本文關(guān)鍵詞：瘦素對新生期大鼠反復(fù)長程驚厥性腦損傷的干預(yù)作用及機(jī)制探討

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【摘要】：目的:探討瘦素長程干預(yù)對大鼠新生期反復(fù)長程驚厥腦損傷的干預(yù)作用和分子機(jī)制。方法:日齡6天(P6)的Sprague-Dawley(SD)大鼠40只,隨機(jī)(隨機(jī)數(shù)字表法)分成四組,每組10只,即:空白對照組(Control組)、單純瘦素組(Leptin組)、單純驚厥組(RS組)和驚厥加瘦素組(RS+Leptin組)。RS組和RS+Leptin組大鼠使用三氟乙醚反復(fù)誘導(dǎo)驚厥發(fā)作,使驚厥持續(xù)30min,每日一次,連續(xù)7天(P6-P12),建立新生期大鼠三氟乙醚驚厥模型。于P13時,Leptin組和RS+Leptin組開始瘦素腹腔注射(2mg/kg),連續(xù)10天。于P23和P30進(jìn)行神經(jīng)行為學(xué)測試(負(fù)向趨地反射、前肢懸吊反射、懸崖回避反射、平面反正反射及曠場實驗);P27-P33進(jìn)行Morris水迷宮逃避潛伏期和探索實驗;定時檢測大鼠體重變化。P34時,分離大腦皮層及海馬,采用免疫印記(Western blot)技術(shù)檢測:鋅離子通道蛋白:ZnT1、ZIP7;質(zhì)膜損傷標(biāo)記蛋白:cPLA2;自噬信號通路相關(guān)蛋白:Beclin-1、Bcl-2、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Cathepsin E;記憶分子:CaMKⅡα和CaMKⅡβ的表達(dá)情況。采用Neo-Timm’s法檢測海馬苔蘚纖維發(fā)芽情況。結(jié)果:1、體重變化:四組大鼠的體重總體差異有統(tǒng)計學(xué)意義[F(27,360)=3.099,P0.05],進(jìn)一步比較發(fā)現(xiàn):P12-P33期間各時間點,RS組與RS+Leptin組體重均較Control組大鼠明顯下降(P0.05),Leptin組與Control組體重差異無統(tǒng)計學(xué)意義。2、神經(jīng)行為學(xué)評分:(1)負(fù)向趨地反射:P23和P30時,四組評分差異均有統(tǒng)計學(xué)意義[FP23(3,16)=168.1,P0.05;FP30(3,16)=24.84,P0.05],進(jìn)一步兩兩比較發(fā)現(xiàn):RS組均較Control組時間明顯延長(P0.05),RS+Leptin組與RS組相比均明顯縮短(P0.05),趨于正常;(2)前肢懸吊反射:P23和P30時,四組評分差異均有統(tǒng)計學(xué)意義[FP23(3,16)=37.15,P0.05;FP30(3,16)=4.68,P0.05],進(jìn)一步兩兩比較發(fā)現(xiàn):RS組較Control組時間均明顯縮短(P0.05),P23時,RS+Leptin組較RS組時間均明顯延長(p0.05),趨于正常;(3)懸崖回避反射:p23和p30時,四組評分差異有統(tǒng)計學(xué)意義[fp23(3,16)=136.2,p0.05;fp30(3,16)=12.47,p0.05],進(jìn)一步兩兩比較發(fā)現(xiàn):rs組較control組時間均明顯延長(p0.05),rs+leptin組較rs組時間均明顯縮短(p0.05),與control組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義,趨于正常;(4)平面反正反射:p23和p30時,四組評分差異均有統(tǒng)計學(xué)意義[fp23(3,16)=12.63,p0.05;fp30(3,16)=16.04,p0.05],進(jìn)一步兩兩比較發(fā)現(xiàn):rs組較control組時間明顯延長(p0.05),rs+leptin組較rs組時間均明顯縮短(p0.05),與control組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義,趨于正常。3、曠場實驗:(1)延遲時間:p23和p30時,四組評分差異均有統(tǒng)計學(xué)意義[fp23(3,16)=15.50,p0.05;fp30(3,16)=15.50,p0.05],進(jìn)一步兩兩比較發(fā)現(xiàn):rs組較control組時間明顯延長(p0.05),rs+leptin組較rs組時間明顯縮短(p0.05),與control組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義,趨于正常;(2)開場得分:p23和p30時四組得分差異均有統(tǒng)計學(xué)意義[fp23(3,16)=182.10,p0.05;fp30(3,16)=8.80,p0.05],進(jìn)一步兩兩比較發(fā)現(xiàn):rs組較control組得分明顯降低(p0.05),rs+leptin組較rs組得分明顯增加(p0.05),趨于正常。4、morris水迷宮:(1)定位航行:two-wayanova分析顯示:四組逃避潛伏期總體差異具有統(tǒng)計學(xué)意義[f(12,48)=17.52,p0.05];進(jìn)一步兩兩比較發(fā)現(xiàn):試驗第2-4天時,rs組較control組逃避潛伏期明顯延長(p0.05),rs+leptin組較rs組潛伏期明顯縮短(p0.05),與control組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義,趨于正常;(2)空間探索試驗:四組穿平臺次數(shù)差異具有統(tǒng)計學(xué)意義[f(3,16)=17.71,p0.05],進(jìn)一步兩兩比較發(fā)現(xiàn):rs組與control組相比穿平臺次數(shù)明顯減少(p0.05),rs+leptin組與rs組相比穿平臺次數(shù)明顯增加(p0.05),與control組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義,趨于正常。5、neo-timm’s染色:四組海馬ca3區(qū)和齒狀回苔蘚纖維發(fā)芽半定量評分差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義[fca3(3,16)=21.69,p0.05;f齒狀回(3,16)=84.51,p0.05],進(jìn)一步兩兩比較發(fā)現(xiàn):rs組較control組發(fā)芽明顯增加(p0.05),rs+leptin組較rs組發(fā)芽明顯減少(p0.05),與control組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義,趨于正常。6、westernbolt結(jié)果:(1)鋅離子通道蛋白:四組大鼠大腦皮層和海馬鋅離子通道蛋白表達(dá)差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義[znt1:f皮層(3,16)=24.78,p0.05;f海馬(3,16)=84.38,P0.05;ZIP7:F皮層(3,16)=21.17,P0.05;F海馬(3,16)=14.48,P0.05],進(jìn)一步兩兩比較發(fā)現(xiàn):RS組較Control組表達(dá)均明顯增加(P0.05),RS+Leptin組較RS組表達(dá)明顯減少(P0.05),與Control組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義,趨于正常;(2)質(zhì)膜損傷標(biāo)記蛋白cPLA2:四組大鼠大腦皮層和海馬表達(dá)差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義[F皮層(3,16)=62.23,P0.05;F海馬(3,16)=35.71,P0.05],進(jìn)一步兩兩比較發(fā)現(xiàn):RS組較Control組表達(dá)均明顯增加(P0.05),RS+Leptin組較RS組表達(dá)明顯減少(P0.05),與Control組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義,趨于正常;(3)自噬信號通路相關(guān)蛋白:四組大鼠大腦皮層和海馬自噬信號通路相關(guān)蛋白表達(dá)差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義[Beclin-1/Bcl-2:F皮層(3,16)=22.26,P0.05,F海馬(3,16)=7.202,P0.05;LC3Ⅱ/LC3Ⅰ:F皮層(3,16)=16.37,P0.05,F海馬(3,16)=10.37,P0.05;Cathepsin E:F皮層(3,16)=34.08,P0.05,F海馬(3,16)=186.5,P0.05],進(jìn)一步兩兩比較發(fā)現(xiàn):RS組較Control組均明顯升高(P0.05),RS+Leptin組較RS組明顯降低(P0.05),趨于正常;(4)記憶分子:CaMKⅡα:四組大鼠大腦皮層和海馬表達(dá)差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義[F皮層(3,16)=284.7,P0.05;F海馬(3,16)=144.0,P0.05],RS組較Control組均明顯降低(P0.05),進(jìn)一步兩兩比較發(fā)現(xiàn):RS+Leptin組較RS組明顯升高(P0.05),趨于正常;CaMKⅡβ:四組大鼠大腦皮層和海馬表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義[F皮層(3,16)=0.7919,P0.05;F海馬(3,16)=0.8002,P0.05]。結(jié)論:1.瘦素長程干預(yù)能顯著減輕新生期反復(fù)長程驚厥所致神經(jīng)行為、認(rèn)知損傷及海馬苔蘚纖維異常發(fā)芽;2.新生期反復(fù)長程驚厥能顯著上調(diào)遠(yuǎn)期皮層和海馬鋅離子轉(zhuǎn)運蛋白、質(zhì)膜損傷標(biāo)記蛋白和自噬通路相關(guān)蛋白,下調(diào)記憶相關(guān)分子表達(dá);瘦素能使上述通路恢復(fù)正常;3.本研究表明瘦素可能通過Zn Ts/cPLA2/Atg通路調(diào)節(jié)記憶分子CaMKⅡα表達(dá),從而實現(xiàn)對新生期驚厥性腦損傷的保護(hù)作用。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R722.1

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本文編號：1206313