目的:探討靜脈注射USPIO濃度為20mg/kg時,兔骨髓間充質(zhì)干細胞的標記率及USPIO對兔骨髓間充質(zhì)干細胞增殖性及多向分化能力的影響,并利用MRI活體示蹤USPIO標記兔骨髓間充質(zhì)干細胞移植修復兔關節(jié)軟骨缺損的進程及信號強度,為進一步實驗的USPIO靜脈注射濃度的設置提供實驗基礎。方法:(1)將6只新西蘭白兔完全隨機分為2組,每組3只,以組為單位,實驗組經(jīng)耳緣靜脈注射20mg/kg USPIO,對照組不做任何處理,48h后處死各組兔,分離、培養(yǎng)兔BMSCs至第三代作為實驗對象;(2)普魯士藍染色測量各組兔BMSCs的磁標記率,增強型cck-8試劑盒觀察BMSCs增殖性強弱,并對各組兔BMSCs進行多向誘導分化實驗,觀察成骨、成脂、成軟骨能力的變化;(3)將36只新西蘭白兔完全隨機分為4組,每組9只,制備兔雙膝關節(jié)軟骨缺損模型,實驗組注入USPIO標記兔BMSCs-海藻酸鈉凝膠復合體,陽性對照組注入未標記兔BMSCs-海藻酸鈉凝膠復合體,陰性對照組注入純海藻酸鈉凝膠,空白組不做任何處理,分別于術后1個月、2個月、3個月進行大體觀察和MRI掃描,并進行組織學研究。(4)收集數(shù)據(jù),并進行統(tǒng)計學分析。結果:(1)經(jīng)兔耳緣靜脈注射20mg/kg USPIO后提取、培養(yǎng)獲得的兔BMSCs與對照組兔BMSCs相比,細胞形態(tài)基本相同;(2)普魯士藍染色顯示經(jīng)USPIO標記的兔BMSCs胞質(zhì)內(nèi)可見大量藍染顆粒,表明USPIO已被兔BMSCs吞噬;利用增強型CCK-8試劑盒反應,通過自動酶標儀測得吸光度值繪制增殖曲線顯示,濃度為20mg/kg的USPIO不影響兔BMSCs的增殖活性;經(jīng)多向誘導分化實驗后顯示,濃度為20mg/kg的USPIO不影響兔BMSCs的多向分化能力;(3)BMSCs移植治療兔膝關節(jié)軟骨缺損顯示,隨著時間的遞增,標記細胞移植組與未標記細胞移植組的軟骨缺損逐漸被修復,純海藻酸鈉移植組與空白組的軟骨缺損修復緩慢。(4)統(tǒng)計學分析結果顯示,BMSCs移植治療兔膝關節(jié)軟骨缺損后,同時期標記細胞移植組與未標記細胞移植組的修復效果未見明顯差異(P0.05),與純海藻酸鈉移植組、空白組修復效果相比有統(tǒng)計學差異(P0.05);同時期標記細胞移植組與未標記細胞移植組的軟骨缺損處的SI未見明顯統(tǒng)計學差異(P0.05)。結論:(1)當靜脈注射USPIO濃度為20mg/kg時,兔BMSCs可被USPIO標記;(2)該注射濃度不會影響兔BMSCs的生理活性;(3)當靜脈注射USPIO濃度為20mg/kg時,被標記的兔BMSCs可用于移植治療兔膝關節(jié)軟骨缺損,但未能明顯被MRI示蹤。
【學位單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2017
【中圖分類】：R445.2;R684
【部分圖文】：

圖 2-8 40x代細胞培養(yǎng)一周左右的生長情況（40x），見大細胞培養(yǎng)后見細胞融合度達 80%以上時，細胞呈圓形、漂浮狀，傳代后細胞貼壁并到 80%以上后，繼續(xù)進行傳代。傳代完成后骨髓間充質(zhì)干細胞的純度增加。

山西醫(yī)科大學碩士學位論文.3 USPIO 對 BMSCs 多向分化能力的影響Ⅰ.成骨分化能力的測定: BMSCs 經(jīng)成骨誘導分化 3 周后，顯微鏡下可見細狀生長，細胞集落形成，細胞基質(zhì)中可見大量的鈣鹽沉積，經(jīng)茜素紅染色后胞質(zhì)內(nèi)的紅色鈣結節(jié)，證明 BMSCs 的成骨能力未受 USPIO 影響。

胞質(zhì)內(nèi)的紅色鈣結節(jié)，證明 BMSCs 的成骨能力未受 USPIO 影響。圖 2-14 40x 圖 2-15 100x如圖 2-14、2-15 所示為 P3 USPIO 標記 BMSCs 經(jīng)成骨誘導后茜素紅染色結果。Ⅱ.成脂分化能力的測定：成脂誘導分化 20 天左右，顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)細胞誘導前明顯增大，大量的脂肪滴存在于細胞質(zhì)內(nèi)，經(jīng)油紅 O 染色后顯示為證明 BMSCs 的成脂能力未受 USPIO 影響。
【參考文獻】

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1 曹春艷;康寧;嚴笠;胡正云;申志惠;王黔;;速眠新Ⅱ復合水合氯醛對實驗兔全麻效果的比較[J];中國比較醫(yī)學雜志;2014年05期

2 高振華;胡曉書;蔡華松;尹軍強;劉大偉;崔宇;;SPIO標記兔BMSCs的生物學特性與體外MRI顯像研究[J];中國CT和MRI雜志;2012年05期

3 金旭紅;楊柳;張壽;段小軍;王富友;譚洪波;;超順磁性氧化鐵標記對骨髓間充質(zhì)干細胞多向分化誘導的影響[J];生物醫(yī)學工程學雜志;2012年01期

4 侯志超;孫劍;甄俊平;衛(wèi)小春;;關節(jié)軟骨損傷修復的MRI評價[J];國際醫(yī)學放射學雜志;2011年05期

5 王芳;陸菁菁;金征宇;;新型磁共振對比劑USPIO及應用研究現(xiàn)狀[J];國際醫(yī)學放射學雜志;2008年05期

6 劉峴;USPIO粒子造影劑及其應用[J];中國醫(yī)學影像學雜志;2002年01期

本文編號：2888913