【摘要】：背景： 原發(fā)性肝癌是目前臨床最常見的惡性腫瘤之一，具有惡化速度快、復發(fā)率高、治療效果差、生存時間短等特點，居目前全球腫瘤相關死亡第三位，在我國腫瘤相關死亡中居第二位，因此，其治療問題尤顯重要�；熓悄壳案伟┚C合治療中最常用的方法，其效果取決于藥物在腫瘤局部的濃度與作用時間，系統(tǒng)化療時因為聚集于腫瘤局部的藥物濃度低，而全身血液循環(huán)中藥物濃度相對較高，易引起全身嚴重的毒副作用。因此，發(fā)展一種既達到最佳抗腫瘤效果又不致引起全身嚴重毒副作用的方法是臨床腫瘤治療的熱點和難點。 國內外研究均表明超聲靶向破壞微泡是一種能夠有效、無創(chuàng)的提高藥物或基因滲入腫瘤組織的新型物理治療技術。該方法通過注射一定劑量的超聲微泡，并給予一定功率的超聲輻照使微泡發(fā)生破裂，通過產(chǎn)生的空化效應、聲孔效應等導致微血管及細胞膜通透性升高，以提高抗腫瘤藥物的生物利用度。目前，文獻報道中多使用高強度的聚焦超聲治療儀介導微泡破壞進行相應的實驗研究，可明顯提高藥物或基因的生物利用度。 使用超聲治療儀器不僅缺乏相關的圖像引導系統(tǒng)，而且對深部腫瘤組織缺乏足夠的穿透力。因此，對于較大范圍的治療靶區(qū)，我們不妨采用更普及、更簡便的診斷超聲作為工具，通過超聲輻照腫瘤區(qū)域破壞微泡來提高靶區(qū)微血管及腫瘤細胞膜的通透性，介導藥物的傳輸。相關文獻也證實了此設想的可行性，但關于該技術有效實驗參數(shù)不一致，針對其具體機制的研究較少，因此我們設計了本課題研究。 目的： 1.探討高機械指數(shù)診斷超聲聯(lián)合微泡對大鼠皮下移植性肝癌血管通透性的影響，使用定性和定量方法進行評估，證明該技術方法的有效性； 2.探索不同機械指數(shù)、不同超聲輻照時間以及不同微泡劑量對診斷超聲聯(lián)合微泡條件下提高腫瘤血管通透性的影響，優(yōu)化此技術應用的參數(shù)； 3.初步探討診斷超聲聯(lián)合微泡技術引起腫瘤血管通透性改變的細胞及分子生物學水平的機理。 方法： 1.以伊文氏藍作為判斷血管通透性改變的指示劑，將已建立皮下移植肝癌模型成功的SD大鼠隨機分為空白對照組、單純微泡組、單純診斷超聲輻照組、診斷超聲聯(lián)合微泡組共四組進行實驗，通過定性和定量的方法檢測診斷超聲聯(lián)合微泡條件下腫瘤血管通透性改變的情況。 2.以腫瘤組織中伊文氏藍含量作為血管通透性改變的指示劑，通過定量的方法檢測不同機械指數(shù)、不同超聲輻照時間以及不同微泡劑量對診斷超聲聯(lián)合微泡條件下腫瘤血管通透性的改變。 3.以能反應腫瘤血管內皮細胞活化及受損的P-selectin蛋白作為評價指標，分別采用Western blot及免疫組織化學的方法對各處理組腫瘤組織中蛋白表達水平進行定量和定性分析，進而判斷診斷超聲聯(lián)合微泡條件下腫瘤血管通透性影響的可能機制。 4.使用透射電鏡觀察腫瘤血管通透性改變發(fā)生的部位，從超微結構了解診斷超聲聯(lián)合微泡條件下腫瘤血管通透性改變的主要機制。 結果： 1.使用伊文氏藍作為指示劑通過定性和定量的方法檢測診斷超聲聯(lián)合微泡條件下腫瘤血管通透性改變的情況：診斷超聲聯(lián)合微泡組腫瘤組織中滲出的伊文氏藍含量明顯高于其余各實驗組，差異有明顯統(tǒng)計學意義(P0.05)； 2.在一定范圍內隨著機械指數(shù)的升高、超聲輻照時間的延長、微泡濃度的增加，腫瘤組織中滲出的伊文氏藍含量均有明顯增加； 3.使用Western blot及免疫組織化學的方法對P-selectin蛋白在各實驗組的表達情況進行定量和定性分析：結果顯示在超聲聯(lián)合微泡組腫瘤組織蛋白水平在血管壁周圍表達高于其他各實驗組，提示血管內皮細胞活化或細胞通透性增加可能是血管通透性增加的因素之一； 4.透射電鏡超微結構觀察可見診斷超聲聯(lián)合微泡組腫瘤血管內皮細胞腫脹明顯，線粒體、內質網(wǎng)等結構水腫，細胞膜完整性中斷。 結論： 1.在一定條件下，診斷超聲聯(lián)合微泡可明顯提高輻照腫瘤組織血管通透性，為提高化療藥物的生物利用度提供了新方法； 2.機械指數(shù)、微泡濃度、超聲輻照時間均是影響診斷超聲聯(lián)合微泡提高腫瘤血管通透性的主要因素； 3.診斷超聲聯(lián)合微泡提高腫瘤血管通透性增加的機制主要是影響血管內皮細胞活性和通透性而實現(xiàn)的。
【學位授予單位】：第三軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R445.1;R735.7

【參考文獻】

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本文編號：2765232