發(fā)布時間：2017-04-30 22:00

  本文關(guān)鍵詞：AuNPs-PEG-AS1411納米粒子對腫瘤細胞輻射敏感性影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:本研究課題分別用MPA-PEG、PEG-AS1411、PEG-c Apt來修飾納米金粒子,制備得Au NPs@MPA-PEG、Au NPs-PEG-AS1411、Au NPs-PEG-c Apt納米粒子。通過檢測不同濃度Au NPs@MPA-PEG、Au NPs-PEG-AS1411、Au NPs-PEG-c Apt納米粒子聯(lián)合X射線照射后對人宮頸癌He La細胞存活率影響和Au NPs@MPA-PEG、Au NPs-PEG-AS1411、Au NPs-PEG-c Apt納米粒子在人宮頸癌He La細胞及細胞核的分布,及觀察經(jīng)Au NPs@MPA-PEG、Au NPs-PEG-AS1411、Au NPs-PEG-c Apt納米粒子預(yù)處理聯(lián)合X射線對He La細胞DNA損傷的影響,探討Au NPs@MPA-PEG、Au NPs-PEG-AS1411、Au NPs-PEG-c Apt納米粒子對人宮頸癌He La細胞輻射敏感性影響。方法:采用檸檬酸鹽還原法還原氯金酸制備納米金粒子,并分別用MPA-PEG、PEG-AS1411、PEG-c Apt來修飾納米金粒子,制備得Au NPs@MPA-PEG、Au NPs-PEG-AS1411、Au NPs-PEG-c Apt納米粒子;用納米粒度及zeta電位分析儀檢測其粒徑;紫外可見近紅外分光光度計檢測其吸收光譜;電感耦合等離子體高分辨質(zhì)譜儀檢測其濃度。采用CCK-8法檢測細胞活性,研究Au NPs@MPA-PEG、Au NPs-PEG-AS1411、Au NPs-PEG-c Apt納米粒子對人宮頸癌He La細胞的急性毒性作用;克隆形成法檢測Au NPs@MPA-PEG、Au NPs-PEG-AS1411、Au NPs-PEG-c Apt納米粒子對He La細胞的長期毒性作用。采用克隆形成法檢測不同濃度Au NPs@MPA-PEG、Au NPs-PEG-AS1411、Au NPs-PEG-c Apt納米粒子聯(lián)合X射線照射后對人宮頸癌He La細胞存活率影響;采用電感耦合等離子體高分辨質(zhì)譜儀檢測每個He La細胞及細胞核對Au NPs@MPA-PEG、Au NPs-PEG-AS1411、Au NPs-PEG-c Apt納米粒子的吸收量。采用γ-H2AX熒光斑點法檢測DNA雙鏈斷裂數(shù)量,研究Au NPs@MPA-PEG、Au NPs-PEG-AS1411、Au NPs-PEG-c Apt納米粒子對X射線導(dǎo)致的He La細胞DNA雙鏈斷裂影響。結(jié)果:⑴采用檸檬酸鹽還原法還原氯金酸制備尺寸均勻的納米金粒子(Au NPs),粒徑大小為44nm;分別用MPA-PEG、PEG-AS1411、PEG-c Apt對其修飾后制得Au NPs@MPA-PEG、Au NPs-PEG-AS1411、Au NPs-PEG-c Apt納米粒子,其粒徑大小分別為48nm、50nm、50nm。⑵CCK-8實驗結(jié)果顯示:不同濃度Au NPs@MPA-PEG、Au NPs-PEG-AS1411、Au NPs-PEG-c Apt納米粒子分別處理人宮頸癌He La細胞24h、48h、72h后,He La細胞存活率均大于95%,表明Au NPs@MPA-PEG、Au NPs-PEG-AS1411、Au NPs-PEG-c Apt納米粒子的急性細胞毒性很小。采用細胞克隆形成法檢測不同濃度的Au NPs@MPA-PEG、Au NPs-PEG-AS1411、Au NPs-PEG-c Apt三種納米金粒子對He La細胞的長期的毒性作用。結(jié)果表明:隨著藥物濃度的增加,在不同濃度的Au NPs@MPA-PEG、Au NPs-PEG-AS1411、Au NPs-PEG-c Apt的作用下,He La細胞的存活率明顯降低。當Au NPs@MPA-PEG、Au NPs-PEG-AS1411、Au NPs-PEG-c Apt濃度達到10mg/L時,He La細胞的存活率分別為84.7%、78.2%、80.6%,表明Au NPs@MPA-PEG、Au NPs-PEG-AS1411、Au NPs-PEG-c Apt對He La細胞具有長期毒性作用,濃度越高,毒性越大。⑶每個He La細胞及細胞核對Au NPs@MPA-PEG、Au NPs-PEG-AS1411、Au NPs-PEG-c Apt的吸收結(jié)果顯示:當藥物培養(yǎng)濃度達到10mg/L時,He La細胞及細胞核對Au NPs-PEG-AS1411的吸收量最大,Au NPs-PEG-c Apt與Au NPs@MPA-PEG的結(jié)果相差很小。⑷克隆形成實驗檢測細胞受輻照后,細胞存活率顯示:Au NPs@MPA-PEG、Au NPs-PEG-AS1411、Au NPs-PEG-c Apt在濃度為0~10mg/L范圍內(nèi)時,不同濃度藥物聯(lián)合X射線照射后,細胞存活率降低,具有劑量-效應(yīng)關(guān)系。由輻照劑量-細胞存活曲線可知,低劑量區(qū)“肩區(qū)”部分縮小變窄,直線斜率部分變大,且各個計量點的存活率均低于正常對照組(P0.05),即表明Au NPs@MPA-PEG、Au NPs-PEG-AS1411、Au NPs-PEG-c Apt對He La細胞具有輻射增敏作用。當Au NPs@MPA-PEG、Au NPs-PEG-AS411、Au NPs-PEG-c Apt濃度達到10mg/L時,其增敏比分別為:1.12、1.19、1.12。其中,Au NPs-PEG-AS411的放射增敏比最大,達到1.19。⑸DNA損傷實驗結(jié)果顯示:經(jīng)過Au濃度為10mg/L的Au納米粒子預(yù)處理的細胞細胞核內(nèi)DNA雙鏈斷裂所產(chǎn)生的熒光斑點數(shù)量比單純照射組細胞細胞核內(nèi)DNA雙鏈斷裂所產(chǎn)生的熒光斑點數(shù)多,Au NPs-PEG-AS1411處理組差別最大。當照射劑量為8Gy時,Au NPs-PEG-AS1411組細胞核內(nèi)DNA雙鏈斷裂所產(chǎn)生的熒光斑點數(shù)為34.69±3.04,而單純照射組細胞核內(nèi)DNA雙鏈斷裂所產(chǎn)生的熒光斑點數(shù)為20.78±2.73,Au NPs@MPA-PEG組與Au NPs-PEG-c Apt組分別為26.05±1.86、27.05±2.16。Au NPs@MPA-PEG組與Au NPs-PEG-c Apt組相比沒有明顯差別,Au NPs-PEG-AS1411組DNA雙鏈斷裂數(shù)量明顯比Au NPs@MPA-PEG組、Au NPs-PEG-c Apt組多。結(jié)論:⑴在常溫條件下,分別制得粒徑為44nm、48nm、50nm、50nm的Au NPs、Au NPs@MPA-PEG、Au NPs-PEG-AS1411、Au NPs-PEG-c Apt納米粒子。⑵Au NPs@MPA-PEG、Au NPs-PEG-AS1411、Au NPs-PEG-c Apt納米粒子對He La細胞的增殖沒有表現(xiàn)出明顯抑制作用,表明粒子急性細胞毒性很小。在克隆實驗中,當Au NPs@MPA-PEG、Au NPs-PEG-AS1411、Au NPs-PEG-c Apt濃度達到10mg/L時,He La細胞的存活率分別為84.7%、78.2%、80.6%,表明Au NPs@MPA-PEG、Au NPs-PEG-AS1411、Au NPs-PEG-c Apt對He La細胞具有長期毒性作用。⑶He La細胞及細胞核對Au NPs-PEG-AS1411的吸收量最多。表明用AS1411修飾納米金粒子,可以增加細胞對納米金粒子的吸收。⑷在Au濃度為0~10mg/L范圍內(nèi)時,Au NPs@MPA-PEG、Au NPs-PEG-AS1411、Au NPs-PEG-c Apt對He La細胞具有輻射增敏作用。當Au濃度達到10mg/L時,Au NPs-PEG-AS411的放射增敏比最大,達到1.19。⑸經(jīng)過Au納米粒子預(yù)處理組細胞DNA雙鏈斷裂數(shù)量比單純照射組多。Au NPs-PEG-AS1411組最多,Au NPs@MPA-PEG組與Au NPs-PEG-c Apt組相比沒有明顯差別。
【關(guān)鍵詞】：納米金粒子 AS1411 cApt HeLa細胞 細胞增殖 細胞吸收量 輻射敏感性 DNA損傷
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R730.55
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-14
• 前言14-20
• 第一部分 AuNPs@MPA-PEG、AuNPs-PEG-AS1411、AuNPs-PEG-cApt的制備20-30
• 一、實驗材料和方法20-22
• 1 試劑和儀器20-21
• 2 試劑配制21
• 3 實驗方法21-22
• 二、實驗結(jié)果22-27
• 三、討論27-30
• 第二部分 AuNPs@MPA-PEG、AuNPs-PEG-AS1411、AuNPs-PEG-cApt對宮頸癌HeLa細胞的毒性研究30-37
• 一、實驗材料和方法30-33
• 1 試劑和儀器30
• 2 試劑配制30-31
• 3 細胞株31
• 4 細胞凍存、復(fù)蘇與培養(yǎng)31
• 5 CCK-8 法檢測細胞的存活率31-32
• 6 克隆形成法檢測細胞的存活率32-33
• 7 統(tǒng)計學(xué)分析33
• 二、實驗結(jié)果33-35
• 三、討論35-37
• 第三部分 AuNPs@MPA-PEG、AuNPs-PEG-AS1411、AuNPs-PEG-cApt的細胞吸收量37-44
• 一、實驗材料和方法37-40
• 1 試劑和儀器37
• 2 試劑配制37-38
• 3 細胞株38
• 4 細胞凍存、復(fù)蘇與培養(yǎng)38-39
• 5 實驗方法39-40
• 6 統(tǒng)計學(xué)分析40
• 二、實驗結(jié)果40-42
• 三、討論42-44
• 第四部分 AuNPs@MPA-PEG、AuNPs-PEG-AS1411、AuNPs-PEG-cApt聯(lián)合X射線對HeLa細胞存活率影響44-53
• 一、實驗材料和方法44-47
• 1 試劑和儀器44
• 2 試劑配制44-45
• 3 細胞株45
• 4 細胞凍存、復(fù)蘇與培養(yǎng)45
• 5 實驗方法45-47
• 6 統(tǒng)計學(xué)分析47
• 二、實驗結(jié)果47-50
• 三、討論50-53
• 第五部分 AuNPs@MPA-PEG、AuNPs-PEG-AS1411、AuNPs-PEG-cApt聯(lián)合X射線對HeLa細胞DNA損傷的影響53-60
• 一、實驗材料和方法53-55
• 1 試劑和儀器53
• 2 試劑配制53-54
• 3 細胞株54
• 4 細胞凍存、復(fù)蘇與培養(yǎng)54
• 5 實驗方法54-55
• 6 統(tǒng)計學(xué)分析55
• 二、實驗結(jié)果55-58
• 三、討論58-60
• 結(jié)論60-61
• 參考文獻61-68
• 綜述 納米金在生物醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用68-80
• 參考文獻74-80
• 攻讀學(xué)位期間本人出版或公開發(fā)表的論著、論文80-81
• 中英文對照縮略詞表81-82
• 致謝82-83

【二級參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 王楠;徐淑坤;王文星;;納米金生物探針及其應(yīng)用[J];化學(xué)進展;2007年Z1期

2 唐芳瓊,孟憲偉,陳東,冉均國,茍立,鄭昌瓊　;納米顆粒增強的葡萄糖生物傳感器[J];中國科學(xué)(B輯);2000年02期

  本文關(guān)鍵詞：AuNPs-PEG-AS1411納米粒子對腫瘤細胞輻射敏感性影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：337633