目的分離純化大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞（bone mesenchymal stem cells, BMSCS）,進行干細胞特性鑒定,并進行肝細胞樣細胞的體外定向誘導(dǎo)分化。方法全骨髓貼壁法分離純化大鼠BMSCs,流式細胞儀檢測其細胞表面標志和細胞周期,細胞免疫化學法進行堿性磷酸酶及Nestin染色,證明其向成骨、神經(jīng)祖細胞方向分化的潛能;采用HGF、肝切除后血清體外誘導(dǎo)BMSCs 3、7、14、21天,RT-PCR及細胞免疫化學方法檢測AFP、ALB的表達情況。結(jié)果大鼠骨髓中分離純化后的細胞,符合BMSCs的形態(tài)特征,超過99%的細胞表面標志為CD29+、CD90+、CD45-,細胞周期分析示超過85%處于G0/G1期,具有向骨、神經(jīng)祖細胞分化的潛能,HGF及血清誘導(dǎo)下,不同的時間點可檢測到AFP、ALB的mRNA表達,ALB較AFP的mRNA表達滯后。細胞免疫化學法能檢測到胞漿內(nèi)AFP、ALB的表達。結(jié)論本實驗分離純化的細胞,確為BMSCs,具有干細胞特性,具有向肝實質(zhì)細胞方向定向分化的潛能,可作為肝干細胞來源。 

【文章來源】：東南大學江蘇省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：112 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

大鼠BMSCs10d（P1,×200）

大鼠BMSCs20d（P3,×200）

誘導(dǎo)7d的細胞（一抗為兔抗鼠nestin單克隆抗體）見部分細胞呈現(xiàn)紅色

【參考文獻】：
期刊論文
[1]自體骨髓干細胞移植治療慢性肝衰竭研究[J]. 姚鵬,胡大榮,王帥,聞煒,周一鳴,龔麗娟.  肝臟. 2005(03)
[2]綠色熒光蛋白基因轉(zhuǎn)染大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞的實驗研究[J]. 李志勇,劉磊,田衛(wèi)東,陳希哲,閻征斌,林云鋒.  中華口腔醫(yī)學雜志. 2005(02)
[3]臍血間充質(zhì)干細胞磁探針標記和MR成像研究[J]. 居勝紅,滕皋軍,毛曦,張愛鳳,張宇,馬明,顧寧.  中華放射學雜志. 2005(01)
[4]核素干細胞活體示蹤[J]. 丁為民,何義杰,田嘉禾.  核技術(shù). 2004(11)
[5]酸性成纖維細胞生長因子和肝細胞生長因子在肝干細胞分化成熟中的作用[J]. 王悍,滕皋軍,繆競陶,張貴祥.  中華放射學雜志. 2004(02)
[6]體外培養(yǎng)人胎肝細胞與永生化L-02肝細胞的生物學性狀比較[J]. 孔煒偉,滕皋軍.  中華放射學雜志. 2004(02)
[7]骨髓間充質(zhì)干細胞的研究進展[J]. 邱麗燕,王金福.  生物工程學報. 2003(02)
[8]骨髓干細胞向肝系細胞分化的研究[J]. 李文晰,段芳齡.  胃腸病學和肝病學雜志. 2003(01)
[9]骨髓源性肝干細胞的研究[J]. 周播江,鐘翠平.  中國組織化學與細胞化學雜志. 2002(04)
[10]肝細胞移植實驗研究中大鼠肝細胞的凍存與復(fù)蘇初探[J]. 李力,滕皋軍.  中華放射學雜志. 2002(04)



本文編號：3071007