本文關(guān)鍵詞：EGCG對人皮膚細(xì)胞的輻射防護(hù)作用及機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的研究EGCG對人皮膚HaCaT細(xì)胞放射敏感性的影響，進(jìn)一步探討表沒食子兒茶素沒食子酸脂（EGCG）對人正常皮膚角質(zhì)細(xì)胞HaCaT的輻射保護(hù)作用及其機制。 方法選取人永生化正常皮膚角質(zhì)細(xì)胞HaCaT作為實驗細(xì)胞。（1）利用四氮唑鹽比色試驗（MTT）測定EGCG或聯(lián)合X射線對HaCaT細(xì)胞活力的影響，篩選出合適的EGCG的濃度進(jìn)行后續(xù)的實驗；（2）給予不同劑量X射線照射，應(yīng)用克隆形成實驗，檢測EGCG對HaCaT細(xì)胞存活分?jǐn)?shù)及放射敏感性的影響；（3）流式細(xì)胞術(shù)檢測EGCG聯(lián)合X射線作用后，HaCaT細(xì)胞凋亡及周期分布的改變情況；（4）熒光顯微鏡觀察EGCG聯(lián)合X射線后HaCaT細(xì)胞線粒體及ROS的變化；（5）應(yīng)用Western-blot法分析EGCG聯(lián)合X射線作用后，細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bax及氧化應(yīng)激相關(guān)蛋白HO-1、SOD等的表達(dá)水平的變化；（6）免疫熒光實驗檢測Nrf2表達(dá)變化；（7）MTT法檢測HO-1siRNA或SnPP聯(lián)合EGCG后輻射防護(hù)作用；（8）熒光素酶活性檢測HO-1的誘導(dǎo)表達(dá)；（9）免疫組化法觀察EGCG對皮膚的誘導(dǎo)表達(dá)。 結(jié)果（1）MTT檢測結(jié)果顯示：EGCG在0-75μmol/L濃度范圍內(nèi)聯(lián)合X射線可減輕輻射導(dǎo)致的HaCaT細(xì)胞活力下降，而沒有明顯毒性作用；（2）細(xì)胞輻射敏感性實驗結(jié)果顯示：EGCG聯(lián)合輻射組細(xì)胞相比單純照射組，細(xì)胞克隆形成率均明顯提高（P0.01）。對于HaCaT細(xì)胞，單純照射組和藥物+照射組平均致死劑量（D0）值分別為2.43Gy、2.63Gy，準(zhǔn)閾劑量（Dq）值分別為1.78Gy、2.53Gy；（3）Annexin Ⅴ/PI雙染法凋亡檢測結(jié)果顯示：對于HaCaT細(xì)胞，單純10、20Gy照射組細(xì)胞凋亡率分別是9.25%和12.41%，10Gy組經(jīng)50μM EGCG處理后，細(xì)胞凋亡率分別降低至7.82%和10.24%，20Gy組經(jīng)50μM EGCG處理后，，細(xì)胞凋亡率分別降低至6.34%和8.00%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)；流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期顯示：在照射劑量點，對于HaCaT細(xì)胞，EGCG+照射組與單純照射組相比，G_0/G_1期細(xì)胞比例上升（p0.01），G2/M期細(xì)胞比例下降，G_2期阻滯緩解，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（p0.01）；（5）Western-blot分析顯示：對HaCaT細(xì)胞，與單純照射組相比，EGCG+照射組的Bcl-2蛋白表達(dá)水平下調(diào)，Bax蛋白表達(dá)水平增加，而細(xì)胞氧化應(yīng)激相關(guān)蛋白HO-1的表達(dá)量上升，而SOD沒有明顯改變；（6）免疫熒光實驗檢測結(jié)果顯示：EGCG+照射組HaCaT細(xì)胞使Nrf2轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子向核內(nèi)轉(zhuǎn)移；（6）MTT法顯示HO-1siRNA或SnPP聯(lián)合EGCG后輻射防護(hù)作用減輕；（7）熒光素酶活性檢測EGCG可以誘導(dǎo)HO-1的表達(dá)；（8）免疫組化法觀察EGCG可誘導(dǎo)大鼠皮膚組織的HO-1的表達(dá)。 結(jié)論EGCG對人皮膚HaCaT細(xì)胞具有輻射保護(hù)作用，EGCG可能通過清除X射線引起的HaCaT細(xì)胞內(nèi)的自由基，緩解G2期阻滯，改變凋亡調(diào)控蛋白Bcl-2、Bax及氧化應(yīng)激相關(guān)蛋白HO-1的表達(dá)等途徑從而發(fā)揮輻射保護(hù)作用。
【關(guān)鍵詞】：EGCG 輻射防護(hù)作用 皮膚HaCaT細(xì)胞 HO-1
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R818.74
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 引言9-12
• 第一部分 EGCG 對人皮膚細(xì)胞的輻射防護(hù)作用研究12-35
• 前言12-13
• 材料和方法13-17
• 結(jié)果17-30
• 討論30-35
• 第二部分 EGCG 對人皮膚細(xì)胞的輻射防護(hù)作用機制的研究35-52
• 材料和方法36-41
• 結(jié)果41-48
• 討論48-52
• 第三部分 EGCG 誘導(dǎo) HO-1 的體內(nèi)實驗研究52-58
• 材料和方法52-53
• 結(jié)果53-56
• 討論56-58
• 結(jié)論58-59
• 參考文獻(xiàn)59-63
• 綜述63-74
• 參考文獻(xiàn)69-74
• 發(fā)表論文及其它74-75
• 縮略詞表75-76
• 致謝76-77

【共引文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：EGCG對人皮膚細(xì)胞的輻射防護(hù)作用及機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：400311