發(fā)布時間：2020-07-22 03:07

【摘要】：背景： 原發(fā)性肝癌是目前臨床最常見的惡性腫瘤之一，具有惡化速度快、復(fù)發(fā)率高、治療效果差、生存時間短等特點(diǎn)，居目前全球腫瘤相關(guān)死亡第三位，在我國腫瘤相關(guān)死亡中居第二位，因此，其治療問題尤顯重要�；熓悄壳案伟┚C合治療中最常用的方法，其效果取決于藥物在腫瘤局部的濃度與作用時間，系統(tǒng)化療時因為聚集于腫瘤局部的藥物濃度低，而全身血液循環(huán)中藥物濃度相對較高，易引起全身嚴(yán)重的毒副作用。因此，發(fā)展一種既達(dá)到最佳抗腫瘤效果又不致引起全身嚴(yán)重毒副作用的方法是臨床腫瘤治療的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。 國內(nèi)外研究均表明超聲靶向破壞微泡是一種能夠有效、無創(chuàng)的提高藥物或基因滲入腫瘤組織的新型物理治療技術(shù)。該方法通過注射一定劑量的超聲微泡，并給予一定功率的超聲輻照使微泡發(fā)生破裂，通過產(chǎn)生的空化效應(yīng)、聲孔效應(yīng)等導(dǎo)致微血管及細(xì)胞膜通透性升高，以提高抗腫瘤藥物的生物利用度。目前，文獻(xiàn)報道中多使用高強(qiáng)度的聚焦超聲治療儀介導(dǎo)微泡破壞進(jìn)行相應(yīng)的實驗研究，可明顯提高藥物或基因的生物利用度。 使用超聲治療儀器不僅缺乏相關(guān)的圖像引導(dǎo)系統(tǒng)，而且對深部腫瘤組織缺乏足夠的穿透力。因此，對于較大范圍的治療靶區(qū)，我們不妨采用更普及、更簡便的診斷超聲作為工具，通過超聲輻照腫瘤區(qū)域破壞微泡來提高靶區(qū)微血管及腫瘤細(xì)胞膜的通透性，介導(dǎo)藥物的傳輸。相關(guān)文獻(xiàn)也證實了此設(shè)想的可行性，但關(guān)于該技術(shù)有效實驗參數(shù)不一致，針對其具體機(jī)制的研究較少，因此我們設(shè)計了本課題研究。 目的： 1.探討高機(jī)械指數(shù)診斷超聲聯(lián)合微泡對大鼠皮下移植性肝癌血管通透性的影響，使用定性和定量方法進(jìn)行評估，證明該技術(shù)方法的有效性； 2.探索不同機(jī)械指數(shù)、不同超聲輻照時間以及不同微泡劑量對診斷超聲聯(lián)合微泡條件下提高腫瘤血管通透性的影響，優(yōu)化此技術(shù)應(yīng)用的參數(shù)； 3.初步探討診斷超聲聯(lián)合微泡技術(shù)引起腫瘤血管通透性改變的細(xì)胞及分子生物學(xué)水平的機(jī)理。 方法： 1.以伊文氏藍(lán)作為判斷血管通透性改變的指示劑，將已建立皮下移植肝癌模型成功的SD大鼠隨機(jī)分為空白對照組、單純微泡組、單純診斷超聲輻照組、診斷超聲聯(lián)合微泡組共四組進(jìn)行實驗，通過定性和定量的方法檢測診斷超聲聯(lián)合微泡條件下腫瘤血管通透性改變的情況。 2.以腫瘤組織中伊文氏藍(lán)含量作為血管通透性改變的指示劑，通過定量的方法檢測不同機(jī)械指數(shù)、不同超聲輻照時間以及不同微泡劑量對診斷超聲聯(lián)合微泡條件下腫瘤血管通透性的改變。 3.以能反應(yīng)腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞活化及受損的P-selectin蛋白作為評價指標(biāo)，分別采用Western blot及免疫組織化學(xué)的方法對各處理組腫瘤組織中蛋白表達(dá)水平進(jìn)行定量和定性分析，進(jìn)而判斷診斷超聲聯(lián)合微泡條件下腫瘤血管通透性影響的可能機(jī)制。 4.使用透射電鏡觀察腫瘤血管通透性改變發(fā)生的部位，從超微結(jié)構(gòu)了解診斷超聲聯(lián)合微泡條件下腫瘤血管通透性改變的主要機(jī)制。 結(jié)果： 1.使用伊文氏藍(lán)作為指示劑通過定性和定量的方法檢測診斷超聲聯(lián)合微泡條件下腫瘤血管通透性改變的情況：診斷超聲聯(lián)合微泡組腫瘤組織中滲出的伊文氏藍(lán)含量明顯高于其余各實驗組，差異有明顯統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)； 2.在一定范圍內(nèi)隨著機(jī)械指數(shù)的升高、超聲輻照時間的延長、微泡濃度的增加，腫瘤組織中滲出的伊文氏藍(lán)含量均有明顯增加； 3.使用Western blot及免疫組織化學(xué)的方法對P-selectin蛋白在各實驗組的表達(dá)情況進(jìn)行定量和定性分析：結(jié)果顯示在超聲聯(lián)合微泡組腫瘤組織蛋白水平在血管壁周圍表達(dá)高于其他各實驗組，提示血管內(nèi)皮細(xì)胞活化或細(xì)胞通透性增加可能是血管通透性增加的因素之一； 4.透射電鏡超微結(jié)構(gòu)觀察可見診斷超聲聯(lián)合微泡組腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞腫脹明顯，線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等結(jié)構(gòu)水腫，細(xì)胞膜完整性中斷。 結(jié)論： 1.在一定條件下，診斷超聲聯(lián)合微泡可明顯提高輻照腫瘤組織血管通透性，為提高化療藥物的生物利用度提供了新方法； 2.機(jī)械指數(shù)、微泡濃度、超聲輻照時間均是影響診斷超聲聯(lián)合微泡提高腫瘤血管通透性的主要因素； 3.診斷超聲聯(lián)合微泡提高腫瘤血管通透性增加的機(jī)制主要是影響血管內(nèi)皮細(xì)胞活性和通透性而實現(xiàn)的。
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R445.1;R735.7

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2765232