本文關(guān)鍵詞：人類(lèi)唾液腺組織片新型培養(yǎng)模型的建立

  更多相關(guān)文章： 人類(lèi)唾液腺 組織片培養(yǎng) 新型模型 三維培養(yǎng)

【摘要】：目的：在人類(lèi)唾液腺體的研究進(jìn)程中,如何在完全體外環(huán)境下維持唾液腺體細(xì)胞的三維(3D)形態(tài)結(jié)構(gòu)一直以來(lái)都是個(gè)難題。本研究的目的在于建立一個(gè)新型的人類(lèi)唾液腺組織培養(yǎng)模型和并維持組織片在體外環(huán)境下的生理功能,蛋白和基因表達(dá)。通過(guò)該模型的建立,使唾液腺組織片能夠在體外環(huán)境下保留組織內(nèi)環(huán)境及細(xì)胞的多樣性,使我們有機(jī)會(huì)將該模型運(yùn)用于唾液腺相關(guān)的生理和病理學(xué)研究中,從而探討人類(lèi)唾液腺體相關(guān)疾病的發(fā)病機(jī)理。方法：總共選取6個(gè)人類(lèi)唾液腺體標(biāo)本,供者年齡在34至75歲之間。將唾液腺組織片切至35～50岬厚度后進(jìn)行培養(yǎng)。我們共使用了7種方法來(lái)對(duì)組織片培養(yǎng)過(guò)程中各項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行評(píng)估。首先,在不同培養(yǎng)時(shí)間點(diǎn)上,通過(guò)細(xì)胞生存／死亡染色、細(xì)胞增殖染色及細(xì)胞凋亡染色分別檢測(cè)細(xì)胞存活率、增殖能力和凋亡率,從而評(píng)估細(xì)胞生理性能。所有結(jié)果都通過(guò)共聚焦顯微鏡協(xié)助完成。功能評(píng)估方面,定量檢測(cè)儀淀粉酶活性以及鈣離子釋放活力從而評(píng)估培養(yǎng)過(guò)程中腺泡細(xì)胞的分泌功能。最后通過(guò)免疫熒光(IF)染色和實(shí)時(shí)定量基因擴(kuò)增熒光檢測(cè)系統(tǒng)(q PCR)分別檢測(cè)人類(lèi)唾液腺組織片中各項(xiàng)蛋白和基因表達(dá)。IF染色檢測(cè)的蛋白為Na+-K+-2C1-鈉鉀氯共轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(NKCC1)、水通道蛋白5(AQP5)、角蛋白5(CK5)及α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(a-SMA)。qPCR使用磷酸甘油醛脫氫酶(GAPDH,管家基因)作為內(nèi)參基因,NKCC1、AQP5、CK5和鈣黏蛋白為目地基因。我們總共觀察培養(yǎng)過(guò)程中的4個(gè)時(shí)間點(diǎn),分別為0、3、7和14天,并對(duì)每個(gè)時(shí)間點(diǎn)的組織標(biāo)本做以上7種檢測(cè)。結(jié)果：在本研究建立的培養(yǎng)系統(tǒng)中,人類(lèi)腺體組織片能夠成功的在體外進(jìn)行培養(yǎng)。人類(lèi)唾液腺組織經(jīng)過(guò)14天的培養(yǎng)后,存活率雖然從第0天的70%下降至第14天的40%,但仍可證明唾液腺細(xì)胞得以留存超過(guò)兩周。細(xì)胞增殖率維持在6%至17%之間,甚至在培養(yǎng)的中后期出現(xiàn)了上升趨勢(shì),可證明細(xì)胞及組織片的增殖能力同樣得以存留。淀粉酶活性定量檢測(cè)表明在14天的培養(yǎng)過(guò)程里,組織片中功能細(xì)胞(腺泡細(xì)胞)仍然保留了一定的分泌功能。鈣離子釋放檢測(cè)的陽(yáng)性結(jié)果同樣證明組織片仍具備唾液腺體生理功能。我們能夠通過(guò)IF及q PCR檢測(cè)到腺泡細(xì)胞,導(dǎo)管細(xì)胞,肌上皮細(xì)胞的蛋白和基因標(biāo)志物的表達(dá),說(shuō)明腺泡細(xì)胞,導(dǎo)管細(xì)胞和肌上皮細(xì)胞都成功的存活于本研究所建立的3D組織片培養(yǎng)模型中。結(jié)論：通過(guò)持續(xù)14天的觀察和評(píng)估,結(jié)果表明本研究所建立的培養(yǎng)系統(tǒng)可成功的培養(yǎng)人類(lèi)SG組織片,所培養(yǎng)的腺體組織可以保持重要的生理功能。通過(guò)本實(shí)驗(yàn)建立的培養(yǎng)模型,使我們可以在后續(xù)的研究中進(jìn)一步探討受到放射線輻射后的唾液腺組織的損傷病程,并為探究更有效治療唾液腺損傷的方法提供研究模型。
【關(guān)鍵詞】：人類(lèi)唾液腺 組織片培養(yǎng) 新型模型 三維培養(yǎng)
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R78;R730.55
【目錄】：

• 個(gè)人簡(jiǎn)歷4-7
• 摘要7-9
• ABSTRACT9-12
• 前言12-14
• 實(shí)驗(yàn)一：人類(lèi)唾液腺體組織片培養(yǎng)模型的建立14-21
• 1、材料與方法14-17
• 2、結(jié)果17-19
• 3、討論19-21
• 實(shí)驗(yàn)二：在人類(lèi)SG組織片培養(yǎng)的模型中組織片的形態(tài)學(xué)變化21-31
• 1、材料與方法21-26
• 2、結(jié)果26-28
• 3、討論28-31
• 實(shí)驗(yàn)三：人類(lèi)SG在組織片培養(yǎng)模型中的功能以及其相關(guān)表達(dá)的改變31-46
• 1、材料與方法31-40
• 2、結(jié)果40-44
• 3、討論44-46
• 結(jié)論46-47
• 參考文獻(xiàn)47-52
• 附錄 英文縮略語(yǔ)表52-54
• 文獻(xiàn)綜述54-77
• 綜述參考文獻(xiàn)65-77
• 致謝77-79
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文79

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本文編號(hào)：573238