【摘要】： 前言 人內(nèi)因子(intrinsic factor IF)是由胃粘膜的壁細胞分泌的一種糖蛋白。其有兩個活性部位，在攝入維生素B_(12)吸收的過程中，IF通過其中一個活性部位與攝入的維生素B_(12)結(jié)合形成復(fù)合物，從而保護維生素B_(12)不被小腸內(nèi)水解酶破壞。然后再通過另一個活性部位與遠端回腸上皮細胞膜上的受體結(jié)合，從而使維生素B_(12)被吸收。眾所周知A型萎縮性胃炎患者因胃IF缺乏可引起惡性貧血，但有關(guān)血清IF水平與胃粘膜功能狀態(tài)的研究報道不多。為了探討血清IF水平與胃粘膜功能狀態(tài)的關(guān)系，本研究分離純化了人胃IF，并制作了放免試劑盒，最后采用放射免疫分析方法測定正常人及胃病患者血清中IF的含量。 材料與方法 1 實驗材料 正常人胃組織來自中國醫(yī)科大學法醫(yī)學院，雄性家兔(大耳白)：兩只，體重2kg，來自中國醫(yī)科大學實驗動物中心，血清標本來自青海省人民醫(yī)院2000年10月至2001年8月住院患者，其中胃癌患者49例(術(shù)后2例)，年齡32—86歲；胃潰瘍患者22例，年齡22—67歲；萎縮性胃炎患者25例，年齡20—65歲，均經(jīng)內(nèi)鏡或病理檢查證實。所有患者于清晨空腹安靜狀態(tài)下采血，分離血清，于-20℃凍存。正常血清標本來自中國醫(yī)科大學附屬一院獻血員，共40例，年齡20—49歲。 主要試藥：DEAE-Sephadex A50、Sephadex G-75、CNBr Activa- t。d Seph刪sc 4B（Ph。cia公司產(chǎn)品），Ac…咖de和伍s砒ylam－ ide石DSu 公司產(chǎn)品X低分子量標準蛋白質(zhì)（上海麗珠生物 有限公司產(chǎn)品X弗氏完全佐劑（本院免疫教研室提供入 Na”‘Iu 京原子能研究所X其它常規(guī)試劑為化學純。 2實驗方法 半冰凍條件下刮取胃粘膜，用濾紙吸干，稱重，剪碎，于 0．01 pH7．0磷酸緩沖液中制勻漿，經(jīng)過兩次離心，制成粗提液。 取粗提液30ml加人用0．01M pH7．0磷酸緩沖液預(yù)平衡的 DEAE－SePhadex A50層析柱（3cm x 60cm），連續(xù)鹽梯度洗脫， 280urn波長下測各管吸光度，繪制吸光度曲線，將各個蛋白峰分別 收集起來，經(jīng)縮水透析后，于－20℃保存。 取上述第4峰透析液IInl加人已用0．01M pH7．0磷酸緩沖液 預(yù)平衡的 SePhadex GJS層析柱（Icm x 60cm），用上述緩沖液洗 脫，280run波長下測各管吸光度，繪制吸光度曲線，收集蛋白峰，經(jīng) 縮水過夜后，于－20℃保存。 再取凝膠過濾層析第互峰濃縮液0．6rnl于偶聯(lián)Vi風。的滇化 氰活化的 Sepharose 4B親和層析柱（0．6cm x 20cm）上，4℃條件下 過夜，然后以高濃度鹽酸肌梯度作為最后洗脫步驟洗脫，280urn波 長下測各管吸光度，繪制吸光度曲線，收集蛋白峰。經(jīng)縮水透析 后，于一20℃保存。 各蛋白峰蛋白質(zhì)濃度測定采用酚試劑法。其分子量估計采用 不連續(xù)SDS聚丙烯酚氨凝膠電泳法。 用部分純化的IF兔疫家兔制備抗血清，以雙向兔疫擴散法勿． 定抗體效價。純化的 IF采用 lodosen法，用放射性‘’l標記。 最后采用放免方法測定各組血清IF水平，其數(shù)據(jù)值范圍均以 X。Sk表示，統(tǒng)計學差異性檢驗采用t檢驗。 ·2· 結(jié) 果 胃粘膜勻漿經(jīng)離子交換層析共分離出5個蛋白峰，其第4峰 經(jīng)凝膠過濾層析的第二峰再經(jīng)親和層析共分離2個蛋白峰，第二 峰經(jīng)皿S－PAGE顯示為一條帶，分子量約為66 00。 免疫家兔所得血清IF的抗體效價為二：32。 各組血清IF放免測定結(jié)果：對照組為1．0584。0．4636pg／ml； 胃癌組為 0．6784。0．2508 pgilnl；萎縮性胃炎組為 0．7040 L 0． 2220 pg／tnl；胃潰瘍組為 0．9279。0．4898 pgllnl。胃癌組和萎縮性 胃炎組患者血清IF水平明顯低于對照組h＜0．ofh胃潰瘍組與 對照組比較血清 IF水平無統(tǒng)計學差異h＞0．05人胃癌組與萎縮 性胃炎組比較血清 IF水平無明顯差異帥＞0．05人 胃潰瘍組與胃 癌組和萎縮性胃炎組比較差異不明顯N．01＜p＜0．05人 討 論 IF是攝人維生素B；。吸收所必需的輔因子，在體內(nèi)其合成與 分泌受多種物質(zhì)影響。由于IF的含量較低，分離比較困難使其在 臨床方面的應(yīng)用受到限制。為了探討血清IF與胃粘膜功能狀態(tài) 的關(guān)系，特別是在胃癌時的變化，本研究采用離子交換層析、凝膠 過濾層析和親和層析相結(jié)合的方法，成功分離了人的胃IF，經(jīng)不 連續(xù)SDS聚丙烯酚凝膠電泳顯示為一條帶，分子量大約為66 000。 對胃病患者血清IF水平測定結(jié)果表明胃癌組患者和萎縮性胃炎 組患者血清IF水平明顯低于對照組，這可能是由于此兩種疾病 時，患者胃粘膜損壞導(dǎo)致壁細胞大量減少，從而使IF的合成與分 泌減少引起的。眾所周知，萎縮性胃炎是胃癌的癌前病變，二者血 清IF水平無統(tǒng)計學差異，因此該結(jié)果表明較低的血清IF水平很 ·3· 可能是胃癌的高危指標，對于血清IF水平較低的體檢者應(yīng)該進一 步做胃鏡檢查。在胃潰瘍患者，血清IF水平與對照組比較無統(tǒng)計 學差異，可能是由于胃潰瘍時同時伴有廣泛的胃粘膜炎性增生使 壁細胞分泌IF的量增加，所以，盡管壁細胞數(shù)
【學位授予單位】：中國醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2002
【分類號】：R817.4

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本文編號：2786918