本文關(guān)鍵詞：miRNA-221對(duì)氣道平滑肌細(xì)胞外基質(zhì)的作用及機(jī)制研究

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【摘要】：目的探討生長因子PDGF-BB及EGF干預(yù)大鼠氣道平滑肌細(xì)胞(airway smooth muscle cells, ASMCs)后不同microRNA (miR)及細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix, ECM)表達(dá)量的變化。方法將ASMCs分為對(duì)照組、PDGF-BB組和EGF組,利用PDGF-BB、EGF刺激大鼠ASMCs,采用實(shí)時(shí)定量PCR (Real-time quantitative PCR, RT-qPCR)技術(shù)檢測(cè)ASMCs中miR的變化。同時(shí)用Western Blot檢測(cè)細(xì)胞外基質(zhì)I型膠原蛋白(collagen Ⅰ )、 Ⅲ型膠原蛋白(collagen Ⅲ)的表達(dá)水平。結(jié)果PDGF-BB刺激ASMCs后,與對(duì)照組相比,miR-221相對(duì)表達(dá)量增加(P 0.05); EGF刺激ASMCs后,與對(duì)照組相比,miR-221、miR-192相對(duì)表達(dá)量增加(P0.05)。 PDGF-BB、EGF刺激大鼠ASMCs后與對(duì)照組相比,I型膠原和Ⅲ型膠原蛋白的表達(dá)量均較對(duì)照組升高(P0.05)。結(jié)論P(yáng)DGF-BB、EGF干預(yù)大鼠氣道平滑肌細(xì)胞后,不同microRNA的表達(dá)量有不同的變化。PDGF-BB、EGF能增加大鼠氣道平滑肌細(xì)胞ECM的表達(dá)。目的探討miRNA-221對(duì)氣道平滑肌細(xì)胞外基質(zhì)的作用及機(jī)制方法利用miR-221 mimics轉(zhuǎn)染大鼠氣道平滑肌細(xì)胞,用RT-qPCR方法驗(yàn)證miR-221的轉(zhuǎn)染效率。采用Western Blot技術(shù)檢測(cè)I型膠原蛋白和Ⅲ型膠原蛋白的表達(dá)水平。應(yīng)用基因芯片技術(shù)檢測(cè)miRNA-221刺激ASMCs細(xì)胞外基質(zhì)沉積過程中信號(hào)通路的變化。采用Western Blot技術(shù)檢測(cè)磷酸化AKT及總AKT蛋白表達(dá)水平的變化,及使用PI3K-AKT通路抑制劑LY294002干預(yù)后,觀察磷酸化AKT、總AKT、COL1A2、COL3A1的表達(dá)水平的變化。結(jié)果轉(zhuǎn)染miR-221后,miR-221的表達(dá)水平較過表達(dá)對(duì)照組明顯升高。miR-221過表達(dá)后,COL1A2、COL3A1的表達(dá)水平也升高。生物信息學(xué)分析及Western Blot結(jié)果證實(shí)PI3K/AKT通路參與miRNA-221促進(jìn)ASMCs細(xì)胞外基質(zhì)表達(dá)的過程。PI3K-AKT通路的抑制劑LY294002可以逆轉(zhuǎn)miR-221引起的氣道平滑肌細(xì)胞的COL1A2、COL3A1的表達(dá)量的增加。結(jié)論miR-221通過活化PI3K/AKT信號(hào)通路來促進(jìn)氣道平滑肌細(xì)胞外基質(zhì)的表達(dá)。
【關(guān)鍵詞】：大鼠 氣道平滑肌細(xì)胞 microRNA 細(xì)胞外基質(zhì) miR-221 氣道平滑肌細(xì)胞 細(xì)胞外基質(zhì) PI3K/AKT
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R725.6
【目錄】：

• 中英文縮略詞對(duì)照表5-7
• 第一部分 不同生長因子干預(yù)大鼠氣道平滑肌細(xì)胞后microRNA及細(xì)胞外基質(zhì)的變化7-30
• 中文摘要8-9
• 英文摘要9-10
• 前言10-13
• 材料與方法13-24
• 結(jié)果24-27
• 討論27-30
• 第二部分 miR-221對(duì)氣道平滑肌細(xì)胞外基質(zhì)的作用及化制研究30-47
• 中文摘要31-32
• 英文摘要32-33
• 前言33-34
• 材料與方法34-40
• 結(jié)果40-44
• 討論44-47
• 小結(jié)47-48
• 參考文獻(xiàn)48-55
• 綜述55-68
• 參考文獻(xiàn)63-68
• 攻讀學(xué)位期間科研成果及獲得獎(jiǎng)勵(lì)小結(jié)68-70
• 致謝70

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