本文關(guān)鍵詞：中醫(yī)藥分期治療放射性肺損傷的臨床及實驗研究　出處：《成都中醫(yī)藥大學(xué)》2015年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：第一部分中醫(yī)藥分期治療對放射性肺損傷患者的臨床療效觀察目的以接受放射治療后符合急性放射性肺炎診斷的胸部腫瘤患者為研究對象,按照前瞻性、隨機對照臨床研究原則,以呼吸困難評分、中醫(yī)臨床癥狀評分、影像學(xué)檢查、生活質(zhì)量評分作為研究的主要指標(biāo),觀察中藥分期治療放射性肺損傷的臨床療效及安全性。方法按照多中心、隨機、平行對照、單盲研究方法,選擇2013年1月至2014年9月期間四川省腫瘤醫(yī)院門診及病房、四川省中醫(yī)院門診符合RIPI診斷患者64例,采用隨機數(shù)字法隨機分為兩組：對照組32例和試驗組32例。對照組：西醫(yī)常規(guī)治療；試驗組：西醫(yī)常規(guī)治療+中藥復(fù)方(第1-3個月服用中藥1號方,第4-6個月服用中藥2號方),分別在預(yù)計時間評價呼吸困難評分、中醫(yī)臨床癥狀評分、影像學(xué)檢查、生活質(zhì)量評分及治療后放射性肺損傷分級情況。結(jié)果①RTOG分級結(jié)果：兩組患者治療6個月后,觀察RIP1分級,采用Mann-Whitney U檢驗進行統(tǒng)計,兩組2、3、4級數(shù)據(jù)比較,P0.05,具有顯著性差異,可以認為試驗組在病情分級方面優(yōu)于對照組。②呼吸困難評分結(jié)果：組內(nèi)比較結(jié)果顯示,評分整體呈現(xiàn)下降趨勢,兩組治療后各時間點與治療前比較,P0.05,數(shù)據(jù)具有顯著性差異；兩組治療后6周-3月,P0.05,治療后3月-6月,P0.05,數(shù)據(jù)無顯著性差異,可以認為兩組均在治療前至治療后6周呼吸困難評分明顯下降,治療后3月兩組呼吸困難評分稍升高,但比較無統(tǒng)計學(xué)意義,治療后6月呼吸困難評分再次下降,但比較無統(tǒng)計學(xué)意義。組間比較結(jié)果顯示,治療前、治療后1、3、6周組間數(shù)據(jù)比較,P0.05,數(shù)據(jù)無顯著性差異；治療后3、6月組間數(shù)據(jù)比較,P0.05,數(shù)據(jù)具有顯著性差異,可以認為,治療前-治療后6周,兩組在呼吸困難評分的改善方面無明顯差異,但治療后3、6月,試驗組在呼吸困難評分改善方面明顯優(yōu)于對照組。③中醫(yī)臨床癥狀評分結(jié)果：組內(nèi)比較結(jié)果示,兩組評分整體呈現(xiàn)下降趨勢；試驗組治療前-治療后1周數(shù)據(jù)比較,P0.05,數(shù)據(jù)無顯著性差異；對照組治療前-治療后1、3周,P0.05,數(shù)據(jù)無顯著性差異；其余各時間點與治療前比較,P0.05,均有顯著性差異。組間比較結(jié)果顯示,除治療前、治療后1周外,其余各時間點數(shù)據(jù)比較,P0.05,數(shù)據(jù)具有顯著性差異。可以認為治療1周后的各時間點試驗組在中醫(yī)臨床癥狀評分改善方面明顯優(yōu)于對照組。④影像學(xué)評分：組內(nèi)比較結(jié)果顯示,評分整體呈現(xiàn)上升趨勢,組內(nèi)各時間點比較,P0.05,數(shù)據(jù)有顯著性差異。組間比較結(jié)果顯示,除治療前外,其余各時間點數(shù)據(jù)比較,P0.05,數(shù)據(jù)具有顯著性差異。可以認為試驗組在影像學(xué)評分改善方面明顯優(yōu)于對照組。⑤KPS評分：采用Mann-Whitney U檢驗進行統(tǒng)計,Z=-2.640,P0.05,數(shù)據(jù)具有顯著性差異,可以認為,試驗組在生活質(zhì)量的改善、穩(wěn)定方面明顯優(yōu)于于對照組。結(jié)論①兩組RIPI患者呼吸困難在疾病治療早期均可以明顯緩解,中藥1號方配合西醫(yī)常規(guī)治療在呼吸困難緩解率方面稍優(yōu)于單純西醫(yī)常規(guī)治療�？梢哉J為,在急性期西醫(yī)常規(guī)治療配合中藥1號方可以明顯增加呼吸困難緩解率。②治療后3月兩組呼吸困難評分在下降后再次輕微升高,考慮與疾病進展相關(guān),其中對照組程度更重,并持續(xù)到治療后6月,試驗組在治療后6月呼吸困難積分下降。可以認為,放射性肺損傷慢性期的治療上,西醫(yī)常規(guī)治療有一定局限性,而配合中藥2號方可以明顯在慢性期繼續(xù)緩解呼吸困難程度。③RTOG分級：治療結(jié)束后試驗組的3、4級RIPI病例數(shù)均低于對照組,提示中藥1號方不僅能明顯緩解早期放射性肺炎所致呼吸困難,也可能存在延緩肺纖維化的作用。④中藥分期治療可以有效緩解RIPI患者的中醫(yī)臨床癥狀,并且配合中藥1號方可以顯著改善放射性肺損傷早期肺泡炎的影像學(xué)表現(xiàn),并可能從早期開始減緩RIPI病程的進展,配合中藥2號方能進一步延緩肺纖維化的進展程度。⑤中藥分期治療可提高患者生活質(zhì)量。第二部分中醫(yī)藥分期治療對小鼠放射性肺損傷的實驗研究目的以直線加速器放射造模的C57BL/6雌性小鼠為研究對象,按照隨機對照、重復(fù)均衡的實驗研究原則,以小鼠肺系數(shù)、肺組織病理組織學(xué)變化、HE染色觀察肺泡炎、Masson染色觀察肺纖維化、肺組織中轉(zhuǎn)化生長因子β1 (transforming growth factor-β1, TGF-β1)及腫瘤壞死因子α (tumor necrosis factor-α, TNF-α)的表達作為研究的主要指標(biāo),觀察中藥分期治療對放射性肺損傷模型小鼠病理組織學(xué)及分子生物學(xué)水平上的影響,進一步明確其治療放射性肺損傷的療效并探討相關(guān)機制。方法將45只C57BL/6雌性小鼠隨機分為空白對照組15只、鹽水治療組15只和中藥治療組15只。空白對照組：佯裝照射+0.9%氯化鈉溶液100此灌胃/d；鹽水對照組：單次照射16Gy+0.9%氯化鈉溶液100-L灌胃/d；中藥治療組：單次照射16Gy+中藥100μL分期灌胃/d。其中中藥治療組1-3周予1號方進行灌胃,第4-6周灌胃2號方。每組分別于預(yù)計不同時間點(第2、4、6周)隨機處死小鼠,采集小鼠肺組織,稱重,計算肺系數(shù)的變化,取肺組織石蠟切片,光鏡下觀察小鼠的肺組織病理形態(tài)學(xué)變化,HE染色觀察肺泡炎情況,Masson染色觀察肺纖維化情況,肺組織石蠟切片使用免疫組化法染色觀察肺組織切片中TGF-β1、TNF-α表達情況,評價中藥復(fù)方分期治療RIPI的療效及相關(guān)作用機制。結(jié)果①肺系數(shù)：組間比較結(jié)果示：各組在2、4、6周時比較,P0.05,各組之間均有明顯差異。組內(nèi)比較結(jié)果示：中藥治療組、空白對照組各時間點肺系數(shù)比較,P0.05,均沒有顯著差異；鹽水對照組小鼠肺系數(shù)2周-6周比較,P0.05,有顯著性差異,其余各時間點比較均沒有顯著差異。②肺組織肉眼觀察：空白對照組小鼠肺組織表面均光滑,呈粉紅色,彈性良好,可完全鋪展開；鹽水對照組小鼠照射后第2周肺的顏色轉(zhuǎn)變?yōu)榘导t色,肺組織腫脹,第4周肺的顏色更暗,稍有彈性,硬度增加,第6周肺體積明顯縮小,表面呈灰白色,可見凹凸不平小結(jié)節(jié),質(zhì)地較硬,彈性明顯降低；中藥治療組第2周肺組織無明顯異常,第4周肺組織顏色加深,肺組織腫脹,第6周肺組織出現(xiàn)萎縮情況,程度相比鹽水對照組輕。③光鏡下病理組織學(xué)改變：空白對照組第2、4、6周偶或可見少量炎癥細胞滲出,肺泡結(jié)構(gòu)完整,肺泡腔內(nèi)無明顯滲出,各時間點未見成纖維細胞及膠原沉積,無肺纖維化形成。鹽水對照組第2周肺泡上皮細胞增生,肺泡間隔增寬,肺泡隔中可見充血、出血及較多巨噬細胞、中性粒細胞浸潤,第4周可見肺泡間隔增寬,肺泡間隔及部分肺泡腔內(nèi)浸潤的炎性細胞成份發(fā)生變化,少數(shù)可見膠原形成,充血、出血無明顯變化,第6周肺泡間隔進一步增寬,肺泡間隔被破壞,可見成纖維細胞聚集、膠原沉積,部分肺泡結(jié)構(gòu)消失,部分肺泡腔塌陷,肺纖維化形成。中藥治療組第2周炎性程度較輕,充血及中性粒細胞浸潤程度均輕于鹽水對照組。第4周充血、出血、滲出程度輕于鹽水對照組,并可見少量漿細胞及淋巴細胞。第6周可見中性粒細胞基本消失,主要以淋巴細胞等慢性炎癥細胞為主,可見少許成纖維細胞、膠原沉積,其病理變化過程與鹽水對照組相似,但其病變范圍及膠原沉積程度遠較鹽水對照組輕,肺泡間隔減小,含氣面積增加。病理結(jié)果提示模型小鼠肺泡炎主要表現(xiàn)在前4周,至第4周時已經(jīng)開始出現(xiàn)成纖維細胞聚集,少數(shù)可見膠原形成,這種動態(tài)的變化與本研究急慢性期的劃分幾乎吻合。④HE染色觀察肺泡炎的情況：空白對照組在第2、4、6周均未觀察到肺泡炎情況,而鹽水對照組和中藥治療組在第2、4、6周均觀察到肺泡炎,并且中藥治療組的肺泡炎主要集中于輕、中度肺泡炎,鹽水對照組的肺泡炎分級主要集中于中、重度肺泡炎。在肺泡炎評分方面,組間比較結(jié)果示：各組在2、4、6周時比較,P0.05,各組之間均有明顯差異。組內(nèi)比較結(jié)果示：鹽水對照組、中藥治療組4周-6周比較,P0.05,均沒有顯著差異,其余組內(nèi)比較均有顯著差異。⑤Masson染色觀察肺纖維化的情況：空白對照組在第2、4、6周均未觀察到肺纖維化情況,鹽水對照組和中藥治療組在第2、4、6周均觀察到肺纖維化。并且中藥治療組的肺纖維化主要集中于輕度、中度肺纖維化,鹽水對照組的肺纖維化分級主要集中于中度、重度肺纖維化,中藥治療組肺纖維化程度較鹽水對照組輕。在肺纖維化評分方面,組間比較結(jié)果示：各組在2、4、6周時比較,P0.05,各組之間均有明顯差異。組內(nèi)比較結(jié)果示：各組組內(nèi)比較,P0.05,均有顯著差異。中藥治療組和鹽水對照組在肺纖維化評分方面與空白對照組有顯著性差異,其中中藥對照組在肺纖維化評分方面明顯優(yōu)于鹽水對照組。⑥TGF-β1的免疫組化鏡下結(jié)果顯示：空白對照組在各時間點上肺組織支氣管粘膜上皮細胞、支氣管周圍炎性細胞有極少許棕黃色顆粒。鹽水對照組TGF-β1在照射后第2周即開始廣泛表達于肺組織細支氣管粘膜上皮細胞、肺泡上皮細胞、成纖維細胞、血管內(nèi)皮細胞,亦較多表達于肺間質(zhì)巨噬細胞及肺泡巨噬細胞、支氣管周圍炎性細胞等部位。其陽性細胞表達程度在第6周呈高峰。中藥治療組陽性細胞表達的部位與鹽水對照組相同。但其陽性細胞表達程度較鹽水對照組明顯減弱。總體來看,鹽水對照組、中藥治療組與空白對照組相比,其陽性細胞表達程度均顯著增強。⑦TGF-β1免疫組化的量化結(jié)果顯示：組間比較結(jié)果示：各組在2、4、6周時比較,P0.05,各組之間均有明顯差異。組內(nèi)比較結(jié)果示：各組組內(nèi)比較,P0.05,均有顯著差異。中藥治療組和鹽水對照組在TGF-β1表達方面與空白對照組有顯著性差異,其中中藥對照組在TGF-β1表達方面明顯優(yōu)于鹽水對照組。⑧TNF-a免疫組化的鏡下結(jié)果顯示：空白對照組2、4、6周均在其支氣管上皮中TNF-α呈不均一表達,在肺實質(zhì)中少量肺泡巨噬細胞呈陽性表達,而血管內(nèi)皮和肺泡上皮細胞均呈陰性。鹽水對照組在照射后2周即可見肺泡巨噬細胞和Ⅱ型肺泡上皮細胞呈陽性表達,肺實質(zhì)中有大量陽性巨噬細胞聚集在血管外膜周圍,照射后4周時整個肺實質(zhì)布滿大量陽性巨噬細胞,TNF-a廣泛表達于肺間質(zhì)巨噬細胞、支氣管粘膜上皮細胞、血管內(nèi)皮細胞、肺泡上皮細胞等部位,其陽性細胞表達程度第4周呈高峰。中藥治療組陽性細胞表達的部位與鹽水對照組相同。但其陽性細胞表達程度較鹽水對照組明顯減弱。總體來看,鹽水對照組、中藥治療組與空白對照組相比,其陽性細胞表達程度均顯著增強。⑨TNF-α免疫組化量化結(jié)果：組間比較結(jié)果示：各組在2、4、6周時比較,P0.05,各組之間均有明顯差異。組內(nèi)比較結(jié)果示：空白組組內(nèi)比較,P0.05,無顯著性差異；鹽水對照組和中藥治療組組內(nèi)比較,P0.05,均有顯著差異并且在第4周為高峰。中藥治療組和鹽水對照組在TNF-α表達方面與空白對照組有顯著性差異,其中中藥對照組在TNF-α表達方面明顯優(yōu)于鹽水對照組。結(jié)論①中藥分期治療可以減輕RIPI小鼠急性期和慢性期體重的下降程度,并減輕RIPI小鼠肺系數(shù)在急性期和慢性期上升的幅度。②無中藥干預(yù)的鹽水對照組小鼠肺泡炎主要表現(xiàn)在前4周,至第4周開始出現(xiàn)成纖維細胞聚集,少數(shù)可見膠原形成,至第6周可見大量膠原形成,這種動態(tài)的改變大致符合試驗前設(shè)定1。3周為急性炎癥期,4-6周為慢性纖維化期的預(yù)想。③中藥分期治療RIPI小鼠可以在病理組織層面上有效減輕急性期肺組織炎性程度(減輕肺組織充血、出血、水腫程度,減少炎性細胞的滲出),同時減輕慢性期肺組織肺纖維化的進展及程度(減少成纖維細胞的聚集,減輕膠原沉積、減輕肺泡結(jié)構(gòu)的破壞和肺泡間隔增寬)。④TGF-β1動態(tài)地參加了放射性肺損傷的全過程,在照射初期即開始升高,最初是短暫增高,但約3到4周即又明顯增加,在第6周達到高峰。其來源不是炎癥細胞,而是Ⅱ型肺泡上皮細胞和成纖維細胞；聯(lián)系病理變化,在早期,Ⅱ型肺泡上皮細胞明顯增生,3到4周后則開始是成纖維細胞增生更明顯。⑤中藥分期治療能在急性期及慢性期都明顯降低TGF-β1的表達,聯(lián)系相關(guān)病理變化,發(fā)現(xiàn)TGF-β1受抑制,不僅纖維化程度明顯減輕,炎癥反應(yīng)亦減輕,提示TGF-β1不僅參與了后期纖維化形成,也在早期一定程度上參與了炎性反應(yīng)。⑥TNF-α在照射后即開始表達,在第4周呈現(xiàn)高峰,同時小鼠病理提示第4周時肺泡炎最重,TNF-α的表達在一定范圍內(nèi)與肺泡炎呈正相關(guān)；中醫(yī)藥分期治療可以在早期明顯抑制TNF-α的表達以減輕炎癥程度。⑦中藥分期治療RIPI的作用機制可能與下調(diào)TGF-p1、TNF-a的表達相關(guān)。
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【學(xué)位授予單位】：成都中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R730.55

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