【摘要】：目的 繼組織器官移植后，干細胞移植具有可以治療許多長期以來令人類束手無策的頑癥的前景，而引起越來越多的關(guān)注。隨著研究的深入和進入臨床應(yīng)用的可能性出現(xiàn)，在體追蹤移植干細胞的難題成為需要迫切解決的問題。對于實驗動物，隨時取材活檢甚至殺死動物獲得樣本，以觀察細胞移植是否成功、增殖狀態(tài)、遷移和分化情況。在人體，獲得上述信息必須通過非創(chuàng)傷性途徑�；诜派湫允聚櫾淼暮怂仫@像技術(shù)，反映的是細胞內(nèi)源性分子表達，特異性強，應(yīng)用干細胞或其不同分化階段的不同標(biāo)志分子作為顯像靶分子，不但可以追蹤干細胞的存活和增殖還能監(jiān)測其分化，因而是干細胞活體示蹤最具希望的工具之一。移植細胞數(shù)量與受移植組織器官細胞相比微乎其微，核素顯像能否達到探測到如此微小數(shù)量細胞表達的特征分子，是必須首要解決的問題。本文采用干細胞或前體細胞的兩種相對特異的分子標(biāo)志物作為顯像靶分子，探索核素顯像活體追蹤移植干細胞的可行性。 標(biāo)志物一：轉(zhuǎn)鐵蛋白受體 方法 從人胎兒血分離培養(yǎng)人間充質(zhì)干細胞(hMSCs)，移植于兔脊髓；流式細胞學(xué)、細胞和組織免疫熒光方法檢測間充質(zhì)干細胞移植前后轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的表達；固相氧化劑(Iodogen)法放射性碘標(biāo)記鐵飽和人轉(zhuǎn)鐵蛋白作為示蹤劑；放射性受體分析定量hMSCs轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的數(shù)量及與碘化轉(zhuǎn)鐵蛋白的親和力；干細胞移植手術(shù)后第2、10天，蛛網(wǎng)膜下腔注射放射示蹤劑后不同時間，SPECT針孔準(zhǔn)直器平面采集系列圖像，采用放射性碘標(biāo)記人血清白蛋白作為對照顯像劑或無細胞等體積PBS作為對照移植物；放射自顯影驗證顯像結(jié)果。結(jié)果體外培養(yǎng)和移植于脊髓第2天的間充質(zhì)干細胞表達轉(zhuǎn)鐵蛋白受體，數(shù)量約為1.1×10~5／細胞，該受體對放射性碘標(biāo)記鐵飽和轉(zhuǎn)鐵蛋白具有高親和力(Kd=0.982 nM)，移植后第10天細胞在組織內(nèi)幾乎不表達轉(zhuǎn)鐵蛋白受體；移植后第2天，活體閃爍掃描成像顯示：示蹤劑注入蛛網(wǎng)膜下腔16h～24h， 解放軍總醫(yī)院博士學(xué)位論文 中文摘要 脊髓的間充質(zhì)干細胞移植部位出現(xiàn)可分辨放射性聚集，，以放射性碘標(biāo)記的人 血清白蛋白作為示蹤劑或PBS作為移植物的兩個對照組僅見本底影像;感興 趣區(qū)半定量分析顯示實驗組與兩個對照組之間顯像結(jié)果差異均有統(tǒng)計學(xué)意義 (P0.05);放射自顯影進一步印證了活體顯像結(jié)果的特異性;移植后第10 天，三組動物脊髓內(nèi)移植部位均未見陽性顯像。 標(biāo)志物二:多巴胺DZ受體 方法來源于自然流產(chǎn)人胚胎的側(cè)腦室下區(qū)的經(jīng)端粒酶基因轉(zhuǎn)染的神經(jīng)前體 細胞系hNPC一TERT，移植于兔脊髓;經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄擴增(RT一PCR)、細胞和組織 免疫熒光方法檢測多巴胺D:受體在移植前后的表達;柱層析法合成 ，‘c一Racl叩ride作為示蹤劑;HeLa細胞作為移植對照，細胞移植術(shù)第2天， 移植動物活體PET顯像;移植細胞并注射”c~Raclopride后，取兔離體脊髓 PET顯像驗證活體顯像結(jié)果。 結(jié)果體外培養(yǎng)和移植于脊髓第2天的神經(jīng)前體細胞系hNPC一TERT表達多巴 胺DZ受體，數(shù)量約為8 x 10勺細胞，該受體對放射性標(biāo)記D:受體拮抗劑一 Raelopride具有高親和力(Kd=1 .515硯);靜脈注射”e.Raclopdde后PET 顯像顯示，兔活體和離體脊髓內(nèi)神經(jīng)前體細胞移植部位有肉眼可分辨的放射 性濃聚灶，而HeLa細胞作為移植物的對照組僅見本底影像;感興趣區(qū)半定 量分析顯示兩組顯像結(jié)果差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。 結(jié)論核素顯像活體示蹤干細胞的具有可行性;應(yīng)用轉(zhuǎn)鐵蛋白受體或多巴胺 玩受體顯像可以分別特異性地追蹤到移植在動物脊髓內(nèi)3x1o“的干細胞 (hMSCs)或神經(jīng)前體細胞(hNPC一TERT)，從而了解細胞移植術(shù)的成功與 否、移植細胞的存活、增殖狀態(tài)以及監(jiān)測細胞惡性轉(zhuǎn)化的可能等等。
【圖文】：

兔脊髓內(nèi)干細胞懸液注射示意

兔脊髓細胞移植后，loRaclop“dePET圖像Rol半定量分析，圓形Rol面積ZIPixe，，中心與體外標(biāo)記點距離(標(biāo)尺)=2·35cmo
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍軍醫(yī)進修學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號】：R817

【共引文獻】

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本文編號：2710427