本文選題：X-Ray　切入點：MCF-10A　出處：《天津醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:放射治療(radiotherapy,RT)是目前乳腺癌輔助治療的重要手段之一,其目的在于利用放射線殺死腫瘤原發(fā)灶或轉(zhuǎn)移灶局部的腫瘤細胞。保乳術(shù)后或淋巴結(jié)陽性患者乳腺癌根治術(shù)后放療不僅可以降低局部復(fù)發(fā)率,還可以減少遠處轉(zhuǎn)移并改善長期生存。然而,放療抵抗(radioresistance)現(xiàn)象削弱了RT對乳腺癌患者的療效;RT作為一種損傷因素是否會對腫瘤細胞的表型或基因組產(chǎn)生作用,從而使其生物功能發(fā)生改變也有待進一步研究。同時,RT是否會刺激正常的表皮細胞轉(zhuǎn)變?yōu)閻盒阅[瘤細胞而引起的繼發(fā)腫瘤尚存在爭議。研究乳腺癌放療抵抗的生物學(xué)機制并找出相應(yīng)的治療靶點是目前提高放療療效面臨的重要問題。在肺癌的治療中,在EGFR突變患者中,酪氨酸激酶抑制劑(TKI)類藥物聯(lián)合放療,取得了較好臨床療效。在放療后復(fù)發(fā)的乳腺癌患者,其復(fù)發(fā)是否與EGFR通路有一定的關(guān)系、RT在EGFR通路的改變上扮演了什么樣的角色、在乳腺癌患者中應(yīng)用TKI類藥物是否也能夠增加放療的敏感性有待進一步研究。方法:1.通過多次重復(fù)小劑量X-Ray照射,建立永生化乳腺正常上皮細胞系MCF-10A的放療耐受細胞系。2.應(yīng)用Nikon倒置顯微鏡(TE2000-U)觀察照射后細胞形態(tài)的變化。3.通過CCK-8增殖試驗,二維克隆形成試驗、EDU細胞增殖實驗研究放療耐受的細胞系的增殖能力的變化及其應(yīng)用表皮生長因子(EGF)、TKI類藥物和EGFR磷酸化抑制劑AG1478對細胞增殖的影響。4.通過細胞劃痕試驗、Transwell實驗研究放射耐受的細胞遷移能力的變化及表皮生長因子(EGF)、TKI類藥物和EGFR磷酸化抑制劑AG1478對細胞遷移能力的影響。5.通過細胞流式試驗檢測放射對細胞周期的影響,以及TKI類藥物和EGFR磷酸化抑制劑AG1478對細胞周期的影響。6.通過Western Blotting技術(shù)驗證放療耐受的細胞系EGFR的表達及其下游信號通路的變化情況。研究結(jié)果:1.建立細胞株:成功建立耐受10Gy X-Ray的細胞株MCF-10A-10Gy。2.細胞形態(tài)的變化:形態(tài)趨向間質(zhì)細胞樣發(fā)展,MCF-10A-10Gy形態(tài)變細變長,細胞偽足增多變長,細胞核所占細胞比例增加;細胞之間的聯(lián)系變少,細胞與細胞之間的距離增大且細胞分布均勻,細胞不再呈扎堆性生長。細胞正常的生長與增殖不需要EGF的添加。3.細胞生物學(xué)特性的變化:MCF-10A-10Gy細胞增殖減慢,遷移能力增強,應(yīng)用TKI類小分子藥物和EGFR磷酸化抑制劑AG1478處理后,細胞增殖減慢,遷移能力減弱。4.細胞周期的變化:照射后,處于G1期的細胞所占比例增多,應(yīng)用TKI類小分子藥物和EGFR磷酸化抑制劑AG1478處理原始細胞MCF-10A后,處于G1期細胞所占比例增多。5.EGFR下游通路及E-cad表達的變化及其關(guān)系:照射后細胞EGFR下游Akt通路異�；罨�;E-cad表達下調(diào),且與Akt的活化呈負(fù)相關(guān)。EGF刺激后,原始MCF-10A EGFR下游通路活化,E-cad表達下調(diào)。研究結(jié)論:1.X-Ray有可能引起永生化乳腺上皮細胞MCF-10A EGFR-Akt信號通路的異�；罨�,其生長不再依賴外界EGF的作用;2.照射后,MCF-10A形態(tài)發(fā)生明顯變化,上皮細胞標(biāo)記物E-cadherin表達明顯下調(diào),細胞形態(tài)向間質(zhì)樣細胞形態(tài)發(fā)展;3.照射后,MCF-10A增殖能力減弱但遷移能力增強,并且這一效應(yīng)能夠被EGFR及Akt磷酸化抑制劑所阻斷;4.照射后,細胞周期明顯阻滯在G1期,G1期所占比例增高,提示細胞對照射的敏感性降低。5.在乳腺癌中應(yīng)用EGFR靶向藥物,有可能在放療耐受后EGFR存在自我激活的患者中獲益。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R737.9;R730.55

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本文編號：1613536