發(fā)布時間：2017-05-25 00:00

  本文關(guān)鍵詞：氚照射對大鼠神經(jīng)元遷移相關(guān)因子表達(dá)及學(xué)習(xí)記憶功能的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:本研究以氚水(HTO)處理體外培養(yǎng)的神經(jīng)細(xì)胞建立細(xì)胞受照模型,孕鼠腹腔單次注射氚水建立胎鼠體內(nèi)照射模型,觀察不同濃度氚水照射條件下體外培養(yǎng)神經(jīng)細(xì)胞遷移距離的變化,大鼠神經(jīng)細(xì)胞遷移相關(guān)因子如細(xì)胞骨架蛋白(F-actin,α-tubulin,tau,MAP2)、神經(jīng)細(xì)胞粘附分子(L1,NCAM)、腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子BDNF m RNA和細(xì)胞外基質(zhì)糖蛋白Reelin m RNA的表達(dá)情況;通過Morris水迷宮實驗分析受照仔鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力受損情況,從而探討氚輻射對神經(jīng)細(xì)胞遷移及大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響。方法:(1)神經(jīng)細(xì)胞原代培養(yǎng)出生后1天新生鼠,在無菌條件下取海馬,制備1.25×106/ml神經(jīng)細(xì)胞懸液,加入含DMEM/F12(1:1)和B27的培養(yǎng)基中,放置于37℃,5%CO2,飽和濕度的培養(yǎng)箱中。(2)阿糖胞苷處理及細(xì)胞分組神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)第3天后加入終濃度為3ug/ml的阿糖胞苷作用24小時。培養(yǎng)第7天,以0,3.7×102,3.7×103,3.7×104,3.7×105,3.7×106Bq/ml濃度氚水照射神經(jīng)細(xì)胞,照射24h。(3)神經(jīng)細(xì)胞遷移距離測定以Leica AF 6000活細(xì)胞工作站測受照神經(jīng)細(xì)胞遷移的距離,活細(xì)胞工作站儀器可以自動聚焦,進(jìn)行單細(xì)胞追蹤,連續(xù)監(jiān)測8小時,結(jié)果使用LAS-AF-Lite 2.3.0軟件分析。(4)拉曼光譜分析神經(jīng)細(xì)胞蛋白表達(dá)情況使用Xplo RA拉曼光譜分析儀在532nm波長激光激發(fā)下光鏡觀察細(xì)胞內(nèi)蛋白表達(dá)分布情況,結(jié)果使用Image-Pro Plus(IPP)軟件進(jìn)行分析。(5)實驗動物分組及模型制備Sprague-Dawley(SD)大鼠30只,體重(180-240)g,以雌雄(2:1)的比例隨機(jī)進(jìn)行配對合籠,每日8:00觀察陰栓。將發(fā)現(xiàn)陰栓日定為胚胎第0天(E0),仔鼠出生當(dāng)日定為出生后第0天(P0)。在胚胎發(fā)育第14天(E14)將孕鼠隨機(jī)分為實驗和對照兩組(每組各10只),實驗組孕鼠單次腹腔注射濃度為3.7×106 Bq/g體液的氚水,對照鼠注射等體積的生理鹽水。(6)仔鼠腦組織標(biāo)本制備于胚胎發(fā)育第18天(E18),每組各選取3只孕鼠,每只大鼠經(jīng)剖腹手術(shù)各取6只胎鼠。出生后當(dāng)天(P0)每組分別處死18只仔鼠,開顱取腦,將腦組織放置在含4%多聚甲醛的磷酸鹽緩沖液中浸泡固定24小時后切除小腦,使用梯度濃度的乙醇進(jìn)行脫水,石蠟進(jìn)行包埋。(7)免疫組織化學(xué)染色用En Vision法檢測E18胎鼠和P0仔鼠大腦神經(jīng)細(xì)胞F-actin,α-tubulin,tau,MAP2蛋白的表達(dá)情況。(8)Western blot檢測神經(jīng)細(xì)胞骨架蛋白(F-actin,α-tubulin,tau,MAP2)及神經(jīng)細(xì)胞粘附分子(L1、NCAM)的表達(dá)情況。以Quantity-One生物醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行目的條帶半定量分析,各條帶累積光密度(Integral Optical Density,IOD)值除以β-actin的IOD值,通過比較各受照組相對強(qiáng)度(relative intensity,RI)值觀察蛋白表達(dá)的變化情況。(9)RT-PCR半定量檢測細(xì)胞內(nèi)BDNF m RNA及Reelin m RNA表達(dá),以QuantityOne生物醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行半定量分析,將各樣品條帶IOD值除以β-actin的IOD值,通過比較各受照組相對強(qiáng)度(relative intensity,RI)值觀察蛋白表達(dá)的變化情況。(10)Morris水迷宮測量仔鼠腦機(jī)能出生后38-42天(P38-P42),利用Morris水迷宮進(jìn)行定向航行訓(xùn)練和空間探索實驗,測逃避潛伏期和目標(biāo)象限停留時間以及目標(biāo)象限穿行次數(shù),了解仔鼠學(xué)習(xí)和記憶能力,分析氚輻射對仔鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響。結(jié)果:(1)顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)第7天神經(jīng)元細(xì)胞較第3天的胞體飽滿,立體感強(qiáng),折光性好、光暈明顯,細(xì)胞與細(xì)胞之間突起聯(lián)系更為緊密,胞體及突起表面平滑。(2)遷移距離測定結(jié)果顯示,受0~3.7×106 Bq/m L濃度氚水照射24小時,神經(jīng)細(xì)胞的遷移距離呈現(xiàn)出濃度依賴性減小,受照細(xì)胞遷移距離明顯小于對照(p0.05)。(3)Western blot結(jié)果顯示,隨著氚水濃度的逐漸增大F-actin,α-tubulin,tau,MAP2,NCAM,L1的表達(dá)逐漸減弱(P0.05)。(4)RT-PCR結(jié)果顯示,不同濃度氚水照射24h后,BDNF m RNA和Reelin m RNA表達(dá)量隨著氚水濃度的不斷增大而逐漸減少。(5)拉曼光譜結(jié)果顯示,隨著氚水濃度的逐漸增大,神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)蛋白信號強(qiáng)度逐漸減弱。(6)免疫組織化學(xué)分析結(jié)果表明,與對照比,E18及P0實驗組大腦海馬神經(jīng)細(xì)胞細(xì)胞骨架蛋白F-actin,α-tubulin,tau,MAP2表達(dá)量均降低(P0.05)。(7)Morris水迷宮實驗證實,受照鼠逃避潛伏期較對照鼠明顯延長(P0.05),而其在目標(biāo)象限停留時間及目標(biāo)象限穿行次數(shù)明顯少于對照(P0.05),說明氚宮內(nèi)照射后仔鼠的空間學(xué)習(xí)記憶能力較對照組明顯降低。結(jié)論:氚水照射神經(jīng)元細(xì)胞,可使神經(jīng)細(xì)胞骨架蛋白(F-actin,α-tubulin,tau,MAP2)、神經(jīng)細(xì)胞粘附分子(NCAM,L1)、腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子BDNF m RNA和細(xì)胞外基質(zhì)糖蛋白Reelin m RNA等神經(jīng)細(xì)胞遷移相關(guān)分子表達(dá)量減少,影響神經(jīng)元細(xì)胞正常遷移,最終導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞分布異常,從而誘發(fā)仔鼠腦機(jī)能出現(xiàn)障礙,表現(xiàn)為空間學(xué)習(xí)記憶能力受損。
【關(guān)鍵詞】：大鼠 神經(jīng)細(xì)胞 氚水 神經(jīng)細(xì)胞遷移相關(guān)因子 空間學(xué)習(xí)記憶能力
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R811
【目錄】：

• 英文縮略詞對照表5-6
• 中文摘要6-9
• Abstract9-13
• 前言13-15
• 材料與方法15-24
• 實驗方法24-32
• 統(tǒng)計學(xué)分析32
• 結(jié)果32-42
• 討論42-46
• 結(jié)論46-47
• 參考文獻(xiàn)47-56
• 附錄56-58
• 致謝58-59
• 綜述59-65
• 參考文獻(xiàn)63-65

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 胡金鳳,耿美玉;老年斑、神經(jīng)元纖維纏結(jié)與硫酸多糖[J];中國藥理學(xué)通報;2003年01期

2 姚曉波;王永生;邱俊;吳翠萍;陶新全;王明明;;氚宮內(nèi)照射對大鼠神經(jīng)細(xì)胞分布及腦機(jī)能的影響[J];安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2014年10期

  本文關(guān)鍵詞：氚照射對大鼠神經(jīng)元遷移相關(guān)因子表達(dá)及學(xué)習(xí)記憶功能的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：392254