本文關(guān)鍵詞：先天性中性粒細(xì)胞減少癥臨床特征、基因突變分析及乙肝病毒X蛋白對(duì)HEK 293細(xì)胞的獨(dú)特作用研究

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【摘要】：第一部分:先天性中性粒細(xì)胞缺陷病臨床表現(xiàn)特征及其基因突變分析目的:通過(guò)對(duì)臨床上發(fā)現(xiàn)的粒細(xì)胞降低的病人在排除了后天因素后,進(jìn)行對(duì)相關(guān)基因測(cè)序檢測(cè)相關(guān)基因來(lái)確診先天性中性粒細(xì)胞減少癥,從而進(jìn)行指導(dǎo)患者的治療。方法:利用血常規(guī),骨髓穿刺染色,ANCA,提取患兒及其父母的核酸,對(duì)ELANE基因進(jìn)行擴(kuò)增,測(cè)定PCR產(chǎn)物,對(duì)ELANE基因突變分析及TA克隆后突變分析后確定診斷結(jié)果:11例疑診患兒都有反復(fù)的感染(皮膚軟組織,肺部,空腔等),非感染性癥狀有貧血等。ELANE基因突變病人9例,CD4OL突變2例,其中5例新發(fā)突變?nèi)缦?P1 4 exon F c.367-2 ag拼接位點(diǎn)突變,可能RNA剪接會(huì)受到影響,未見(jiàn)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道;P1 5 exon F c.655GA p.Val219Ile已有相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道;P1父親5 exon F c.655GA p.Val219Ile已有相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道,該病是常染色體的顯性遺傳病,按照先前的報(bào)道其父親的突變的位點(diǎn)也為致病性的突變,但是實(shí)際上父親身體健康,各種指標(biāo)均正常,此處與以往的報(bào)道不符;P2 3 exon F c.366+10拼接位點(diǎn)插入片段AGAATCTCCAGGT未見(jiàn)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道;P3 4 exon F c.368 TA p.Leu123His未見(jiàn)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道;P4 5 exon F c.608GC p.Gly203Asp已有相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道;P5 1 exon F c.16ca SNP未有相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道;P6 2 exon F c.125 CT p.Pro42Leu已有相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道;P6 4 exon F g.855322 CA SNP已有相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道;P7 4 exon F c.568 GA p.Val190Met已有相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道;P8 5 exon F c.669 CA p.Cys223X已有相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道;P9 4 exon F c.597 CT p.FF SNP未有相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道;P9父親4 exon F c.597 CT p.FF未有相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道;P9 4 exon F c.164 GA p.Cys55Thr已有相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道;CD40L基因突變2例:P10 CD40L c.156+1 GT拼接位點(diǎn)純合突變已有相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道;P11 CD40L c.156+1 GT拼接位點(diǎn)純合突變已有相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)論:通過(guò)基因測(cè)序突變分析,發(fā)現(xiàn)了一些沒(méi)有被報(bào)道過(guò)的基因突變類(lèi)型,擴(kuò)充的基因突變庫(kù)的突變種類(lèi)�；蚬こ讨苽涞娜说闹亟M在中性粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)可以有效的預(yù)防患兒致死性嚴(yán)重性的感染的藥物。中性粒細(xì)胞的絕對(duì)數(shù)量在0.5×109以下或者有嚴(yán)重感染的患者建議使用G-CSF,可減少病死率,提高患兒的生存時(shí)間。第二部分乙肝病毒X蛋白對(duì)HEK 293細(xì)胞的獨(dú)特作用目的:探索乙肝病毒X蛋白對(duì)HEK 293細(xì)胞的獨(dú)特作用揭示其作用的相關(guān)機(jī)制。方法:使用流式相關(guān)技術(shù),檢測(cè)EGFP-N3(HEK 293)和EGFP-N3-HBx(HEK293-HBx)細(xì)胞的細(xì)胞增殖及各細(xì)胞分裂時(shí)期細(xì)胞特征;細(xì)胞轉(zhuǎn)染的相關(guān)技術(shù),展現(xiàn)乙肝病毒X蛋白(HBx)對(duì)HEK 293細(xì)胞的影響;用western blot檢測(cè)有關(guān)蛋白的表達(dá)情況;Real-time PCR測(cè)定轉(zhuǎn)染HBx基因細(xì)胞中m RNA的實(shí)時(shí)表達(dá)差別情況;組織免疫熒光,觀察細(xì)胞形態(tài)差異。結(jié)果:HBx通過(guò)使HEK 293細(xì)胞之間的間隙融合的方式增強(qiáng)HEK293細(xì)胞之間的彼此作用;HBx通過(guò)增強(qiáng)表達(dá)Src蛋白超家族增強(qiáng)E鈣粘蛋白的表達(dá),轉(zhuǎn)染了HBx的HEK 293細(xì)胞中β-連環(huán)蛋白明顯增加;HBx通過(guò)加強(qiáng)細(xì)胞周期蛋白(CDK4)的表達(dá)使G2/S期的HEK 293細(xì)胞的數(shù)量增多;HBx通過(guò)提高Bcl2基因的表達(dá)量促進(jìn)細(xì)胞增殖,抑制或阻止細(xì)胞的凋亡。結(jié)論:HBx具有促進(jìn)細(xì)胞的增殖和分化,抑制細(xì)胞的凋亡,HBx基因在HEK 293細(xì)胞中的功能具有多樣性。
【關(guān)鍵詞】：先天性中性粒細(xì)胞減少癥 彈性蛋白酶 SCN ELANE 乙肝病毒X蛋白(HBx) HBV基因X HEK 293細(xì)胞 泛素連接蛋白酶復(fù)合體
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R725
【目錄】：

• 英漢縮略語(yǔ)名詞對(duì)照4-6
• 中文摘要6-9
• ABSTRACT9-14
• 第一部分 先天性中性粒細(xì)胞缺陷病的臨床表現(xiàn)特征及其基因突變分析14-30
• 前言14-16
• 1 材料和方法16-21
• 2 結(jié)果21-24
• 3 討論24-25
• 4 結(jié)論25-26
• 參考文獻(xiàn)26-30
• 第二部分 乙肝病毒X蛋白對(duì)HEK 293 細(xì)胞獨(dú)特作用的研究30-43
• 前言30-31
• 1 材料和方法31-33
• 2 結(jié)果33-39
• 3 討論39-40
• 參考文獻(xiàn)40-43
• 全文總結(jié)43-44
• 文獻(xiàn)綜述44-51
• 參考文獻(xiàn)48-51
• 致謝51-52
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表文章及參加學(xué)術(shù)活動(dòng)52

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 Juergen Beck;Michael Nassal;;Hepatitis B virus replication[J];World Journal of Gastroenterology;2007年01期

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本文編號(hào)：684977