本文選題：阿霉素　切入點：脂質(zhì)微泡　出處：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2014年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：第一部分載阿霉素微泡-微球復(fù)合體的制備及性能檢測 目的制備一種載阿霉素微泡-微球復(fù)合體（ADM-NMCs）并測定其一般特性。方法采用雙乳化法制備載阿霉素PLGA納米微球（ADM-NPs），并觀察其形態(tài)，檢測其粒徑分布范圍，電位，包封率和載藥量等性質(zhì)；采用機(jī)械振蕩法制備帶氨基的脂質(zhì)微泡造影劑（NH2-MB），并對其進(jìn)行形態(tài)，粒徑，電位等性質(zhì)檢測；然后將ADM-NPs末端的羧基用活化劑EDC/NHS活化后，與NH2-MB末端的氨基反應(yīng)后共價連接到脂質(zhì)微泡的表面，制備成ADM-NPs-MB Complexes （ADM-NMCs），對其進(jìn)行粒徑分布及每個微泡的平均載藥量等性質(zhì)檢測并對其進(jìn)行了體外釋藥實驗觀察。 結(jié)果ADM-NPs粒徑分布均勻，平均粒徑為249.8nm，包封率為86.1%，載藥量為7.8%，Ztea電位為-0.82mv；NH2-MB平均粒徑為1032nm，Ztea電位為0.7mv；ADM-NMCs的平均粒徑為1721nm，每個微泡平均載阿霉素量為0.28ng，低強(qiáng)度超聲輻照后釋放的藥物量明顯高于未輻照組。 結(jié)論本實驗成功制備了載阿霉素微泡-微球復(fù)合體，粒徑分布均勻，載藥量較高，低強(qiáng)度聚焦超聲輻照后可明顯增強(qiáng)藥物釋放率，提示載阿霉素微泡-微球復(fù)合體可在實時超聲監(jiān)控下爆破體內(nèi)定位釋放藥物，實現(xiàn)對腫瘤的區(qū)域的靶向治療。 第二部分低強(qiáng)度聚焦超聲靶向破壞微泡的實驗研究 目的探討低強(qiáng)度聚焦超聲體外局部靶向爆破脂質(zhì)微泡的能力；探討低強(qiáng)度聚焦超聲體內(nèi)定位靶向爆破載阿霉素微泡-微球復(fù)合體并更精確地定位釋放藥物的能力。 方法采用機(jī)械振蕩法制備普通脂質(zhì)微泡，將脂質(zhì)微泡稀釋后放入自制的乳膠水囊中，分別用同等強(qiáng)度的普通診斷超聲和低強(qiáng)度聚焦超聲輻照10s后，采用二維超聲顯影模式觀察普通診斷超聲和低強(qiáng)度聚焦超聲靶向破壞微泡的范圍；選取20只健康新西蘭大白兔，將新型載阿霉素微泡經(jīng)兔耳緣靜脈注射后，在二維超聲監(jiān)控下，用低強(qiáng)度聚焦超聲輻照肝臟60s，輻照結(jié)束后，處死兔子，取出肝臟組織，分別分離距焦域不同位置處的四塊肝臟組織塊，用反相高效液相色譜法測定不同距離處肝臟組織所含阿霉素的量。 結(jié)果普通脂質(zhì)微泡在超聲輻照前的聲像圖呈均勻的高回聲，用普通診斷超聲輻照后，聲場內(nèi)的大部分微泡被爆破呈不均勻的低回聲，而低強(qiáng)度聚焦超聲輻照后在沿超聲輻照方向的微泡爆破范圍呈梭形的低回聲區(qū)，在與低強(qiáng)度聚焦超聲聲束垂直方向的微泡爆破范圍呈圓形的低回聲區(qū)，且圓形低回聲區(qū)的范圍隨著低強(qiáng)度聚焦超聲的聲強(qiáng)的增大而增大。低強(qiáng)度聚焦超聲輻照載阿霉素微泡-微球復(fù)合體后，處于輻照中心區(qū)域的肝臟組織中阿霉素含量最高，距離輻照中心區(qū)域越遠(yuǎn)，肝臟組織的阿霉素含量越低。 結(jié)論與普通診斷超聲相比，低強(qiáng)度聚焦超聲具有精確靶向爆破微泡且定位釋放藥物的能力，因而低強(qiáng)度聚焦超聲可更精確地進(jìn)行體內(nèi)載藥微泡定位爆破釋放藥物進(jìn)行腫瘤靶向藥物治療。 第三部分載阿霉素微泡-微球復(fù)合體體內(nèi)外顯影觀察及其聯(lián)合低強(qiáng)度聚焦超聲對兔VX2肝癌的作用研究 目的探討載阿霉素微泡-微球復(fù)合體造影劑對兔肝癌的超聲造影效果；探討低強(qiáng)度聚焦超聲靶向爆破載阿霉素微泡-微球復(fù)合體定位釋放藥物對兔肝癌的治療效果。 方法新西蘭大白兔64只，采取瘤塊種植法于肝左葉植入VX2腫瘤組織塊，建立VX2肝癌模型。建模14天后，選取10只荷瘤兔，隨機(jī)分為兩組，分別為普通脂質(zhì)微泡組（經(jīng)耳緣靜脈注射普通脂質(zhì)微泡）和載阿霉素微泡-微球復(fù)合體組（經(jīng)耳緣靜脈注射載阿霉素微泡-微球復(fù)合體），進(jìn)行超聲造影，并采用DFY-Ⅱ型圖像分析軟件評價超聲造影效果；建模14天后，取54只荷瘤兔，隨機(jī)分為6組，分別為空白對照組（經(jīng)耳緣靜脈注射生理鹽水），低強(qiáng)度聚焦超聲聯(lián)合載阿霉素納米微球組（經(jīng)耳緣靜脈注射載阿霉素納米微球，并用低強(qiáng)度聚焦超聲輻照），低強(qiáng)度聚焦超聲聯(lián)合脂質(zhì)微泡組（經(jīng)耳緣靜脈注射脂質(zhì)微泡，并用低強(qiáng)度聚焦超聲輻照），低強(qiáng)度聚焦超聲聯(lián)合脂質(zhì)微泡和載阿霉素納米微球混合組（經(jīng)耳緣靜脈注射脂質(zhì)微泡和載阿霉素納米微球，并用低強(qiáng)度聚焦超聲輻照），普通診斷超聲聯(lián)合載阿霉素微泡-微球復(fù)合體組（經(jīng)耳緣靜脈注射載阿霉素微泡-微球復(fù)合體，并用普通診斷超聲輻照），低強(qiáng)度聚焦超聲聯(lián)合載阿霉素微泡-微球復(fù)合體組（經(jīng)耳緣靜脈注射載阿霉素微泡-微球復(fù)合體，并用低強(qiáng)度聚焦超聲輻照），治療前后用診斷超聲觀察腫瘤生長情況，并測量其最長徑和最短徑，計算各組腫瘤抑瘤率，采用免疫組化法檢測腫瘤組織PCNA表達(dá)情況；TUNEL法檢測腫瘤細(xì)胞凋亡情況，記錄各組兔子中位生存期，比較各組存活情況。 結(jié)果在超聲造影模式下，普通脂質(zhì)微泡和載阿霉素微泡-微球復(fù)合體經(jīng)靜脈注射后，肝癌區(qū)域均可見回聲增強(qiáng)，，且二者的達(dá)峰時間，峰值和體內(nèi)清除時間均相似。免疫組化結(jié)果顯示，低強(qiáng)度聚焦超聲聯(lián)合載阿霉素微泡-微球復(fù)合體組的腫瘤抑瘤率顯著高于其它各組，腫瘤增殖明顯受到抑制，增殖指數(shù)顯著低于其它各組（P0.05），細(xì)胞凋亡指數(shù)顯著高于其它各組（P0.05），動物存活時間顯著長于其它各組。 結(jié)論載阿霉素微泡-微球復(fù)合體具有顯著的造影效果，可在二維超聲的監(jiān)控下靶向爆破定位釋放藥物。低強(qiáng)度聚焦超聲聯(lián)合載阿霉素微泡-微球復(fù)合體能顯著抑制VX2肝癌的增殖，促進(jìn)VX2肝癌細(xì)胞凋亡，對VX2肝癌具有顯著的抑瘤效果，有望為臨床腫瘤治療提供一種安全無創(chuàng)的治療方式。
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【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R445.1;R735.7

【參考文獻(xiàn)】

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1 劉瑤;康娟;吳小翎;王志剛;汪朝霞;李攀;王玨;;載紫杉醇超聲微泡造影劑對人肝癌細(xì)胞株HepG_2增殖影響及誘導(dǎo)凋亡作用研究[J];中國超聲醫(yī)學(xué)雜志;2008年08期

本文編號：1568205