【摘要】：目的1.探討靶向超聲造影劑的構(gòu)建方法及其構(gòu)建過(guò)程對(duì)超聲造影劑微泡物理性質(zhì)的影響,為構(gòu)建靶向化超聲造影劑提供實(shí)驗(yàn)方法學(xué)；2.建立葡萄糖損傷的血管內(nèi)細(xì)胞模型,為驗(yàn)證靶向微泡造影劑的黏附能力提供實(shí)驗(yàn)平臺(tái)并為糖尿病血管病變?cè)缙谠\斷的進(jìn)一步研究提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)；3.應(yīng)用平板流動(dòng)腔技術(shù)檢測(cè)靶向超聲微泡對(duì)特異性靶細(xì)胞的黏附能力,為下一步應(yīng)用靶向化微泡進(jìn)行糖尿病早期微血管病變的特異性診斷提供可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法1.應(yīng)用生物素-鏈霉親和素連接系統(tǒng),使注射用六氟化硫微泡(SonoVue)與特異性抗血管細(xì)胞黏附分子-1(VCAM-1)抗體連接,用間接免疫熒光法檢測(cè)抗體與微泡的連接,用馬爾文激光粒徑分析儀分別測(cè)定生物素化處理前后微泡的粒徑,采用超聲診斷儀評(píng)價(jià)微泡靶向化構(gòu)建前后的顯像效果。2.傳代培養(yǎng)人主動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞(HAEC)至3、4代,選取細(xì)胞生長(zhǎng)良好的細(xì)胞備用,選取葡萄糖濃度為5.5mmol/l、7.7mmol/l、11.6mmol/l、17.7mmol/l、21.8mmol/l、30mmol/l的細(xì)胞培養(yǎng)液分別干預(yù)細(xì)胞3h、6h、12h、24h,干預(yù)結(jié)束后應(yīng)用FITC標(biāo)記的鼠抗人VCAM-1抗體及鼠抗人TM抗體直接標(biāo)記細(xì)胞膜表面抗原,流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞攜帶FITC抗體的細(xì)胞陽(yáng)性率,進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析處理,篩選最佳葡糖糖干預(yù)濃度和時(shí)間。3.將3、4代HAEC種植于20mm的圓形蓋玻片上培養(yǎng),待細(xì)胞生長(zhǎng)融合達(dá)到90%以上時(shí)應(yīng)用葡萄糖濃度為16.7mmol/l的培養(yǎng)液干預(yù)細(xì)胞6h,干預(yù)結(jié)束后將蓋玻片置于平行板流動(dòng)腔裝置內(nèi),連接通路,使平行板板流動(dòng)腔內(nèi)充滿微泡混懸液,細(xì)胞與混懸液充分結(jié)合,調(diào)節(jié)液體流速,觀察流速調(diào)節(jié)前后視野內(nèi)的微泡數(shù)量,計(jì)算微泡的黏附率,進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 結(jié)果1SonoVue與特異性抗體通過(guò)生物素-鏈霉親和素系統(tǒng)成功連接,間接免疫熒光檢測(cè)呈陽(yáng)性。生物素修飾后的微泡粒徑分布變窄,與普通微泡的超聲顯像效果略有差異。2.人主動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞膜表面VCAM-1的表達(dá)隨細(xì)胞培養(yǎng)液的葡萄糖濃度增高而增高,至16.7mmol/l時(shí)達(dá)峰值,之后隨葡萄糖濃度升高而降低；同時(shí)VCAM-1的表達(dá)隨葡萄糖作用時(shí)間延長(zhǎng)而增高,至6h時(shí)達(dá)峰值,之后隨葡萄糖作用時(shí)間延長(zhǎng)而降低。人主動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞TM的表達(dá)趨勢(shì)與VCAM-1相似,在葡萄糖濃度為16.7mmol/l、作用時(shí)間為3h時(shí)達(dá)峰值。3.經(jīng)葡萄糖損傷的細(xì)胞周?chē)じ降陌邢蛭⑴輸?shù)量多于普通微泡；正常細(xì)胞周?chē)じ降膬煞N微泡均較少。普通微泡、靶向微泡與細(xì)胞的黏附率隨剪切力的增加而逐漸下降,靶向微泡在相同剪切力條件下黏附率高于普通微泡,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論1.通過(guò)生物素-鏈霉親和素系統(tǒng)可以成功構(gòu)建靶向化超聲微泡,靶向化處理因素對(duì)微泡的粒徑有一定的影響,對(duì)微泡的超聲顯像效果略有影響。2.通過(guò)葡萄糖刺激人主動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞可成功構(gòu)建血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷模型,為糖尿病血管病變研究提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。3.平行板流動(dòng)腔技術(shù)可以用于評(píng)價(jià)靶向微泡的特異性黏附能力,是一種理想的檢測(cè)微泡靶向化構(gòu)建效果的工具；靶向微泡與靶細(xì)胞可以特異性結(jié)合且具有較強(qiáng)的黏附能力,在臨床的特異性診斷方面具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。
【學(xué)位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類(lèi)號(hào)】：R445.1

【參考文獻(xiàn)】

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1 董p，

本文編號(hào)：2676323