【摘要】： 目的通過(guò)應(yīng)用Bruker公司的Avance 9.4T液態(tài)離體型高場(chǎng)強(qiáng)、高分辨率核磁共振頻譜儀定量分析亞硒酸鈉染毒后,大鼠肝臟急性損傷而發(fā)生細(xì)胞凋亡時(shí),膽堿復(fù)合物的變化。 方法:20只雄性Wistar大鼠隨機(jī)分成對(duì)照及實(shí)驗(yàn)兩組,每組10只。實(shí)驗(yàn)組按20mmol/kg予以亞硒酸鈉溶液腹腔注射染毒,對(duì)照組僅給予1ml/kg劑量的蒸餾水進(jìn)行腹腔注射。所有大鼠均犧牲并取得肝臟。1H-MRS數(shù)據(jù)采集使用離體型9.4T高分辨率核磁共振頻譜儀(Bruker Avance 400 MHz )。所得頻譜在頻率域經(jīng)XWINNMR (Bruker GmBH)軟件初步處理后,再應(yīng)用MestRe-c 4.3軟件進(jìn)一步分析。HE及TUNEL染色被使用來(lái)觀察和確定肝臟細(xì)胞的變化。 結(jié)果:質(zhì)量良好的高氯酸提純大鼠肝組織物氫質(zhì)子頻譜被獲得,常規(guī)的肝臟各種水溶性代謝物被探測(cè)到并被定位。通過(guò)軟件積分及公式計(jì)算,總膽堿混合物的濃度在對(duì)照組是5.08+0.97mmol/L,實(shí)驗(yàn)組濃度3.81+1.16;游離膽堿濃度在對(duì)照組濃度為1.07+0.23 mmol/L,實(shí)驗(yàn)組為0.65+0.20。兩組物質(zhì)在兩組間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p值分別為P0.05和p0.01)。但是比較兩組間的合成膽堿(主要含有磷酸膽堿及甘油磷酸膽堿)濃度卻不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。HE組織學(xué)檢測(cè),在100倍光鏡下發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組的肝竇較對(duì)照組的增寬,400倍鏡下可見(jiàn)實(shí)驗(yàn)組肝臟細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則,邊界不清,胞漿內(nèi)可見(jiàn)體積增大,數(shù)目增多的類圓型的空泡形成,存留細(xì)胞質(zhì)較濃,濃染的、存留的隨意散布的染色質(zhì)被觀及,部分細(xì)胞核核仁消失,視野內(nèi)未見(jiàn)明顯的炎癥反應(yīng)。實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組發(fā)生凋亡的肝臟細(xì)胞均被TUNEL染色染成棕色而證實(shí)。 結(jié)論:高劑量、高濃度的亞硒酸鈉溶液能導(dǎo)致大鼠肝臟損傷,在活體內(nèi)引起肝細(xì)胞凋亡。離體型高分辨率核磁共振頻譜能探測(cè)到各種不同的代謝物。在細(xì)胞凋亡早期,膽堿混合物的不同成分變化傾向不完全一致。
【圖文】：

汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院碩士畢業(yè)論文圖2－1 9.4T離體型高分辨率核磁共振掃描儀（Bruker Avance 400 MHz）Fig 2－1 in vitro 9.4T high resolution magnetic resonance spectrometer（BrukerAvance 400 MHz）凍干濃縮一體機(jī)：FREEZE DRY SYSTEM /FREEZONE 4.5凍干濃縮一體機(jī)，是美國(guó)LABCONCO推出的新型凍干濃縮一體機(jī)。主要特點(diǎn)為能在低溫條件下將樣品中的水分除去，，以達(dá)到干燥及長(zhǎng)期保存的效果；微量電子天平：瑞士梅特勒－托利多（Mettle Toledo）公司制造，型號(hào)為UMX2；德國(guó)Eppendorf加樣槍；德國(guó)Eppendorf高速臺(tái)式低溫離心機(jī)以離心管；超低溫冰箱：New Brunswick Scientific（NBS）公司生產(chǎn)的U410型號(hào)；高速勻漿機(jī)；50 ml及100ml燒杯；xO缽及

作用為內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)。D2O的作用是鎖場(chǎng)。每一個(gè)樣本數(shù)據(jù)采集均在離體型 9.4T高分辨率核振頻譜儀 (Bruker Avance 400 MHz)進(jìn)行。提純物頻譜通過(guò)含有抑水脈沖的 Bruker z列獲得。帶寬為5000 Hz ，采集數(shù)據(jù)點(diǎn)為4096, 掃描次數(shù)為128次，總掃描時(shí)間為。 頻譜在頻率域上經(jīng)機(jī)器自帶的 XWINNMR (Bruker GmBH)軟件初步處理, 處理過(guò)程包括傅立葉轉(zhuǎn)換、相位更正、基線更正及位移更正。代謝物的化學(xué)位移通過(guò)參照TMS置確定。 核磁共振頻譜數(shù)據(jù)通過(guò)MestRe-c 4.3進(jìn)一步分析。2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析通過(guò)應(yīng)用MestRe-c 4.3軟件對(duì)化學(xué)位移為各種膽堿復(fù)合物及TMSP的代謝峰分別進(jìn)行面積計(jì)算及積分處理，其過(guò)程簡(jiǎn)而言之為：首先應(yīng)用軟件對(duì)所要積分的峰進(jìn)行篩選，應(yīng)用軟件自帶的譜線擬和功能對(duì)譜線進(jìn)行模擬，得到新的譜線，新模擬譜圖如下圖1示。
【學(xué)位授予單位】：汕頭大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R445.2

【參考文獻(xiàn)】

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