本文關(guān)鍵詞：載STEAP-1抗體前列腺癌靶向超聲微泡的制備及尋靶實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：目的:采用生物素-親和素法制備載前列腺跨膜上皮抗原-1(Six-transmembrane Epithelial Antigen of the Prostate,STEAP)抗體的新型靶向超聲微泡,檢測其結(jié)合率、穩(wěn)定性及體外尋靶能力;通過荷人前列腺癌移植瘤裸鼠超聲增強(qiáng)顯影來檢測載STEAP-1抗體靶向微泡的體內(nèi)尋靶能力。方法:(1)體外培養(yǎng)人前列腺癌細(xì)胞LNCa P和PC3,分別采用免疫熒光法定性檢測和Western blot法半定量檢測STEAP-1在兩種前列腺癌細(xì)胞中的表達(dá)情況;(2)采用生物素-親和素法將STEAP-1抗體與普通聲諾維微泡牢固結(jié)合,顯微鏡下觀察靶向微泡熒光情況,并通過流式檢測其結(jié)合率與穩(wěn)定性;(3)將所制備的靶向微泡與細(xì)胞爬片充分孵育反應(yīng),檢測其體外結(jié)合能力;(4)建立荷人前列腺癌移植瘤裸鼠模型,分別利用靶向微泡、普通聲諾維微泡對裸鼠進(jìn)行超聲增強(qiáng)顯影,實(shí)時(shí)觀察移植瘤的造影劑灌注情況、分布特征,并采用Contrast Dynamic定量分析軟件對時(shí)間-強(qiáng)度曲線(Time-intensity Curve,TIC)進(jìn)行分析,獲取峰值強(qiáng)度(Peak Intensity,PI)、達(dá)峰時(shí)間(Time to Peak,TTP)、曲線下面積(Area under the Curve,AUC)及平均渡越時(shí)間(Mean Transit Time,MTT)。結(jié)果:(1)熒光顯微鏡下觀察,視野內(nèi)兩種前列腺癌細(xì)胞表面均發(fā)出綠色熒光,即呈陽性表達(dá);Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,LNCa P細(xì)胞中STEAP-1呈相對高水平表達(dá)。(2)載STEAP-1抗體靶向微泡涂片后于熒光顯微鏡下觀察,微泡表面見呈現(xiàn)環(huán)狀綠色熒光,而普通對照組在鏡下視野丟失;流式分析檢測顯示,所制備的靶向微泡大小均一,結(jié)合率明顯高于同型對照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),震蕩后結(jié)合率略小于震蕩前,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。(3)靶向微泡與前列腺癌細(xì)胞孵育反應(yīng)后,出現(xiàn)微泡向細(xì)胞區(qū)域聚集的現(xiàn)象;PBS緩沖液沖洗后,靶向微泡于細(xì)胞周邊呈花環(huán)狀粘附,LNCa P細(xì)胞的粘附率高于PC3細(xì)胞,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);PBS緩沖液再次沖洗,兩種細(xì)胞的前、后粘附率比較均顯示差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。(4)分別經(jīng)尾靜脈注射靶向微泡、普通微泡,均見移植瘤組織回聲逐漸增強(qiáng),達(dá)一定程度后逐漸減弱,靶向微泡、普通微泡的PI、AUC、MTT有顯著差異(p0.05),前者相對高于后者,而TTP無差異(p0.05)。LNCa P移植瘤與PC3移植瘤相比,PI、AUC有差異(p0.05),前者相對高于后者,而TTP、MTT無差異(p0.05)。結(jié)論:(1)STEAP-1蛋白在人前列腺癌細(xì)胞LNCa P和PC3中均呈陽性表達(dá),且前列腺癌分化早期代表細(xì)胞株LNCa P細(xì)胞呈相對高水平表達(dá);(2)載STEAP-1抗體的新型靶向微泡可經(jīng)生物素-親和素法成功制備,STEAP-1抗體與普通微泡的結(jié)合率高且穩(wěn)定性較好;(3)載STEAP-1抗體靶向微泡體外尋靶時(shí)可與人前列腺癌細(xì)胞牢固結(jié)合,且LNCa P細(xì)胞較PC3細(xì)胞結(jié)合率高;(4)載STEAP-1抗體靶向微泡在荷人前列腺癌移植瘤裸鼠體內(nèi)的尋靶特異性較高且靶向性好,說明STEAP-1可作為超聲靶向造影的理想靶點(diǎn)之一,具備一定的基礎(chǔ)研究和臨床應(yīng)用價(jià)值。
【學(xué)位授予單位】：皖南醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.25;R445.1

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本文編號(hào)：1183607