目的:探討靜脈注射USPIO濃度為20mg/kg時,兔骨髓間充質(zhì)干細胞的標記率及USPIO對兔骨髓間充質(zhì)干細胞增殖性及多向分化能力的影響,并利用MRI活體示蹤USPIO標記兔骨髓間充質(zhì)干細胞移植修復(fù)兔關(guān)節(jié)軟骨缺損的進程及信號強度,為進一步實驗的USPIO靜脈注射濃度的設(shè)置提供實驗基礎(chǔ)。方法:(1)將6只新西蘭白兔完全隨機分為2組,每組3只,以組為單位,實驗組經(jīng)耳緣靜脈注射20mg/kg USPIO,對照組不做任何處理,48h后處死各組兔,分離、培養(yǎng)兔BMSCs至第三代作為實驗對象;(2)普魯士藍染色測量各組兔BMSCs的磁標記率,增強型cck-8試劑盒觀察BMSCs增殖性強弱,并對各組兔BMSCs進行多向誘導(dǎo)分化實驗,觀察成骨、成脂、成軟骨能力的變化;(3)將36只新西蘭白兔完全隨機分為4組,每組9只,制備兔雙膝關(guān)節(jié)軟骨缺損模型,實驗組注入USPIO標記兔BMSCs-海藻酸鈉凝膠復(fù)合體,陽性對照組注入未標記兔BMSCs-海藻酸鈉凝膠復(fù)合體,陰性對照組注入純海藻酸鈉凝膠,空白組不做任何處理,分別于術(shù)后1個月、2個月、3個月進行大體觀察和MRI掃描,并進行組織學(xué)研究。(4)收集數(shù)據(jù),并進行統(tǒng)計學(xué)分析。結(jié)果:(1)經(jīng)兔耳緣靜脈注射20mg/kg USPIO后提取、培養(yǎng)獲得的兔BMSCs與對照組兔BMSCs相比,細胞形態(tài)基本相同;(2)普魯士藍染色顯示經(jīng)USPIO標記的兔BMSCs胞質(zhì)內(nèi)可見大量藍染顆粒,表明USPIO已被兔BMSCs吞噬;利用增強型CCK-8試劑盒反應(yīng),通過自動酶標儀測得吸光度值繪制增殖曲線顯示,濃度為20mg/kg的USPIO不影響兔BMSCs的增殖活性;經(jīng)多向誘導(dǎo)分化實驗后顯示,濃度為20mg/kg的USPIO不影響兔BMSCs的多向分化能力;(3)BMSCs移植治療兔膝關(guān)節(jié)軟骨缺損顯示,隨著時間的遞增,標記細胞移植組與未標記細胞移植組的軟骨缺損逐漸被修復(fù),純海藻酸鈉移植組與空白組的軟骨缺損修復(fù)緩慢。(4)統(tǒng)計學(xué)分析結(jié)果顯示,BMSCs移植治療兔膝關(guān)節(jié)軟骨缺損后,同時期標記細胞移植組與未標記細胞移植組的修復(fù)效果未見明顯差異(P0.05),與純海藻酸鈉移植組、空白組修復(fù)效果相比有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05);同時期標記細胞移植組與未標記細胞移植組的軟骨缺損處的SI未見明顯統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。結(jié)論:(1)當靜脈注射USPIO濃度為20mg/kg時,兔BMSCs可被USPIO標記;(2)該注射濃度不會影響兔BMSCs的生理活性;(3)當靜脈注射USPIO濃度為20mg/kg時,被標記的兔BMSCs可用于移植治療兔膝關(guān)節(jié)軟骨缺損,但未能明顯被MRI示蹤。
【學(xué)位單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2017
【中圖分類】：R445.2;R684
【部分圖文】：

圖 2-8 40x代細胞培養(yǎng)一周左右的生長情況（40x），見大細胞培養(yǎng)后見細胞融合度達 80%以上時，細胞呈圓形、漂浮狀，傳代后細胞貼壁并到 80%以上后，繼續(xù)進行傳代。傳代完成后骨髓間充質(zhì)干細胞的純度增加。

山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文.3 USPIO 對 BMSCs 多向分化能力的影響Ⅰ.成骨分化能力的測定: BMSCs 經(jīng)成骨誘導(dǎo)分化 3 周后，顯微鏡下可見細狀生長，細胞集落形成，細胞基質(zhì)中可見大量的鈣鹽沉積，經(jīng)茜素紅染色后胞質(zhì)內(nèi)的紅色鈣結(jié)節(jié)，證明 BMSCs 的成骨能力未受 USPIO 影響。

胞質(zhì)內(nèi)的紅色鈣結(jié)節(jié)，證明 BMSCs 的成骨能力未受 USPIO 影響。圖 2-14 40x 圖 2-15 100x如圖 2-14、2-15 所示為 P3 USPIO 標記 BMSCs 經(jīng)成骨誘導(dǎo)后茜素紅染色結(jié)果。Ⅱ.成脂分化能力的測定：成脂誘導(dǎo)分化 20 天左右，顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)細胞誘導(dǎo)前明顯增大，大量的脂肪滴存在于細胞質(zhì)內(nèi)，經(jīng)油紅 O 染色后顯示為證明 BMSCs 的成脂能力未受 USPIO 影響。
【參考文獻】

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本文編號：2888913