發(fā)布時間：2017-09-30 18:07

  本文關(guān)鍵詞：醌類化合物1,2-NQ和PQ誘導(dǎo)肺組織損傷作用的研究

  更多相關(guān)文章： 1 2-萘醌 9 10-菲醌 損傷 肺上皮細(xì)胞 巨噬細(xì)胞

【摘要】：在城市中,柴油機(jī)排放顆粒物(DEP)是大氣污染的重要組成成分,1,2-NQ和PQ是存在于DEP中的主要醌類化合物,能導(dǎo)致多種呼吸道疾病的加重、惡化。然而,它們對肺組織損傷的作用尚不清楚。本次實(shí)驗(yàn)通過氣管內(nèi)灌注1,2-NQ和PQ,研究1,2-NQ和PQ對肺組織病理組織學(xué)及相關(guān)血液學(xué)變化的影響。通過檢測細(xì)胞凋亡和壞死,研究1,2-NQ和PQ對細(xì)胞損傷的影響。采用qt-PCR的方法,研究1,2-NQ和PQ對炎癥細(xì)胞因子相對表達(dá)量的影響。試驗(yàn)一：選用4-6周齡20g左右的雄性ICR小鼠用于實(shí)驗(yàn),A549細(xì)胞和dU937細(xì)胞用于體外實(shí)驗(yàn)。將動物隨機(jī)分成三個組,異氟烷麻醉,實(shí)驗(yàn)組分別將1,2-NQ和PQ灌注到小鼠的氣管內(nèi),對照組使用PBS溶液,各組在24h、48h和72h取三只小鼠采集血液和肺臟組織樣本,檢測相關(guān)血液學(xué)變化,肺組織病理學(xué)觀察肺損傷。試驗(yàn)二：A549細(xì)胞和dU937細(xì)胞分別接種于24孔板內(nèi),用1,2-NQ和PQ染毒處理,隨后檢測細(xì)胞凋亡和壞死。試驗(yàn)三：A549細(xì)胞和U937細(xì)胞分別接種于6孔板內(nèi),然后用10ng/mL的LPS預(yù)處理3h后,1,2-NQ和PQ染毒處理,收集細(xì)胞樣品提取RNA,熒光定量PCR方法檢測TNF-α、IL-1β和MIP-1α基因的相對表達(dá)量。結(jié)果如下：1.肺組織病理學(xué)檢測顯示：對照組小鼠肺組織結(jié)構(gòu)完整,未見肺組織損傷。與對照組相比,1,2-NQ組可見肺間質(zhì)內(nèi)毛細(xì)血管擴(kuò)張充血,伴有炎性細(xì)胞浸潤,部分肺泡壁腫脹。PQ組小鼠肺間質(zhì)內(nèi)血管充血,炎性細(xì)胞聚集,肺泡壁明顯增厚,部分肺泡壁破裂,肺泡相互融合。血液學(xué)檢測結(jié)果顯示：與對照組相比,1,2-NQ組白細(xì)胞數(shù)量顯著升高(P0.05),淋巴細(xì)胞數(shù)量顯著升高(P0.05),嗜中性粒細(xì)胞數(shù)量顯著升高(P0.05)；與對照組相比,PQ組血液學(xué)檢測結(jié)果無顯著性變化(P0.05)。2.1,2-NQ染毒處理A549細(xì)胞,細(xì)胞壞死率呈時間-劑量依賴性顯著升高(P0.01),細(xì)胞凋亡率顯著升高(P0.05或P0.01)。PQ染毒處理A549細(xì)胞,細(xì)胞壞死率呈時間-劑量依賴性顯著升高(P0.01),細(xì)胞凋亡率在24h顯著升高(P0.01)。1,2-NQ染毒處理dU937細(xì)胞,與對照組相比,細(xì)胞凋亡率和細(xì)胞壞死率均呈時間-劑量依賴性升高(P0.05或P0.01)。PQ染毒處理dU937細(xì)胞,與對照組相比,細(xì)胞凋亡率和壞死率均呈時間-劑量依賴性顯著升高(P0.05或P0.01)。3.1,2-NQ染毒處理A549細(xì)胞,與對照組相比,TNF-α、IL-1β和MIP-1α的基因相對表達(dá)量均未見顯著性變化(P0.05),在LPS預(yù)處理后,TNF-α和IL-1p的基因相對表達(dá)量呈劑量依賴性升高(P0.01)。PQ染毒處理A549細(xì)胞,與對照組相比,TNF-α、IL-1β和MIP-1α的基因相對表達(dá)量均未見顯著性變化(P0.05),在LPS預(yù)處理后,TNF-a、IL-1β和MIP-1α的基因相對表達(dá)量均顯著升高(P0.01)。1,2-NQ染毒處理dU937細(xì)胞,與對照組相比,IL-1p和MIP-1α的基因相對表達(dá)量均顯著降低(P0.05或P0.01),在LPS預(yù)處理后,IL-1p和MIP-1α的基因相對表達(dá)量呈劑量依賴性降低(P0.05或P0.01)。PQ染毒處理dU937細(xì)胞,與對照組相比,TNF-α、IL-1β和MIP-1α的基因相對表達(dá)量均未見顯著性變化(P0.05),在LPS預(yù)處理后,低劑量PQ誘導(dǎo)TNF-α、IL-1β和MIP-1α的基因相對表達(dá)量顯著升高(P0.01),而隨著PQ濃度的增加,TNF-α、IL-1β和MIP-1α的基因相對表達(dá)量呈劑量依賴性降低。結(jié)論：1,2-NQ和PQ能導(dǎo)致肺組織損傷,誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡和壞死,調(diào)節(jié)炎癥細(xì)胞因子的合成和釋放,加重肺組織損傷。
【關(guān)鍵詞】：1 2-萘醌 9 10-菲醌 損傷 肺上皮細(xì)胞 巨噬細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S852.3
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-11
• 符號說明11-12
• 第一部分 文獻(xiàn)綜述12-29
• 第一章 大氣中的醌類化合物12-15
• 1 醌類化合物的形成12-13
• 1.1 醌類化合物的來源12-13
• 1.2 醌類化合物的含量13
• 2 醌類化合物的結(jié)構(gòu)及性質(zhì)13-15
• 2.1 醌類化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)13-14
• 2.2 醌類化合物的理化性質(zhì)14-15
• 第二章 醌類化合物的生物學(xué)作用研究15-23
• 1 醌類化合物的電子轉(zhuǎn)移作用15
• 2 醌類化合物的生理毒性作用15-17
• 2.1 醌類化合物的生理毒性15-16
• 2.2 氧化性損傷16-17
• 3 醌類化合物的致病性研究17-19
• 3.1 DEP的致病性17-18
• 3.2 NQ的致病性18
• 3.3 PQ的致病性18-19
• 4 醌類化合物對細(xì)胞死亡影響的研究19-21
• 4.1 細(xì)胞死亡19
• 4.2 肺上皮細(xì)胞19-20
• 4.3 巨噬細(xì)胞20-21
• 4.4 醌類化合物對細(xì)胞死亡影響的研究21
• 5 醌類化合物對炎癥細(xì)胞因子表達(dá)影響的研究21-23
• 5.1 炎癥細(xì)胞因子21-22
• 5.2 醌類化合物對炎性細(xì)胞因子表達(dá)的影響22-23
• 參考文獻(xiàn)23-29
• 第二部分 實(shí)驗(yàn)研究29-74
• 試驗(yàn)一 1,2-NQ和PQ誘導(dǎo)肺組織損傷及相關(guān)血液學(xué)變化29-44
• 1 實(shí)驗(yàn)材料29-30
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動物29
• 1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑29
• 1.3 主要儀器和設(shè)備29-30
• 2 實(shí)驗(yàn)方法30-32
• 2.1 實(shí)驗(yàn)試劑的配制30-31
• 2.2 實(shí)驗(yàn)動物分組31
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法和樣品采集31
• 2.4 小鼠肺臟組織石蠟切片的制作31-32
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果32-39
• 3.1 1,2-NQ和PQ氣管灌注,肺組織病理學(xué)檢測結(jié)果32-36
• 3.2 1,2-NQ和PQ氣管灌注對血液指標(biāo)的影響36-39
• 4 討論39-42
• 參考文獻(xiàn)42-44
• 試驗(yàn)二 1,2-NQ和PQ對肺上皮細(xì)胞和巨噬細(xì)胞凋亡和壞死影響的研究44-57
• 1 實(shí)驗(yàn)材料44-45
• 1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞44
• 1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑44
• 1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器44
• 1.4 試劑的配制44-45
• 2 實(shí)驗(yàn)方法45-46
• 2.1 A549細(xì)胞的培養(yǎng)及分組45-46
• 2.2 dU937細(xì)胞的培養(yǎng)及分組46
• 3 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理46
• 4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果46-53
• 4.1 1,2-NQ和PQ染毒對A549細(xì)胞凋亡和壞死的影響46-49
• 4.2 1,2-NQ和PQ染毒對dU937細(xì)胞凋亡和壞死的影響49-53
• 5 討論53-56
• 5.1 1,2-NQ和PQ染毒對A549細(xì)胞凋亡和壞死的影響53-54
• 5.2 1,2-NQ和PQ染毒對dU937細(xì)胞凋亡和壞死的影響54-56
• 參考文獻(xiàn)56-57
• 試驗(yàn)三 1,2-NQ和PQ對肺上皮細(xì)胞和巨噬細(xì)胞炎癥細(xì)胞因子表達(dá)的影響57-74
• 1 實(shí)驗(yàn)材料57-58
• 1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞57
• 1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑57
• 1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器57-58
• 2 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備58
• 2.1 50×TAE緩沖液配制58
• 2.2 1%瓊脂糖凝膠的配制58
• 3 實(shí)驗(yàn)方法58-61
• 3.1 樣本采集58-59
• 3.2 引物合成59
• 3.3 RNA提取59-60
• 3.4 瓊脂糖凝膠電泳檢測mRNA完整性60
• 3.5 cDNA合成60-61
• 3.6 熒光定量PCR方法檢測相關(guān)基因的mRNA表達(dá)61
• 3.7 數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計分析61
• 4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果61-70
• 4.1 總RNA提取結(jié)果61-62
• 4.2 1,2-NQ誘導(dǎo)A549細(xì)胞炎癥細(xì)胞因子基因的相對表達(dá)量62-64
• 4.3 PQ誘導(dǎo)A549細(xì)胞炎癥細(xì)胞因子基因的相對表達(dá)量64-66
• 4.4 1,2-NQ誘導(dǎo)dU937細(xì)胞炎癥細(xì)胞因子的基因相對表達(dá)量66-68
• 4.5 PQ誘導(dǎo)dU937細(xì)胞炎癥細(xì)胞因子的基因相對表達(dá)量68-70
• 5 討論70-72
• 5.1 1,2-NQ誘導(dǎo)A549細(xì)胞炎癥細(xì)胞因子的基因相對表達(dá)量70
• 5.2 PQ誘導(dǎo)A549細(xì)胞炎癥細(xì)胞因子的基因相對表達(dá)量70-71
• 5.3 1,2-NQ誘導(dǎo)dU937細(xì)胞炎癥細(xì)胞因子的基因相對表達(dá)量71
• 5.4 PQ誘導(dǎo)dU937細(xì)胞炎癥細(xì)胞因子的基因相對表達(dá)量71-72
• 參考文獻(xiàn)72-74
• 全文結(jié)論74-75
• 致謝75-76

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

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本文編號：949633