化情況59
• 4.4 照射后小鼠血小板變化情況59-60
• 4.5 照射后小鼠血紅蛋白變化情況60-61
• 5 GSH干預(yù)RILI小鼠比較61-65
• 5.1 GSH干預(yù)照射后小鼠細(xì)胞因子變化61
• 5.2 GSH干預(yù)RILI小鼠病理變化61-62
• 5.3 GSH防治照射后小鼠一般情況變化62
• 5.4 GSH防治照射后小鼠血象變化62-65
• 討論65-68
• 參考文獻(xiàn)68-73
• 結(jié)論73-75
• 致謝75-78
• 綜述 放射性肺損傷與細(xì)胞因子的研究進(jìn)展78-92
• 參考文獻(xiàn)85-92
• 個人簡歷92

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：671601