本文關(guān)鍵詞：偶聯(lián)雙基因靶點(diǎn)GNRs對TNBC放療增敏作用及其機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： 三陰性乳腺癌 多功能金納米棒 放射治療 整合素αvβ3 VEGFR

【摘要】：背景與目的三陰性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)作為乳腺癌分子亞型的一個(gè)分型,其分子及生物學(xué)行為具有多方面特殊性,并且具有放射敏感異質(zhì)性。其存在多個(gè)分子靶點(diǎn)的異常,這些異常分子靶點(diǎn)可通過不同機(jī)制影響腫瘤對電離輻射的反應(yīng),從而調(diào)節(jié)TNBC的放療敏感性。如何提高其放射治療敏感性和增益比成為TNBC放射治療的瓶頸。我們設(shè)計(jì)并構(gòu)建偶聯(lián)整合素αvβ3特異性結(jié)合肽RGD及血管內(nèi)皮生長因子受體(vascular endothelial growth factor receptor,VEGFR)特異性抑制劑TKI-258雙基因靶點(diǎn)的多功能金納米棒顆粒(TKI-258-p GNRs@m Si O2-RGD)作為增敏劑,觀察在6MV-X線照射下TKI-258-p GNRs@m Si O2-RGD對TNBC細(xì)胞株MDA-MB-231細(xì)胞的放射敏感性的影響,并探討其可能存在的機(jī)制。材料與方法本課題設(shè)計(jì)并構(gòu)建了一種新型的基于介孔二氧化硅包覆的金納米棒顆粒,并通過表面化學(xué)修飾法偶聯(lián)整合素αvβ3特異性結(jié)合肽RGD及血管內(nèi)皮生長因子受體(VEGFR)特異性抑制劑TKI-258,使該多功能金納米棒顆粒成為一種特異性的靶向放療增敏材料。以人TNBC細(xì)胞株MDA-MB-231細(xì)胞和人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7細(xì)胞為研究對象,利用MTT法及CCK-8法檢測偶聯(lián)雙基因靶點(diǎn)多功能金納米棒顆粒的細(xì)胞毒性;透射電子顯微鏡觀察偶聯(lián)雙基因靶點(diǎn)的多功能金納米棒顆粒進(jìn)入細(xì)胞的情況;采用6MV-X線照射偶聯(lián)雙基因靶點(diǎn)的多功能金納米棒顆粒溫育后的腫瘤細(xì)胞,克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞的放射敏感性改變;流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期及整合素αvβ3表達(dá)水平的改變;Western blot實(shí)驗(yàn)檢測VEGFR的表達(dá)水平改變。結(jié)果1.采用種子誘導(dǎo)生長法合成均一的裸金納米棒顆粒(GNRs),并通過表面包覆二氧化硅(Si O2)及表面聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)修飾,成功構(gòu)建偶聯(lián)RGD及TKI-258雙基因靶點(diǎn)的多功能金納米棒顆粒(TKI-258-p GNRs@m Si O2-RGD)。2.透射電子顯微鏡顯示偶聯(lián)雙基因靶點(diǎn)的多功能金納米棒顆粒分散均一,表面硅層厚19.39nm+1.63nm,鏡下可見介孔結(jié)構(gòu),并可通過細(xì)胞內(nèi)吞作用進(jìn)入MDA-MB-231細(xì)胞和MCF-7細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)。紫外分光光度計(jì)檢測多功能金納米金棒顆粒吸收峰位于515、860 nm處,偶聯(lián)的雙基因靶點(diǎn)抑制劑TKI-258、RGD分別在360、204 nm處有特征性吸收峰。3.偶聯(lián)雙基因靶點(diǎn)的多功能金納米棒顆粒在0-100μg/m L濃度范圍內(nèi)對MDA-MB-231細(xì)胞和MCF-7細(xì)胞的生物學(xué)活性無明顯影響(p0.05),細(xì)胞毒性評級為I級,IC50值434.63μg/m L。4.流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表面整合素αvβ3表達(dá)顯示,相對于MCF-7細(xì)胞,放射可誘導(dǎo)MDA-MB-231細(xì)胞表面整合素αvβ3表達(dá)的上調(diào),而通過聯(lián)合多功能金納米棒顆�？捎行ё钄嗾纤卅羦β3位點(diǎn);Western blot實(shí)驗(yàn)證明偶聯(lián)雙基因靶點(diǎn)的多功能金納米棒顆粒可下調(diào)細(xì)胞表面VEGFR的表達(dá)水平。5.克隆形成實(shí)驗(yàn)證明在6MV-X線照射下金納米棒顆粒(GNRs@m Si O2)可提高腫瘤細(xì)胞的放射敏感性,且多功能金納米棒顆粒(TKI-258-p GNRs@m Si O2-RGD)放療增敏作用更顯著。同時(shí)細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)亦顯示偶聯(lián)雙基因靶點(diǎn)的多功能金納米棒顆粒聯(lián)合照射組的細(xì)胞凋亡率明顯高于單純納米聯(lián)合射線組(p0.05);而細(xì)胞周期檢測提示多功能金納米棒可使腫瘤細(xì)胞阻滯于放療敏感的G2/M期。結(jié)論1.本課題成功設(shè)計(jì)并構(gòu)建了偶聯(lián)整合素αvβ3特異性結(jié)合肽RGD及VEGFR特異性抑制劑TKI-258雙基因靶點(diǎn)的多功能放療增敏金納米棒顆粒(TKI-258-p GNRs@m Si O2-RGD)。2.該多功能金納米棒顆�？捎行ё钄嗄[瘤細(xì)胞固有或放射后誘導(dǎo)的整合素αvβ3表達(dá),下調(diào)三陰性乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231異常高表達(dá)的VEGFR水平,更加顯著地增加MDA-MB-231細(xì)胞的放射敏感性。這一增敏作用可能與該多功能金納米棒顆粒能夠下調(diào)細(xì)胞αvβ3表達(dá)及將細(xì)胞阻滯在放射敏感的G2/M期有關(guān)。3.這一研究為多功能金納米棒顆粒在TNBC放療增敏的臨床應(yīng)用積累了一定的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ),有望提高TNBC的放射治療療效,但這一效應(yīng)的具體機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。
【關(guān)鍵詞】：三陰性乳腺癌 多功能金納米棒 放射治療 整合素αvβ3 VEGFR
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.9;R730.55
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-12
• 英文縮略詞表12-14
• 引言14-21
• 參考文獻(xiàn)18-21
• 第一部分 偶聯(lián)雙靶點(diǎn)金納米顆粒的研制及其表征21-40
• 1. 儀器和試劑23-24
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法24-28
• 3. 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理28
• 4. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果28-37
• 5 討論37-39
• 參考文獻(xiàn)39-40
• 第二部分 偶聯(lián)雙基因靶點(diǎn)金納米棒顆粒的放療增敏作用及其機(jī)制的研究40-80
• 1. 材料與方法43-46
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法46-53
• 3. 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法53
• 4. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果53-66
• 5. 討論66-74
• 參考文獻(xiàn)74-80
• 全文小結(jié)80-81
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的文章81-83
• 致謝83

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