【摘要】：前言 隨著人口的老齡化及人們對高脂飲食攝入的增加，由動脈粥樣硬化所引起的血管閉塞性疾病有日益增多的趨勢。尤其是心腦血管和周圍動脈的閉塞，常常引起心肌梗死和腦梗塞、肢體壞死和截肢，甚至導致患者致死致殘。美國每年有60萬人死于冠心病，在我國50年代冠心病的發(fā)病率居第四位，70年代居第二位，90年代以后則躍居第一位。經(jīng)皮經(jīng)腔冠狀動脈成形術(shù)(Percutaneous Transluminal Coronary Angioplasty，PTCA)是一種不需要經(jīng)過開胸和體外循環(huán)，通過擴張狹窄的冠狀動脈，減少壓力梯度，增加心肌血流量的有效方法。自1977年第一例冠狀動脈左前降支成形術(shù)成功以來，大量臨床研究表明，成功的冠狀動脈腔內(nèi)成形術(shù)(PTCA)能夠明顯改善心肌局部血流灌注，其成功率可達到90％。但PTCA術(shù)后3～6個月有40％～60％的病例出現(xiàn)再狹窄。為防止PTCA術(shù)后再狹窄(Restenosis，RS)，許多學者做了大量研究和技術(shù)改進。如進行冠脈金屬支架成形術(shù)、冠脈內(nèi)定向旋切術(shù)、激光冠脈成形術(shù)、冠脈內(nèi)膜研磨術(shù)、冠脈超聲成形術(shù)，藥物及基因治療等，均未能有效降低再狹窄發(fā)生率。例如目前廣泛應用于臨床的冠脈內(nèi)金屬支架成形術(shù)，只能機械擴張管壁，不能阻止血管內(nèi)膜的增生，僅能降低10％的再狹窄發(fā)生率，并且價格昂貴(約2萬元)，一次置入，更換困難。 近年來，歐美等國家采用核素腔內(nèi)照射狹窄處，利用β射線和低能γ射線腔內(nèi)照射血管內(nèi)膜增生組織，射線射程僅數(shù)毫米，不會對心肺及周圍正常組織造成損傷，安全有效，較好地防止了術(shù)后再狹窄。此項技術(shù)既可抑制動脈內(nèi)膜增生，又可防止動脈管壁的彈性回縮和血管重塑。其機理初步認為：可抑制中膜的平滑肌細胞及外膜的成纖維細胞增殖，防止外膜纖維化及管腔重塑；可直接或間接地導致細胞DNA損傷，抑制平滑肌細胞和基質(zhì)無法增殖形成新生內(nèi)膜。目前國內(nèi)所使用的支架大多數(shù)依賴進口，由于價格 昂貴，很大程度上限制了此項技術(shù)在臨床的應用和推廣。因此，研制和開發(fā) 國產(chǎn)放射性支架勢在必行。近年來，雖然國產(chǎn)化支架在逐年增加，但這些研 究還仍以非血管支架為主。本研究目的是與中科院金屬所及中國原子能研 究院同位素所合作研究國產(chǎn)不銹鋼’03Pd放射性支架在動脈成形術(shù)后抑制 再狹窄的可行性。 目前認為，內(nèi)膜增生的病理基礎(chǔ)為中膜血管平滑肌細胞(Vasc己ar Smooth Musele Cell，VSMC)遷移至內(nèi)膜，并活化增殖，分泌大量細胞外基 質(zhì)。因此內(nèi)膜增生的機制及VSMC增殖的基礎(chǔ)研究已為眾人矚目。增殖是 細胞周期的變化和細胞凋亡的結(jié)果。輻射的重要作用是調(diào)節(jié)血管壁細胞分 裂周期的進程，內(nèi)皮細胞和平滑肌細胞經(jīng)過照射大部分停留在G1期(DNA 合成前期)，而未經(jīng)照射的平滑肌細胞已進人S期(DNA合成期)連續(xù)增殖， 所以射線可通過抑制vSMC，使細胞周期阻滯，進而影響細胞的分裂增殖能 力。血管成形術(shù)后48小時內(nèi)進行照射，可明顯抑制新生內(nèi)膜增生，即因為 這段期間細胞分裂增殖最活躍，同時對射線最敏感。輻射亦可導致細胞凋 亡，輕微的照射可使DNA分子損傷，嚴重的DNA損傷可導致核固縮、核裂 解及細胞死亡。 目的 本研究使用影像學、病理形態(tài)學及分子生物學等手段，力圖通過用不同 劑量的’03Pd支架的體內(nèi)動物實驗和直接照射體外培養(yǎng)的vSMC這兩種實 驗方法，來評價‘03Pd對于VSMC增殖、細胞周期及細胞凋亡的作用，從而探 討’03Pd放出的丫射線防止血管術(shù)后再狹窄的分子機制，為向臨床應用過 渡奠定基礎(chǔ)，并為其它血管狹窄疾患以及非血管性狹窄疾病的治療開辟新 的途徑。 方法 第一部分:制作豬冠狀動脈和兔骼動脈球囊損傷模型，分別置人非放射 性支架(對照組)和不同劑量組的放射性’仍Pd支架(實驗組)。用血管造影 和核素SPECT心肌血流灌注顯像觀察血管狹窄情況。分別在1、2、4及12 周處死動物后，行H一E染色，管腔面積測定，分析血管內(nèi)膜、中膜面積變化 及狹窄百分率。掃描電鏡和透射電鏡觀察管腔及支架表面內(nèi)皮化程度及輻 射后細胞超微結(jié)構(gòu)改變。免疫組化測定a一肌動蛋白(。一actin)和血小板 衍生生長因子(Platelet一Derived Growth Factor，PDGF一B)蛋白變化，評價 射線對VSMC增殖遷移的影響。 第二部分:體外原代、傳代培養(yǎng)豬VSMC，不同劑量照射24小時后，用 伊紅染色測定細胞活力;四哇鹽測定細胞增殖力;流式細胞儀測定細胞周期 阻滯情況及凋亡率;TUNEL法測定細胞凋亡及培養(yǎng)液放射免疫分析法浦定 PGIZ、TXAZ及Agll，通過PGIZ/TXAZ比值改變，間接反映射線對vSMC凋 亡的影響。 第三部分:電鍍法制備‘仍Pd支架，通過超聲洗滌和電鏡檢測評價支架 的核素脫離率、電鍍均勻性、支架表面密度和光滑度等物理性能，并通過放 射自顯影及劑量點核法測定‘03Pd支架照射深度及周圍劑量分布。 結(jié)果 第一部分:實驗豬模型術(shù)后4周，在血管造影和心肌SPECT血流灌注 顯像中，可見照射組左前降支管徑及側(cè)支循環(huán)通楊，心肌側(cè)壁增厚，未見核 素缺損區(qū)。而對照組支架近心端輕度狹窄，心尖處心肌血流灌注略降低。 豬模型照射組與對照組相比，有劑量依賴關(guān)系。照射組與對照組相比，管腔 面積大，中膜面積小，新生內(nèi)膜面積和狹窄百分率明顯降低。如新
【學位授予單位】：中國醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2002
【分類號】：R817.5
【圖文】：

PDGF一B免疫組化顯示:照射組(600林Ci):1周時新生內(nèi)膜的的陽性細胞，而中膜陽性細胞較少照射組(600林Ci):2周時內(nèi)膜vSMCvSMC中可見胞槳和胞膜內(nèi)有棕黃色的胞槳內(nèi)陽性細胞明顯減少(40X)

上圖;體外細胞培養(yǎng)對照組(0林Ci):24h后見細胞呈梭型中圖;支架(巧o卜Ci)照射24h后:見培養(yǎng)液中有部分死細胞下圖;支架(600協(xié)Ci)照射24h后:見培養(yǎng)液中幾乎全部為死細胞

免疫細胞凋亡原位雜交檢測:照射組(250林Ci)靠近支架側(cè)細胞核固縮、變型、呈棕色，為陽性細胞;核大呈藍色的為陰性細胞

【共引文獻】

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本文編號：2777263