本文關(guān)鍵詞：人類唾液腺組織片新型培養(yǎng)模型的建立

  更多相關(guān)文章： 人類唾液腺 組織片培養(yǎng) 新型模型 三維培養(yǎng)

【摘要】：目的：在人類唾液腺體的研究進程中,如何在完全體外環(huán)境下維持唾液腺體細胞的三維(3D)形態(tài)結(jié)構(gòu)一直以來都是個難題。本研究的目的在于建立一個新型的人類唾液腺組織培養(yǎng)模型和并維持組織片在體外環(huán)境下的生理功能,蛋白和基因表達。通過該模型的建立,使唾液腺組織片能夠在體外環(huán)境下保留組織內(nèi)環(huán)境及細胞的多樣性,使我們有機會將該模型運用于唾液腺相關(guān)的生理和病理學(xué)研究中,從而探討人類唾液腺體相關(guān)疾病的發(fā)病機理。方法：總共選取6個人類唾液腺體標本,供者年齡在34至75歲之間。將唾液腺組織片切至35～50岬厚度后進行培養(yǎng)。我們共使用了7種方法來對組織片培養(yǎng)過程中各項指標進行評估。首先,在不同培養(yǎng)時間點上,通過細胞生存／死亡染色、細胞增殖染色及細胞凋亡染色分別檢測細胞存活率、增殖能力和凋亡率,從而評估細胞生理性能。所有結(jié)果都通過共聚焦顯微鏡協(xié)助完成。功能評估方面,定量檢測儀淀粉酶活性以及鈣離子釋放活力從而評估培養(yǎng)過程中腺泡細胞的分泌功能。最后通過免疫熒光(IF)染色和實時定量基因擴增熒光檢測系統(tǒng)(q PCR)分別檢測人類唾液腺組織片中各項蛋白和基因表達。IF染色檢測的蛋白為Na+-K+-2C1-鈉鉀氯共轉(zhuǎn)運蛋白(NKCC1)、水通道蛋白5(AQP5)、角蛋白5(CK5)及α-平滑肌肌動蛋白(a-SMA)。qPCR使用磷酸甘油醛脫氫酶(GAPDH,管家基因)作為內(nèi)參基因,NKCC1、AQP5、CK5和鈣黏蛋白為目地基因。我們總共觀察培養(yǎng)過程中的4個時間點,分別為0、3、7和14天,并對每個時間點的組織標本做以上7種檢測。結(jié)果：在本研究建立的培養(yǎng)系統(tǒng)中,人類腺體組織片能夠成功的在體外進行培養(yǎng)。人類唾液腺組織經(jīng)過14天的培養(yǎng)后,存活率雖然從第0天的70%下降至第14天的40%,但仍可證明唾液腺細胞得以留存超過兩周。細胞增殖率維持在6%至17%之間,甚至在培養(yǎng)的中后期出現(xiàn)了上升趨勢,可證明細胞及組織片的增殖能力同樣得以存留。淀粉酶活性定量檢測表明在14天的培養(yǎng)過程里,組織片中功能細胞(腺泡細胞)仍然保留了一定的分泌功能。鈣離子釋放檢測的陽性結(jié)果同樣證明組織片仍具備唾液腺體生理功能。我們能夠通過IF及q PCR檢測到腺泡細胞,導(dǎo)管細胞,肌上皮細胞的蛋白和基因標志物的表達,說明腺泡細胞,導(dǎo)管細胞和肌上皮細胞都成功的存活于本研究所建立的3D組織片培養(yǎng)模型中。結(jié)論：通過持續(xù)14天的觀察和評估,結(jié)果表明本研究所建立的培養(yǎng)系統(tǒng)可成功的培養(yǎng)人類SG組織片,所培養(yǎng)的腺體組織可以保持重要的生理功能。通過本實驗建立的培養(yǎng)模型,使我們可以在后續(xù)的研究中進一步探討受到放射線輻射后的唾液腺組織的損傷病程,并為探究更有效治療唾液腺損傷的方法提供研究模型。
【關(guān)鍵詞】：人類唾液腺 組織片培養(yǎng) 新型模型 三維培養(yǎng)
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R78;R730.55
【目錄】：

• 個人簡歷4-7
• 摘要7-9
• ABSTRACT9-12
• 前言12-14
• 實驗一：人類唾液腺體組織片培養(yǎng)模型的建立14-21
• 1、材料與方法14-17
• 2、結(jié)果17-19
• 3、討論19-21
• 實驗二：在人類SG組織片培養(yǎng)的模型中組織片的形態(tài)學(xué)變化21-31
• 1、材料與方法21-26
• 2、結(jié)果26-28
• 3、討論28-31
• 實驗三：人類SG在組織片培養(yǎng)模型中的功能以及其相關(guān)表達的改變31-46
• 1、材料與方法31-40
• 2、結(jié)果40-44
• 3、討論44-46
• 結(jié)論46-47
• 參考文獻47-52
• 附錄 英文縮略語表52-54
• 文獻綜述54-77
• 綜述參考文獻65-77
• 致謝77-79
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文79

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本文編號：573238