發(fā)布時間：2017-03-20 18:02

  本文關(guān)鍵詞：靶向CXCL10-CXCR3的放射性核素標(biāo)記分子實時監(jiān)測同種移植排斥的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景及目的器官移植是治療多種終末期疾病的唯一有效手段,但急性移植排斥反應(yīng)(acute rejection,AR)依然多發(fā)。AR是導(dǎo)致移植器官損害以致失活的重要原因,嚴(yán)重影響患者預(yù)后。急性移植排斥反應(yīng)的早期特異性無創(chuàng)性診斷技術(shù)對保護(hù)移植器官,延長移植器官存活期有重要意義。大量研究表明,外周血及尿中趨化因子配體10 (CXCL10, C-X-C motif chemokine 10)在器官移植前及器官移植后的變化對移植器官預(yù)后有一定預(yù)測意義。CXCL10與其受體趨化因子受體3(CXCR3, C-X-C motif receptor 3)共同介導(dǎo)包括Thl細(xì)胞在內(nèi)的多種CXCR3陽性免疫細(xì)胞到急性排斥部位的募集,并且在AR發(fā)生免疫細(xì)胞募集的早期階段即開始發(fā)揮重要作用,其在移植器官局部的表達(dá)量與AR發(fā)生密切相關(guān)。在促炎微環(huán)境下CXCL10能夠被中性粒細(xì)胞,嗜酸性粒細(xì)胞,單核細(xì)胞,內(nèi)皮細(xì)胞,上皮細(xì)胞,基質(zhì)細(xì)胞和角質(zhì)細(xì)胞等多種細(xì)胞分泌,并且表達(dá)上調(diào)早于CXCR3的另一配體CXCL9,因此檢測局部CXCL10的表達(dá)量能夠比檢測CXCL9更早地診斷CXCR3陽性免疫細(xì)胞的浸潤。分子影像學(xué)技術(shù)快速發(fā)展使在活體狀態(tài)下無創(chuàng)性實時監(jiān)測某一靶分子的分布及相對量成為可能。本論文在確定CXCL10是一與AR起始密切相關(guān)的靶點(diǎn)的基礎(chǔ)上,成功制備了CXCL10靶向特異的131Ⅰ-anti-CXCL10 mAb分子探針,并對CXCL10的分布進(jìn)行放射性顯像,探討其在AR早期診斷中的應(yīng)用價值。由于131Ⅰ-anti-CXCL10 mAb分子量大,其體內(nèi)分布及排除較緩慢,藥物代謝動力學(xué)不夠理想,因此本課題第二部分探討了以小分子125Ⅰ-CXCL10(8.5 Kd)為探針,以其受體CXCR3為靶點(diǎn),實時監(jiān)測AR的可行性。第一部分：以CXCL10為靶點(diǎn)的早期急性移植排斥顯像研究研究方法1.建立同種皮膚移植小鼠模型：以C57BL/6小鼠為供體,BALB/c小鼠為受體建立同種皮膚移植模型,同時以BALB/c小鼠為供體,BALB/c小鼠為受體建立同系皮膚移植模型。逐日觀察移植物生存狀況。1mg/kg.d他克莫司腹腔給藥的藥物處理同種移植模型建立同種移植免疫抑制模型。移植后第10天用HE染色驗證各組皮片處排斥狀況。2.CXCL10 mRNA及蛋白的檢測：于移植后第10天分別取移植部位皮片及對側(cè)正常皮片進(jìn)行RT-PCR檢測CXCL10 mRNA的相對表達(dá)。同時利用免疫組織化學(xué)分析法及ELISA法測定移植后第10天移植皮片、血液和脾中CXCL10蛋白表達(dá)狀況。3.放射性碘化標(biāo)記：Iodogen法131I標(biāo)記anti-CXCL10mAb,紙層析法檢測放射性化學(xué)純度及穩(wěn)定性。4.體內(nèi)生物學(xué)分布研究：小鼠皮膚移植后第8天尾靜脈注射131I-anti-CXCL10 mAb后不同時間處死小鼠,取移植皮片及主要器官,稱重,測量放射性,研究觀察131I-anti-CXCL10的體內(nèi)生物分布狀況及靶向性。5.放射性磷屏顯像研究：小鼠皮膚移植后第8天尾靜脈注射131I-anti-CXCL10mAb后不同時間麻醉小鼠后,進(jìn)行放射性磷屏131I-anti-CXCL10的體內(nèi)生物分布顯像。大劑量未標(biāo)記的anti-CXCL10 mAb尾靜脈預(yù)先注射進(jìn)行阻斷實驗,驗證131I-anti-CXCL10靶向特異性。研究結(jié)果1.成功制備同種及同系移植模型；移植后第10天時同種移植組皮片處可見大量淋巴細(xì)胞浸潤,排斥反應(yīng)明顯；他克莫司藥物處理組淋巴細(xì)胞浸潤較未用藥組顯著減少,排斥反應(yīng)較輕；同系移植組未見明顯淋巴細(xì)胞浸潤,無明顯排斥反應(yīng)。2.RT-PCR, ELISA以及免疫組化結(jié)果均顯示：與同系對照組及他克莫司處理的同種移植組相比,未處理同種移植組移植皮片CXCL10表達(dá)最高,他克莫司處理能顯著抑制同種移植皮片及脾的CXCL10表達(dá),降低血中CXCL10水平。3.成功制備了131I-anti-CXCL10mAb,其放射化學(xué)純度較高(98%),穩(wěn)定性較好,制備后72h放射化學(xué)純度仍高于95%。4.體內(nèi)生物分布數(shù)據(jù)同時顯示藥物經(jīng)肝臟代謝、腎臟排泄。同種移植皮片處放射性濃聚最高,與顯像結(jié)果相一致。同種移植組在給藥后72 h時的靶/非靶比值為4.15±0.25,明顯較他克莫司處理組靶/非靶比值(2.29±0.10)高。5.磷屏放射自顯影顯示,同種移植皮片在注射顯像劑后的6h至72 h的各檢測時間點(diǎn)均清晰顯像,而他克莫司處理組放射性濃聚不明顯,同系對照組未發(fā)現(xiàn)放射性濃聚。尾靜脈預(yù)先注射大劑量未標(biāo)記CXCL10 mAb可顯著減低同種移植皮片對131I-anti-CXCL10mAb的攝取。研究結(jié)論：1.CXCL10可以作為早期急性移植排斥的分子顯像診斷靶點(diǎn),需進(jìn)一步研究。2.131I-anti-CXCL10 mAb能夠成功地進(jìn)行以CXCL10為靶點(diǎn)的急性排斥反應(yīng)顯像,并且能夠檢測免疫抑制藥物的作用。第二部分：小分子顯像劑125I-CXCL10監(jiān)測早期急性移植排斥的研究研究方法1.建立皮膚移植小鼠模型并檢測CXCR3表達(dá)：制備以BALB/c小鼠為供體,BALB/c小鼠為受體的同系皮膚移植模型,以C57BL/6小鼠為供體,BALB/c小鼠為受體的同種皮膚移植模型。取移植后第9天小鼠進(jìn)行RT-PCR及免疫組化法驗證移植皮片處CXCR3表達(dá)。2.放射性碘化標(biāo)記：四氯二苯基苷脲(Iodogen)法125I標(biāo)記CXCL10,紙層析法檢測放射性化學(xué)純度及穩(wěn)定性。3.結(jié)合特異性驗證：取同種移植第8天的小鼠脾細(xì)胞進(jìn)行125I-CXCL10與CXCR3陽性脾細(xì)胞的受體放射性配基結(jié)合實驗。4.藥物代謝動力學(xué)實驗：取同種移植第8天小鼠尾靜脈注射125I-CXCL10后進(jìn)行藥物代謝動力學(xué)實驗。5.體內(nèi)生物分布：小鼠皮膚移植后第8天尾靜脈注射125I-CXCL10后觀察CXCR3陽性細(xì)胞的體內(nèi)生物分布。6.皮膚移植小鼠磷屏自顯影顯像。研究結(jié)果1.CXCR3表達(dá)狀況：RT-PCR及免疫組化染色結(jié)果均顯示：與同系對照組相比,同種移植組移植皮片CXCR3表達(dá)量明顯較高；同系組CXCR3表達(dá)量與對側(cè)正常皮片處無顯著差異。2.成功制備了125I-CXCL10,放化純?yōu)?8%,穩(wěn)定性好,72h時仍高于95%。3.受體放射性配基結(jié)合實驗結(jié)果表明125I-CXCL10可與細(xì)胞特異性結(jié)合,平衡解離常數(shù)KD值為3.48±0.31 nM,其免疫活性約為90%。4.藥物代謝動力學(xué)分析表明,125I-CXCL10具有較好的藥物代謝動力學(xué)特性,符合二室分布模型,其分布相半衰期為0.34 h,消除相半衰期為9.83 h。5.24 h時的體內(nèi)生物分布研究結(jié)果顯示實驗組同種移植皮片放射性濃集明顯,靶/非靶比值為3.01±0.25；同系對照組移植皮片無明顯放射性濃集,靶/非靶比值為1.14±0.10,與正常對側(cè)皮膚無顯著差異。6.全身磷屏顯像結(jié)果顯示,注射125I-CXCL10顯像劑3h時,同種移植皮片即可清晰顯像,隨顯像劑的排出本底降低12h時對比更顯著,24 h時皮片處放射性濃集仍較高。而同系對照組移植皮片處在24 h內(nèi)均未見明顯放射性濃集。研究結(jié)論CXCR3是急性移植排斥反應(yīng)早期炎癥細(xì)胞浸潤的良好核素顯像靶點(diǎn),125I-CXCL10具有良好的藥物代謝動力學(xué)特性,可以較好顯像急性移植排斥反應(yīng)。
【關(guān)鍵詞】：趨化因子配體10 趨化因子受體3 急性移植排斥反應(yīng) 分子影像學(xué) 放射性核素
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R617;R817
【目錄】：

• 中文摘要8-12
• ABSTRACT12-16
• 符號說明16-17
• 前言17-20
• 第一部分：以CXCL10為靶點(diǎn)的早期急性移植排斥顯像研究20-34
• 材料和方法20-26
• 一、實驗材料20-21
• 二、主要實驗儀器21-23
• 三、實驗方法23-26
• 實驗結(jié)果26-30
• 一、 CXCLI0在同種皮膚移植模型中的表達(dá)26-27
• 二、 ~(131)I-anti-CXCL10mAb的制備及放化純和穩(wěn)定性測定27-28
• 三、 ~(131)I-anti-CXCL10mAb在同種皮膚移植小鼠體內(nèi)分布實驗28
• 四、 ~(131)I-anti-CXCL10mAb在同種皮膚移植小鼠的磷屏放射自顯影28-30
• 討論30-34
• 第二部分 ：小分子顯像劑~(125)I-CXCL10監(jiān)測早期急性移植排斥的研究34-43
• 材料和方法34-38
• 一、實驗材料34-35
• 二、實驗儀器35
• 三、實驗方法35-38
• 實驗結(jié)果38-41
• 一、CXCR3在同種皮膚移植模型中的表達(dá)38
• 二、 ~(125)I-CXCL10的制備及放化純和穩(wěn)定性38-39
• 三、放射性配基結(jié)合實驗39
• 四、 ~(125)I-CXCL10在同種皮膚移植小鼠體內(nèi)分布39
• 五、藥物代謝動力學(xué)實驗39-40
• 六、 ~(125)I-CXCL10在同種皮膚移植小鼠的磷屏放射自顯影40-41
• 討論41-43
• 全文小結(jié)43-44
• 附圖表44-52
• 參考文獻(xiàn)52-58
• 致謝58-59
• 攻讀研究生期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文59-60
• 附件60-78
• 學(xué)位論文評閱及答辯情況表78

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1 王利;;同種移植炎癥因子的結(jié)構(gòu)和功能研究[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2009年17期

2 唐榮德;人腎同種移植排異患者的血清淀粉樣蛋白A水平[J];國外醫(yī)學(xué).臨床生物化學(xué)與檢驗學(xué)分冊;1985年02期

3 趙陽兵;趙雄飛;;客觀判定人培養(yǎng)表皮細(xì)胞同種移植后存活情況的方法[J];國外醫(yī)學(xué).創(chuàng)傷與外科基本問題分冊;1991年02期

4 浦林;腎同種移植接受者尿白蛋白的連續(xù)測定[J];國外醫(yī)學(xué).臨床生物化學(xué)與檢驗學(xué)分冊;1993年01期

5 謝晶輝;;接受免疫抑制劑的腎同種移植患者的皮膚并發(fā)癥[J];皮防戰(zhàn)線;1981年Z2期

6 姚德鴻;;大劑量口服或靜脈注射激素,治療腎同種移植排異反應(yīng)的比較[J];國外醫(yī)學(xué)(內(nèi)科學(xué)分冊);1979年10期

7 蔣紅,史敏言,姚立人;新生同種移植耐受發(fā)生機(jī)理的初步探討——抑制細(xì)胞參與介導(dǎo)新生同種移植耐受[J];中國科學(xué)(B輯 化學(xué) 生物學(xué) 農(nóng)學(xué) 醫(yī)學(xué) 地學(xué));1984年12期

8 侯宗昌;同種移植免疫遺傳學(xué)的進(jìn)展(綜述)[J];國外醫(yī)學(xué)參考資料.外科學(xué)分冊;1977年05期

9 蔣紅;史敏言;姚立人;;小鼠新生同種移植耐受動物模型的建立[J];安徽醫(yī)學(xué)院學(xué)報;1983年04期

10 喬玉磊;劉愉;王群;;不用免疫抑制劑的短期冷凍保存氣管同種移植的實驗研究[J];中國臨床醫(yī)學(xué);2010年05期

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1 趙陽兵;趙雄飛;黃淑貞;;人表皮細(xì)胞同種移植后臨床觀察及其存活判定方法初探[A];全國第三屆燒傷外科學(xué)術(shù)交流會議論文摘要[C];1991年

2 王利;唐懿挺;;牦牛同種移植炎癥因子AIF-1的克隆和表達(dá)分析[A];第四屆中國畜牧科技論壇論文集[C];2009年

3 侯桂華;Wang San Ming;梁婷;宋靜;張超;鄭永先;;應(yīng)用SAGE技術(shù)研究小鼠同種移植急性排斥相關(guān)基因[A];中國免疫學(xué)會第五屆全國代表大會暨學(xué)術(shù)會議論文摘要[C];2006年

4 侯桂華;;MIF在同種移植排斥中的作用及對T細(xì)胞影響機(jī)理的研究[A];第6次全國微生物學(xué)與免疫學(xué)大會論文摘要匯編[C];2004年

5 劉玉杉;王全興;孫文佶;王春梅;王建莉;曹雪濤;;心臟原位轉(zhuǎn)染可溶性TNF受體(sTNFR)基因的抗同種移植排斥效果及免疫機(jī)理分析[A];中國免疫學(xué)會第四屆學(xué)術(shù)大會會議議程及論文摘要集[C];2002年

6 梁婷;侯桂華;李璐娜;劉德宜;張超;;抗CD40L單抗(MR-1)對小鼠同種移植過程中T細(xì)胞的影響[A];山東免疫學(xué)會、山東微生物學(xué)會醫(yī)學(xué)微生物學(xué)專業(yè)委員會、山東省醫(yī)學(xué)會微生物學(xué)和免疫學(xué)專業(yè)委員會、山東省醫(yī)藥生物技術(shù)學(xué)會2001年學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2001年

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本文編號：258185