【摘要】：急性髓系白血病病例(acute myeloid leukemia, AML)占兒童急性白血病的25%,但其死亡病例卻占兒童急性白血病死亡病例的50%以上。目前認(rèn)為導(dǎo)致此疾病治療失敗的主要原因是AML對于以阿糖胞苷(1-β-D-arabinofuranosylcytosine, ara-C)為骨架的化療產(chǎn)生了抗藥性。因此,急需新的治療方案來提高兒童AML的治愈率。 組蛋白去乙�；敢种苿�(histone deacetylase inhibitor, HDACI)是近十幾年來開發(fā)的一類有很好潛能的抗腫瘤新藥,包括I類HDAC特異性抑制劑(如MS-275和MGCD0103)和HDAC廣譜抑制劑(如LBH-589和PXD101)。體內(nèi)外研究表明HDACI能促進(jìn)癌細(xì)胞分化,阻斷細(xì)胞周期和誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡,從而對多種腫瘤產(chǎn)生殺傷作用,但對正常細(xì)胞卻沒有或只有很少的影響。目前大部分HDACI已處于臨床試驗階段。然而,此類藥物作為單藥治療癌癥的臨床活性并不強(qiáng)。因此,為HDACI設(shè)計具有科學(xué)依據(jù)的合理的聯(lián)合用藥方案勢在必行。 在之前的研究中,我們通過對4個兒童AML細(xì)胞系和9個原位AML臨床診斷樣本的細(xì)胞毒性分析,發(fā)現(xiàn)在所有檢測的樣本中特別是含t(8；21)染色體異位的,HDACI丙戊酸(valproic acid, VPA)聯(lián)合阿糖胞苷產(chǎn)生很強(qiáng)的協(xié)同抗白血病活性。機(jī)理研究顯示,這兩個藥物能協(xié)作誘導(dǎo)DNA雙鏈斷裂(double-strand breaks,DSB),并且VPA還能通過誘導(dǎo)Bim蛋白增強(qiáng)兩種藥物的抗白血病活性。這表明HDAC是非常有潛力的兒童AML的治療靶點。HDAC家族共有18個成員,各個成員功能也不盡相同。因此,找到與阿糖胞苷活性緊密相關(guān)的HDAC家族成員,并據(jù)此選出最優(yōu)的HDACI與阿糖胞苷聯(lián)用治療AML患兒以達(dá)到最大療效具有重要意義。 首先,我們用免疫印跡法檢測HDAC1-11蛋白在4種兒童AML細(xì)胞系(THP-1、Kasumi-、MV4-11和CMS)中的表達(dá)情況,結(jié)果顯示HDAC5和11只有微量表達(dá)或者未檢測到表達(dá),我們推測這兩種HDAC應(yīng)與阿糖胞苷敏感性無關(guān)。通過應(yīng)用不同的HDAC抑制劑(廣譜抑制劑SAHA、抑制Ⅰ類Ⅱa類HDAC的VPA和Ⅰ類HDAC特異性抑制劑MS-275)處理THP-1細(xì)胞,用免疫沉淀方法獲得相應(yīng)的HDAC蛋白并檢測酶活力,我們發(fā)現(xiàn)特異性和廣譜HDACI均能增強(qiáng)阿糖胞苷誘導(dǎo)的兒童AML細(xì)胞凋亡,說明I類和II類的HDAC均可能發(fā)揮作用。shRNA慢病毒感染THP-1細(xì)胞并沉默不同的HDAC基因的實驗結(jié)果表明沉默HDAC1或HDAC6顯著增強(qiáng)阿糖胞苷誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡(近2倍,p0.05),并分別伴隨2.3和1.4倍的Bim表達(dá)增加。沉默HDAC2導(dǎo)致阿糖胞苷誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡減少了約30%。但是沉默HDAC3和HDAC4對阿糖胞苷誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡沒有影響。在臨床可達(dá)到的劑量下,同時抑制HDAC1和HDAC6的抑制劑有最強(qiáng)的抗白血病活性,并且能顯著增強(qiáng)阿糖胞苷誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。 用基因芯片篩查HDAC1和HDAC6分別沉默后基因表達(dá)的變化,發(fā)現(xiàn)HDAC1沉默模型中胰島素樣生長因子1(insulin-like growth factor 1, IGF-1)轉(zhuǎn)錄水平下降。據(jù)文獻(xiàn)報道,IGF-1能下調(diào)Bim的表達(dá),因此我們推測HDAC1活性抑制后通過下調(diào)IGF-1的表達(dá)使Bim表達(dá)水平升高進(jìn)而促進(jìn)阿糖胞苷的活性；在HDAC6沉默模型中,HDAC6表達(dá)水平的下降伴隨著胞苷脫氨酶表達(dá)的下降,胞苷脫氨酶能使阿糖胞苷失活,因此抑制HDAC6導(dǎo)致胞苷脫氨酶表達(dá)下降,進(jìn)而增強(qiáng)阿糖胞苷的活性。 總之,我們的結(jié)果進(jìn)一步證明了HDAC是潛在的兒童AML藥物治療靶點,并且鑒別出HDAC1和HDAC6是最相關(guān)的藥物靶點。因此,用廣譜的HDAC抑制劑治療AML患兒可能比特異性HDAC抑制劑更有效�；谝陨涎芯拷Y(jié)果,我們強(qiáng)烈建議進(jìn)行廣譜HDAC抑制劑(如LBH-589和PXD101)和阿糖胞苷聯(lián)用治療兒童AML的臨床實驗以提高其治愈率。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R733.71

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 陳寶安;黃治虎;王飛;徐燕麗;歐陽建;李建勇;翟勇平;孫雪梅;陸勤;王建寧;李東;廖輝;余小金;;南京市所屬城區(qū)2003～2007年白血病流行狀況調(diào)查[J];江蘇醫(yī)藥;2011年01期

，

本文編號：2635896