發(fā)布時間：2016-11-24 12:11

  本文關(guān)鍵詞：Rspo1基因轉(zhuǎn)染間充質(zhì)干細胞修復小鼠腸上皮輻射損傷，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《蘇州大學》 2014年

Rspo1基因轉(zhuǎn)染間充質(zhì)干細胞修復小鼠腸上皮輻射損傷

陸婷  

【摘要】：隨著核工業(yè)的發(fā)展，核科學技術(shù)的廣泛應用以及核恐怖襲擊的威脅，如何救治急性輻射損傷成為了當今迫切的需求。腸道對電離輻射十分敏感，腸上皮結(jié)構(gòu)和功能受損是急性輻射性病難以救治的關(guān)鍵因素之一。腸隱窩干細胞及其干細胞龕遭受嚴重破壞，是腸隱窩-絨毛更新障礙的根本原因，是腸上皮結(jié)構(gòu)和功能放射性損傷的關(guān)鍵病理機制。因此，亟待根據(jù)急性放射性病病程中腸上皮結(jié)構(gòu)和功能損傷的病理機理特點，提出新型有效的針對性救治策略。 間充質(zhì)干細胞（Mesenchymal stem cells, MSCs）是一群來源于中胚層，異質(zhì)性很強的具有自我更新能力的多能干細胞，能分化為脂肪細胞，成骨細胞，軟骨細胞，肝細胞，神經(jīng)元細胞，肌細胞，，上皮細胞等細胞。此后大量研究表明，間充質(zhì)干細胞可趨化至受傷發(fā)炎的部位，具備潛在的免疫調(diào)節(jié)能力，抗炎能力和營養(yǎng)作用，是組織工程，再生醫(yī)學和自身免疫性疾病治療的理想工具。新近發(fā)現(xiàn)的一種可溶性分子Rspo1（R-spondin1）可通過結(jié)合腸隱窩干細胞表面Lgr5和Lgr4的受體、競爭抑制Wnt通路拮抗劑DKK1等機制，調(diào)節(jié)并增強活化Wnt/β-catenin信號，促進腸隱窩干細胞增殖和分化。另外，人Rspo1可作用于小鼠腸隱窩干細胞，產(chǎn)生促增殖、分化和生存作用。 鑒此，本文建立了腸上皮輻射損傷小鼠模型并觀察了其損傷規(guī)律，通過基因轉(zhuǎn)染的方法構(gòu)建了一株穩(wěn)定表達人Rspo1分子的間充質(zhì)干細胞株并鑒定了其生物學活性，利用Rspo1基因轉(zhuǎn)染的間充質(zhì)干細胞株過繼輸注腸上皮輻射損傷小鼠，通過間充質(zhì)干細胞發(fā)揮的免疫調(diào)節(jié)作用與Rspo1/β-catenin途徑刺激腸隱窩干細胞增殖和分化的作用相聯(lián)合，修復腸隱窩-絨毛更新機制，以期為急性放射病的有效救治提供新思路。 一、腸上皮輻射損傷小鼠模型的建立及病理損傷規(guī)律 【目的】建立腸上皮輻射損傷小鼠模型，觀察損傷病理變化規(guī)律。 【方法】分別以10Gy、12Gy、14Gy、16Gy和18Gy劑量單純照射小鼠腹部，確定單純腹部照射的最小致輻射死劑量。進而采用18Gy劑量照射Lgr5-EGFP-ires-CreERT2轉(zhuǎn)基因小鼠，每日觀察小鼠體重，并在輻照后0.5d、3.5d和6d取小鼠小腸，觀察小腸的病理學改變規(guī)律，如小腸絨毛長度、腸隱窩數(shù)目以及腸隱窩Lgr5+干細胞的數(shù)量變化。 【結(jié)果】18Gy為單純腹部照射建立腸上皮輻射損傷小鼠模型的最小致死劑量；與未處理組相比，腹部照射后小鼠體重逐步減輕、小腸絨毛變短、隱窩數(shù)目減少、腸隱窩干細胞數(shù)量在短時間內(nèi)迅速減少。 【結(jié)論】本部分研究采用18Gy劑量單純輻照小鼠腹部，建立了腸上皮輻射損傷小鼠模型。在此基礎(chǔ)上觀察了腸上皮輻射損傷病理規(guī)律。這為急性輻射損傷救治的研究提供了良好的研究工具。 二、Rspo1基因轉(zhuǎn)染間充質(zhì)干細胞株的構(gòu)建及生物學活性鑒定 【目的】構(gòu)建穩(wěn)定表達Rspo1的基因轉(zhuǎn)染間充質(zhì)干細胞株。 【方法】將人Rspo1全長cDNA重組入逆轉(zhuǎn)錄病毒載體pEGZ-Term，通過與輔助病毒載體共轉(zhuǎn)染293T細胞，包裝為具有感染力的完整重組病毒載體，收集培養(yǎng)上清感染間充質(zhì)干細胞C3H10T1/2細胞株，篩選獲得G418抗性的基因轉(zhuǎn)染細胞，通過RT-PCR與流式細胞術(shù)檢測感染后C3H10T1/2細胞Rspo1分子的表達，并采用細胞計數(shù)法觀察其上清對結(jié)腸癌細胞株SW480增殖能力的促進作用。 【結(jié)果】成功構(gòu)建pEGZ-Term/Rspo1逆轉(zhuǎn)錄病毒表達載體，獲得了穩(wěn)定表達人Rspo1的基因轉(zhuǎn)染細胞株C3H10/Rspo1，該細胞株上清能促進SW480結(jié)腸癌細胞增殖。 【結(jié)論】建立了穩(wěn)定表達Rspo1的基因轉(zhuǎn)染間充質(zhì)干細胞株，并證實其分泌的Rspo1具有生物學活性，為進一步利用Rspo1和間充質(zhì)干細胞聯(lián)合靶向作用于腸道干細胞救治腸上皮損傷的研究奠定了基礎(chǔ)。 三、Rspo1基因轉(zhuǎn)染間充質(zhì)干細胞修復小鼠腸上皮輻射損傷 【目的】利用間充質(zhì)干細胞的保護作用聯(lián)合Rspo1靶向修復腸上皮輻射損傷小鼠。 【方法】采用流式細胞術(shù)檢測C3H10T1/2細胞株表面趨化因子受體和相關(guān)負性免疫分子的表達；通過胞內(nèi)染色的方法，利用流式細胞術(shù)檢測C3H10T1/2細胞株內(nèi)相關(guān)免疫抑制與激活細胞因子的表達；利用ELISA法檢測C3H10T1/2細胞上清中PEG2的含量；采用18Gy輻照劑量單純照射小鼠腹部，將PBS、C3H10T1/2細胞株、第二部分構(gòu)建的C3H10/mock細胞株及C3H10/Rspo1細胞株分別移植入腸上皮輻照損傷小鼠，每日觀察小鼠的生存狀況及體重變化。 【結(jié)果】C3H10T1/2細胞株可表達趨化因子受體CXCR4和PD-L1、B7H3、B7H4等多種負性免疫分子，產(chǎn)生TGF-β、IL-10、IL-4和分泌PGE2等免疫抑制因子；對于腸上皮輻照損傷小鼠，C3H10/Rspo1移植組小鼠的存活率大于單純C3H10T1/2移植組小鼠的存活率，而PBS移植組小鼠在兩周內(nèi)全部死亡，同時C3H10/Rspo1移植組小鼠體重降低明顯低于單純C3H10T1/2移植組。 【結(jié)論】C3H10/Rspo1細胞株可通過表達的趨化因子受體定向的趨化至輻照損傷的腸上皮部位，通過發(fā)揮免疫抑制作用保護受損腸道干細胞，并分泌Rspo1分子，修復受輻照損傷的腸上皮。

【關(guān)鍵詞】：
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R818
【目錄】：

下載全文 更多同類文獻

CAJ全文下載

(如何獲取全文？ 歡迎：購買知網(wǎng)充值卡、在線充值、在線咨詢)

CAJViewer閱讀器支持CAJ、PDF文件格式

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 Brittany C.Parker;Wei Zhang;;Fusion genes in solid tumors: an emerging target for cancer diagnosis and treatment[J];Chinese Journal of Cancer;2013年11期

2 王紅霞;;基于化學蛋白質(zhì)組學的激酶組學研究進展[J];國際藥學研究雜志;2014年03期

3 郭戈楊;羅英;李宇;楊曉琳;;白介素11聯(lián)合地塞米松治療急性放射性口腔炎的臨床觀察[J];湖南師范大學學報(醫(yī)學版);2013年04期

4 陳建華;張軍;;干細胞在自身免疫性疾病和GVHD的注冊臨床研究[J];免疫學雜志;2014年08期

5 陳晨;李筠;劉云章;周建峰;;R-spondin:一個新的Wnt信號通路相關(guān)蛋白家族的研究進展[J];生命科學;2011年04期

6 王倩;范文濤;;馬齒莧防治潰瘍性結(jié)腸炎癌變研究進展[J];山東中醫(yī)藥大學學報;2013年05期

7 孫彬彬;趙剛;喬翠霞;邸愛婷;遲玉花;;潰愈散對潰瘍性結(jié)腸炎患者血清IL-4水平的影響及臨床療效觀察(英文)[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學進展;2013年28期

8 Fatemeh Anbari;Mohammad Ali Khalili;Ahmad Reza Bahrami;Arezoo Khoradmehr;Fatemeh Sadeghian;Farzaneh Fesahat;Ali Nabi;;Intravenous transplantation of bone marrow mesenchymal stem cells promotes neural regeneration after traumatic brain injury[J];Neural Regeneration Research;2014年09期

9 萬芝清;陳曉;周平;韓根成;王濟東;夏廷毅;;小鼠放射性十二指腸炎模型的建立[J];世界華人消化雜志;2013年23期

10 楊華強;李紅;胡明均;李玉玲;鮑紅霞;呂曉娟;;臍帶間充質(zhì)干細胞移植治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡五例并文獻復習[J];中華臨床醫(yī)師雜志(電子版);2013年14期

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 俞若熙;基于陰虛、陽虛體質(zhì)基因表達的健康狀態(tài)微觀辨識研究[D];北京中醫(yī)藥大學;2013年

2 申晶;骨髓源間充質(zhì)干細胞輸注促進STZ誘導的糖尿病大鼠胰腺內(nèi)α細胞向β細胞的轉(zhuǎn)變：糖尿病治療的新模式[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進修學院;2013年

3 李偉;人臍帶間質(zhì)干細胞通過巨噬細胞參與修復腎缺血再灌注損傷研究[D];江蘇大學;2013年

4 趙文娜;苦木的化學成分及藥理活性研究[D];西北大學;2013年

5 王思涵;Ⅰ.NRSF基因沉默促進干細胞向胰島β樣細胞分化的研究Ⅱ.小分子化合物Me6對輻射損傷組織的修復作用及其機制的研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院;2013年

6 韋潁昕;硒誘導胰腺癌細胞程序性死亡及作用機制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2013年

7 王有為;臍帶間充質(zhì)干細胞臨床前安全性研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2013年

8 劉芳;骨髓間充質(zhì)干細胞移植聯(lián)合雌激素治療宮腔粘連的實驗研究[D];南方醫(yī)科大學;2013年

9 徐揚;R-spondin及其受體在Wnt信號通路中相互作用的研究[D];吉林大學;2013年

10 劉仕杰;Lgr4基因在腸自穩(wěn)態(tài)維持及腸炎中的功能研究[D];華東師范大學;2013年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 姜開菊;Wnt家族基因Wnt4-like以及FLNα在荒漠沙蜥皮膚中的原位表達研究[D];蘭州大學;2013年

2 翁申達;牙鲆性別相關(guān)基因的克隆與表達分析[D];中國科學院研究生院（海洋研究所）;2013年

3 于程程;KGF聯(lián)合G-CSF對5.0Gy照射小鼠抗輻射作用的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2013年

4 張玉龍;TNF-α抑制骨髓間充質(zhì)干細胞參與糖尿病創(chuàng)面愈合的機制研究[D];第三軍醫(yī)大學;2013年

5 周歡;經(jīng)轉(zhuǎn)化生長因子-α刺激的骨髓間充質(zhì)干細胞治療急性放射性腸損傷的實驗研究[D];福建醫(yī)科大學;2013年

6 聶新華;比較預防性與治療性給予重組人白介素-11對于D-氨基半乳糖誘導急性肝衰竭的治療效果[D];天津醫(yī)科大學;2013年

7 李士欣;人臍帶Wharton’s jelly間充質(zhì)干細胞的分離培養(yǎng)及基本生物學特性的研究[D];昆明醫(yī)科大學;2013年

8 于小璇;Th17、Treg細胞以及相關(guān)細胞因子與尋常型天皰瘡發(fā)病相關(guān)性的研究[D];昆明醫(yī)科大學;2013年

9 梁遷;三條造血候選基因的克隆及在骨髓再生過程中作用的篩查[D];上海交通大學;2007年

10 裴銀霞;B7-H1、B7-H3、B7-H4在正常和X射線照射后小鼠小腸中的表達變化[D];蘇州大學;2013年

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 范傳波,艾輝勝;骨髓間充質(zhì)干細胞免疫抑制作用及其機理[J];生物技術(shù)通訊;2005年04期

2 王景昌,白海,吳濤,路繼紅,歐劍峰;造血干細胞移植預處理對人骨髓間充質(zhì)干細胞的影響及機制研究[J];西北國防醫(yī)學雜志;2005年04期

3 馮立新,許倩,王棟,肖桂芝;兔骨髓間充質(zhì)干細胞的分離方法[J];承德醫(yī)學院學報;2005年03期

4 陸曉茜;劉霆;;骨髓間充質(zhì)干細胞的生物學特性及其臨床應用[J];四川醫(yī)學;2005年12期

5 甘鳳英;葉德富;;間充質(zhì)干細胞向軟骨方向分化的研究[J];醫(yī)學綜述;2006年11期

6 李府;馬麗霞;張樂玲;鄭立波;陳穎杰;吳鎮(zhèn);王世富;;細胞因子聯(lián)合紋狀體條件培養(yǎng)液定向誘導間充質(zhì)干細胞體外分化為多巴胺能神經(jīng)元的研究(英文)[J];實用兒科臨床雜志;2009年24期

7 譚艷芳;殷小成;熊玉娟;王艷;;黃芪甲甙對骨髓間充質(zhì)干細胞分泌干細胞因子的影響[J];中國當代兒科雜志;2010年04期

8 林滬;陳黎明;王福生;;間充質(zhì)干細胞在肝臟的分化機制研究進展[J];實用肝臟病雜志;2010年03期

9 卓本慧,李廷玉;間充質(zhì)干細胞與神經(jīng)細胞移植[J];國外醫(yī)學.腦血管疾病分冊;2002年04期

10 郭希民 ,王常勇 ,王永紅 ,段翠密 ,趙強 ,孫大銘;人骨髓間充質(zhì)干細胞分離培養(yǎng)及向軟骨細胞定向分化的實驗研究[J];中華口腔醫(yī)學雜志;2003年01期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王巧稚;韓藝;趙宏賢;余鴻;劉廣益;;當歸誘導人脂肪間充質(zhì)干細胞向神經(jīng)細胞分化和毒性檢測的研究[A];中國解剖學會第十一屆全國組織學與胚胎學青年學術(shù)研討會論文匯編[C];2009年

2 王玉紅;陳光輝;;地黃低聚糖對人脂肪組織源性間充質(zhì)干細胞分泌肝細胞生長因子的影響[A];2010全國中西醫(yī)結(jié)合危重病、急救醫(yī)學學術(shù)會議論文匯編[C];2010年

3 杜鳳移;王皓;楊樹龍;趙繪存;楊英;楊軍;;納米纖維支架對大鼠間充質(zhì)干細胞向肝細胞分化的影響[A];天津市生物醫(yī)學工程學會第29屆學術(shù)年會暨首屆生物醫(yī)學工程前沿科學研討會論文集[C];2009年

4 郭勇;張西正;郭春;魏嚴;李瑞欣;徐曉瑩;張永紅;;脂肪間充質(zhì)干細胞向心肌細胞分化中心肌發(fā)育相關(guān)基因的表達[A];天津市生物醫(yī)學工程學會2008年年會暨首屆生物醫(yī)學工程與臨床論壇論文集[C];2008年

5 朱恒;江小霞;劉元林;張毅;毛寧;;間充質(zhì)干細胞選擇性調(diào)節(jié)破骨細胞發(fā)育和功能[A];第13屆全國實驗血液學會議論文摘要[C];2011年

6 張顥;陶艷玲;邱林;張伯龍;馬軍;陳志哲;劉擁軍;韓忠朝;;一種具有免疫負調(diào)節(jié)功能的人臍帶源間充質(zhì)干細胞[A];第12屆全國實驗血液學會議論文摘要[C];2009年

7 楊少光;池穎;戎麗娟;邢文;盧士紅;趙欽軍;馬鳳霞;韓忠朝;;不同來源間充質(zhì)干細胞誘導分化成血管內(nèi)皮細胞的比較[A];第13屆全國實驗血液學會議論文摘要[C];2011年

8 李杰平;孔佩艷;李佳麗;朱麗丹;孔祥敬;曾東風;劉紅;王慶余;彭賢貴;陳幸華;張曦;;純化的自體CD34+細胞聯(lián)合間充質(zhì)干細胞治療難治性克隆恩病一例并文獻復習[A];第13屆全國實驗血液學會議論文摘要[C];2011年

9 羅高興;程文廣;黃正根;賀偉峰;袁順宗;陳希煒;吳軍;;應用人臍帶血間充質(zhì)干細胞修復小鼠皮膚缺損創(chuàng)面的實驗研究[A];第六屆全國燒傷救治專題研討會論文匯編[C];2009年

10 郭振興;鄭翠玲;陳振萍;董文川;楊仁池;;胚胎骨髓來源的間充質(zhì)干細胞對人Th17細胞免疫調(diào)節(jié)作用的研究[A];第12屆全國實驗血液學會議論文摘要[C];2009年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王秋月　王琳;[N];科技日報;2009年

2 記者 李素鋒;[N];臨汾日報;2009年

3 記者 王丹　通訊員 艾素;[N];健康報;2010年

4 記者 白毅;[N];中國醫(yī)藥報;2009年

5 張泓;[N];北方經(jīng)濟時報;2008年

6 徐機玲;姜躍進;[N];中國醫(yī)藥報;2003年

7 本報記者 楊陽騰;[N];經(jīng)濟日報;2011年

8 時報記者 楊曉帆;[N];濱海時報;2010年

9 張獻懷 王志紅;[N];保健時報;2009年

10 徐機玲 姜躍進;[N];新華每日電訊;2003年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 彭飛;620nm非相干紅光對大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞的光生物調(diào)節(jié)作用[D];華中科技大學;2011年

2 于美嬌;系統(tǒng)歸巢的間充質(zhì)干細胞在牙周組織修復再生過程中的作用研究[D];山東大學;2011年

3 李東杰;人臍帶間充質(zhì)干細胞促進創(chuàng)面愈合及體外誘導分化為表皮樣細胞的實驗研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進修學院;2011年

4 李寶軍;脂肪間充質(zhì)干細胞體外誘導及復合PLGA體內(nèi)異位成軟骨的實驗研究[D];中南大學;2007年

5 朱雅姝;Flk-1~+間充質(zhì)干細胞對腫瘤細胞增殖的抑制作用及其分子機制研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2008年

6 吳桂珠;脂肪間充質(zhì)干細胞治療壓力性尿失禁的實驗研究[D];福建醫(yī)科大學;2010年

7 熊卉;轉(zhuǎn)化生長因子β1基因體外轉(zhuǎn)染兔顳下頜關(guān)節(jié)滑膜間充質(zhì)干細胞向纖維軟骨轉(zhuǎn)化實驗研究[D];武漢大學;2010年

8 苗宗寧;胎盤間充質(zhì)干細胞與絲素蛋白/羥基磷灰石材料在骨創(chuàng)傷修復中的實驗研究[D];蘇州大學;2010年

9 梁偉;人骨髓Flk-1~+間充質(zhì)干細胞抗DNA損傷物質(zhì)影響作用研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2008年

10 趙迎澤;BMP9通過MAPKs通路調(diào)控間充質(zhì)干細胞成骨分化及其機制的初步研究[D];重慶醫(yī)科大學;2010年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 章守琴;人羊膜間充質(zhì)干細胞支持造血的體外研究[D];昆明醫(yī)學院;2010年

2 陳芳;臍帶間充質(zhì)干細胞修復化療所致卵巢顆粒細胞損傷的體外實驗[D];暨南大學;2010年

3 張茜真;人臍帶間充質(zhì)干細胞的分離、鑒定以及干細胞特異性轉(zhuǎn)錄因子誘導其重編程的研究[D];浙江理工大學;2010年

4 陳義;臍帶間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)及體外重建角膜后板層的初步研究[D];暨南大學;2010年

5 唐子濱;納米級膠原基骨材料復合自體脂肪間充質(zhì)干細胞用于兔后外側(cè)脊柱融合的實驗研究[D];河北醫(yī)科大學;2010年

6 齊凱;人臍帶來源間充質(zhì)干細胞分離培養(yǎng)方法的優(yōu)化初探[D];山西醫(yī)科大學;2011年

7 馬蘭蘭;不同胎齡人臍帶血間充質(zhì)干細胞的研究[D];中國醫(yī)科大學;2010年

8 李成華;口腔黏膜間充質(zhì)干細胞存在及在口腔扁平苔蘚中變化的初步研究[D];第四軍醫(yī)大學;2010年

9 田毅;人臍帶Wharton's jelly間充質(zhì)干細胞的生物學特性以及其與腦腫瘤干細胞共培養(yǎng)的實驗研究[D];鄭州大學;2010年

10 張福麗;間充質(zhì)干細胞治療肺動脈高壓研究進展（附肺動脈高壓發(fā)病機制進展）[D];山西醫(yī)科大學;2011年

  本文關(guān)鍵詞：Rspo1基因轉(zhuǎn)染間充質(zhì)干細胞修復小鼠腸上皮輻射損傷，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：190580