【摘要】： 本研究使用超順磁性氧化鐵(Superparamagnetic Iron Oxide，SPIO)納米粒子對(duì)骨髓基質(zhì)細(xì)胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)進(jìn)行體外標(biāo)記，采用1．5T超導(dǎo)磁共振成像儀和顯微鏡線圈對(duì)SPIO標(biāo)記的BMSCs進(jìn)行體外及其植入帕金森(Parkinson’sdisease，PD)大鼠模型后的活體示蹤觀察，探討1．5T超導(dǎo)磁共振成像儀和顯微鏡線圈對(duì)SPIO標(biāo)記BMSCs體外觀察及PD大鼠模型尾靜脈和腦紋狀體立體定向植入SPIO(Feridex)標(biāo)記BMSCs后進(jìn)行活體動(dòng)態(tài)觀察的可行性。本組研究分為兩個(gè)部分。 第一部分超順磁性氧化鐵標(biāo)記骨髓基質(zhì)細(xì)胞MRI體外實(shí)驗(yàn)研究 目的：探討1．5T超導(dǎo)磁共振成像儀和顯微鏡線圈對(duì)SPIO標(biāo)記BMSCs進(jìn)行MRI體外觀察的可行性；篩選進(jìn)行SPIO標(biāo)記BMSCs MR體外成像相對(duì)有效的標(biāo)記細(xì)胞數(shù)及MR成像序列，為第二部分進(jìn)行SPIO標(biāo)記BMSCs MR活體示蹤實(shí)驗(yàn)提供依據(jù)。 方法：SPIO與多聚賴氨酸(PLL)聯(lián)合標(biāo)記BMSCs，對(duì)標(biāo)記細(xì)胞進(jìn)行普魯士藍(lán)染色；將不同數(shù)量的經(jīng)SPIO(Feridex)標(biāo)記或未標(biāo)記的BMSCs分別重懸于0．5 ml 1％瓊脂糖的Eppendof管中，按成像需要分成7組：①1×10~5個(gè)SPIO(Feridex)標(biāo)記BMSCs；②1×10~5個(gè)未標(biāo)記BMSCs；③5×10~5個(gè)SPIO(Feridex)標(biāo)記BMSCs；④5×10~5個(gè)未標(biāo)記BMSCs；⑤6×10~6個(gè)SPIO(Feridex)標(biāo)記BMSCs；⑥6×10~6個(gè)未標(biāo)記BMSCs；⑦瓊脂糖。使用1．5T超導(dǎo)磁共振成像儀和顯微鏡線圈對(duì)上述7組Eppendof管進(jìn)行掃描，掃描序列包括軸位(TRA)TSE-T1 WI、TSE-T2WI、FFE-T2WI，分析經(jīng)SPIO標(biāo)記及未標(biāo)記的BMSCs在三個(gè)不同序列的顯像特征，測(cè)量SPIO標(biāo)記及未標(biāo)記BMSCs的平均信號(hào)強(qiáng)度，計(jì)算SPIO標(biāo)記細(xì)胞與未標(biāo)記細(xì)胞間信號(hào)強(qiáng)度變化率，分析SPIO標(biāo)記細(xì)胞量與信號(hào)強(qiáng)度之間的相關(guān)關(guān)系。 結(jié)果：1．SPIO與多聚賴氨酸(PLL)聯(lián)合標(biāo)記BMSCs的有效率為100％，普魯士藍(lán)染色證實(shí)了每個(gè)標(biāo)記的細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有不等數(shù)量的藍(lán)染鐵顆粒；2．經(jīng)SPIO標(biāo)記的BMSCs在不同成像序列上的信號(hào)強(qiáng)度改變均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，TSE-T1WI、TSE-T2WI、FFE-T2WI三種成像序列中FFE-T2WI信號(hào)強(qiáng)度改變最明顯；經(jīng)SPIO標(biāo)記的BMSCs在不同數(shù)量細(xì)胞之間的信號(hào)強(qiáng)度改變均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，在本組研究范圍內(nèi)成像細(xì)胞數(shù)量越多，信號(hào)強(qiáng)度變化越明顯，標(biāo)記的細(xì)胞數(shù)和信號(hào)強(qiáng)度間存在正比關(guān)系；在同一成像序列條件下，不同數(shù)量未經(jīng)SPIO標(biāo)記BMSCs之間的信號(hào)強(qiáng)度改變均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論：1．SPIO能夠有效的標(biāo)記BMSCs；2．1．5T超導(dǎo)磁共振成像儀和顯微鏡線圈可對(duì)經(jīng)SPIO標(biāo)記的BMSCs進(jìn)行體外觀察；3．在TSE-T1WI、TSE-T2WI與FFE-T2WI序列中FFE-T2WI為MR體外觀察SPIO標(biāo)記BMSCs的最佳序列；4．SPIO標(biāo)記BMSCs在1×10~5～6×10~6細(xì)胞量范圍內(nèi)，信號(hào)強(qiáng)度改變隨著細(xì)胞量的增加呈數(shù)量依賴性改變。 第二部分超順磁性氧化鐵標(biāo)記骨髓基質(zhì)細(xì)胞植入帕金森大鼠模型后MRI活體示蹤研究 目的：探討1．5T超導(dǎo)磁共振成像儀和顯微鏡線圈對(duì)PD大鼠模型尾靜脈和腦紋狀體立體定向植入SPIO(Feridex)標(biāo)記BMSCs后進(jìn)行活體動(dòng)態(tài)觀察的可行性。 方法：根據(jù)細(xì)胞植入途徑及植入細(xì)胞的不同將30只PD大鼠模型分為4組：①SPIO(Feridex)標(biāo)記BMSCs紋狀體立體定向植入組：10只；②未標(biāo)記BMSCs紋狀體立體定向植入對(duì)照組：5只。③SPIO(Feridex)標(biāo)記BMSCs尾靜脈植入組：10只；④未標(biāo)記BMSCs尾靜脈植入對(duì)照組：5只。紋狀體立體定向植入組植入經(jīng)SPIO(Feridex)標(biāo)記或未標(biāo)記BMSCs量均為5ul，(細(xì)胞濃度：2×10~4／ul)；尾靜脈植入組植入經(jīng)SPIO(Feridex)標(biāo)記或未標(biāo)記BMSCs量均為2ml，(細(xì)胞濃度：3×10~6／ml)，分別于植入后1天，第2、第4、第6和第8周使用1．5T超導(dǎo)磁共振成像儀和顯微鏡線圈對(duì)上述4組大鼠用FFE-T2WI序列進(jìn)行掃描，觀察PD大鼠模型腦內(nèi)信號(hào)改變，測(cè)量信號(hào)強(qiáng)度。植入后第2周MR掃描后每組處死2只大鼠，第8周MR掃描后處死剩下所有PD大鼠模型，均在處死后立即取腦組織，冰凍切片后行普魯士藍(lán)染色及免疫組化染色。 結(jié)果：1．PD大鼠模型紋狀體立體定向植入SPIO(Feridex)標(biāo)記BMSCs組MRFFE-T2WI序列掃描腦紋狀體見低信號(hào)區(qū)，隨著時(shí)間的推移，低信號(hào)區(qū)范圍逐漸變大，信號(hào)逐漸減弱。PD大鼠模型紋狀體立體定向植入未標(biāo)記BMSCs組MR FFE-T2WI序列掃描腦紋狀體內(nèi)未見低信號(hào)改變。PD大鼠模型紋狀體立體定向植入SPIO(Feridex)標(biāo)記BMSCs組和定向植入未標(biāo)記BMSCs組兩組間信號(hào)強(qiáng)度變化有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。紋狀體立體定向植入SPIO(Feridex)標(biāo)記BMSCs組腦組織鐵染色可見大量SPIO標(biāo)記的BMSCs；隨著時(shí)間的推移，范圍擴(kuò)大。紋狀體立體定向植入未標(biāo)記BMSCs組普魯士藍(lán)染色及免疫熒光雙標(biāo)無陽性細(xì)胞發(fā)現(xiàn)。2．尾靜脈植入SPIO(Feridex)標(biāo)記及未標(biāo)記BMSCs組PD大鼠模型MR FFE-T2WI序列掃描腦內(nèi)均未見低信號(hào)改變，兩組間信號(hào)強(qiáng)度變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。尾靜脈植入SPIO(Feridex)標(biāo)記BMSCs組病理組織學(xué)觀察PD大鼠模型腦紋狀體內(nèi)見散在幾個(gè)SPIO標(biāo)記的BMSCs；尾靜脈植入未標(biāo)記BMSCs組普魯士藍(lán)染色及免疫熒光雙標(biāo)無陽性細(xì)胞發(fā)現(xiàn)。 結(jié)論：1．1．5T超導(dǎo)磁共振成像儀和顯微鏡線圈可用于PD大鼠模型紋狀體立體定向植入SPIO(Feridex)標(biāo)記BMSCs的活體示蹤研究；2．在現(xiàn)有條件下，1．5T超導(dǎo)磁共振成像儀和顯微鏡線圈不適用于PD大鼠模型尾靜脈植入SPIO(Feridex)標(biāo)記BMSCs的活體示蹤研究。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R445.2;R742.5
【圖文】：

用TSE一TIWI、TSE一TZWI、FFE一TZWI序列分別對(duì)各組含不同數(shù)量spIO(Feridex)標(biāo)記、未標(biāo)記BMSCs細(xì)胞及瓊脂糖試管進(jìn)行成像(圖4一5)。不同數(shù)量SpIO(Feridex)標(biāo)記、未標(biāo)記BMSCs各序列相對(duì)信號(hào)強(qiáng)度見表1和圖6，信號(hào)強(qiáng)度變化率(△SI)見表2和圖7，TSE一TIWI、TSE一TZWI、FFE一TZWI三種成像序列中FFE一TZWI的ASI最為明顯，F(xiàn)FE一TZwl序列不同細(xì)胞量的SPIO(Feridex)標(biāo)記與未標(biāo)記BMSeS之間獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表3)。SPIO標(biāo)記BMSCs各序列、各細(xì)胞量間方差分析均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表4一5)，同一序列不同sPIO(Feridex)標(biāo)記BMSCs不同細(xì)胞數(shù)量組間相比細(xì)胞數(shù)量越多，信號(hào)強(qiáng)度變化越明顯，在 1x105一6x10“細(xì)胞量范圍內(nèi)，信號(hào)強(qiáng)度改變隨著細(xì)胞量的增加呈數(shù)量依賴性改變。

標(biāo)記、未標(biāo)記BMSCs細(xì)胞及瓊脂糖試管進(jìn)行成像(圖4一5)。不同數(shù)量SpIO(Feridex)標(biāo)記、未標(biāo)記BMSCs各序列相對(duì)信號(hào)強(qiáng)度見表1和圖6，信號(hào)強(qiáng)度變化率(△SI)見表2和圖7，TSE一TIWI、TSE一TZWI、FFE一TZWI三種成像序列中FFE一TZWI的ASI最為明顯，F(xiàn)FE一TZwl序列不同細(xì)胞量的SPIO(Feridex)標(biāo)記與未標(biāo)記BMSeS之間獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表3)。SPIO標(biāo)記BMSCs各序列、各細(xì)胞量間方差分析均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表4一5)，同一序列不同sPIO(Feridex)標(biāo)記BMSCs不同細(xì)胞數(shù)量組間相比細(xì)胞數(shù)量越多，信號(hào)強(qiáng)度變化越明顯，在 1x105一6x10“細(xì)胞量范圍內(nèi)，信號(hào)強(qiáng)度改變隨著細(xì)胞量的增加呈數(shù)量依賴性改變。

圖10PD大鼠模型紋狀體SPIO標(biāo)記或未標(biāo)記BMSCs立體定向植入組紋狀體相對(duì)信號(hào)強(qiáng)度示意圖注:1一5分別表示PD大鼠模型紋狀體植入SPIO標(biāo)記或未標(biāo)記BMSCS第一天第二周、第四周、第六周和第八周。

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本文編號(hào)：2792205