本文關(guān)鍵詞：DMSO和EG中添加BSA對羔羊睪丸組織冷凍保存效果的影響

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【摘要】：睪丸組織的成功冷凍保存不僅為瀕危野生動物和優(yōu)良家畜的生殖能力保存提供了有效途徑,也為經(jīng)過放療或化療治愈后的未成年男性患者生殖能力恢復(fù)提供了新的選擇。在睪丸組織冷凍保存過程中,冷凍保護劑為防止睪丸組織的冷凍損傷發(fā)揮了重要作用。目前用于睪丸組織冷凍保存的保護劑大部分屬于滲透性冷凍保護劑,主要通過滲透到細胞內(nèi)減少冰晶的形成來起到保護細胞的作用。但是,滲透性冷凍保護劑大多具有一定的毒性,會破壞細胞通路,導(dǎo)致細胞內(nèi)的酶變性,損傷DNA結(jié)構(gòu)等。為了探討在滲透性冷凍保護劑(二甲基亞砜和乙二醇)中添加牛血清白蛋白(BSA)對凍后羔羊睪丸組織活性的影響,本試驗以10%的二甲基亞砜(DMSO)、10%的乙二醇(EG)、10%DMSO+5 g/L BSA和10%EG+5 g/L BSA作為冷凍保護劑,研究不同冷凍保護劑對凍后羔羊睪丸組織形態(tài)、激素釋放量、標志性酶活性、抗氧化能力和關(guān)鍵基因相對表達量的影響。本研究獲得的主要結(jié)果如下:1.10%DMSO+5 g/L BSA冷凍后的睪丸組織細胞活率、曲細精管完整率以及睪酮、抑制素的釋放量分別為79.97%、88.08%、137.73 nmol/L和1507.92 ng/L,均顯著高于其他冷凍保護劑(P0.05),但顯著低于新鮮組織(P0.05);10%EG+5 g/L BSA與10%DMSO冷凍后的睪丸組織細胞活率、曲細精管完整率以及睪酮、抑制素的釋放量僅次于10%DMSO+5 g/L BSA組,但顯著高于10%EG組(P0.05),且兩組之間差異不顯著(P0.05)。2.10%DMSO+5 g/L BSA冷凍后的睪丸組織的堿性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(γ-GT)和總抗氧化能力(T-AOC)的活性分別為198.63 U/gprot、33.04 U/gprot,137.23 U/gprot和1.62 U/mgprot,均顯著高于其他冷凍組(P0.05),但顯著低于新鮮組織(P0.05);10%DMSO+5 g/L BSA和10%EG+5 g/L BSA冷凍后的睪丸組織乳酸脫氫酶(LDH)活性分別為1444.50 U/gprot和1324.20 U/gprot,顯著高于其他冷凍組(P0.05),且兩組之間差異不顯著(P0.05);10%DMSO+5 g/L BSA和10%EG+5 g/L BSA冷凍后的睪丸組織丙二醛(MDA)含量分別1.63 U/mgprot和1.80U/mgprot,顯著低于其他冷凍組(P0.05),且兩組之間差異不顯著(P0.05)。3.10%DMSO+5 g/L BSA冷凍后的睪丸組織Caspase-3相對表達量顯著低于其他冷凍組(P0.05),且顯著高于新鮮組織(P0.05);CD90相對表達量在各冷凍組之間差異不顯著(P0.05),且均顯著低于新鮮組織(P0.05);10%DMSO+5 g/L BSA冷凍后的睪丸組織GDNF相對表達量顯著高于10%DMSO組和10%EG組(P0.05),且與10%EG+5 g/L BSA組差異不顯著(P0.05);10%DMSO+5 g/L BSA冷凍后的睪丸組織Oct-4相對表達量顯著高于10%EG組(P0.05),且與10%EG+5 g/L BSA組和10%DMSO組差異不顯著(P0.05)。在10%DMSO中添加5 g/L BSA有效提高了凍后羔羊睪丸組織的形態(tài)、激素釋放量、標志性酶活性、抗氧化能力以及關(guān)鍵基因的相對表達量,說明在DMSO中添加BSA具有可行性,為睪丸組織冷凍保護劑的選擇提供了新的思路,為睪丸組織的冷凍保存提供了可靠的理論依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：羔羊睪丸組織 冷凍保護劑 激素釋放量 酶活性 基因相對表達量
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S814
【目錄】：

• 摘要6-8
• abstract8-13
• 文獻綜述13-22
• 第一章 睪丸組織冷凍保存研究進展13-22
• 1.1 睪丸組織冷凍保存意義13-14
• 1.2 睪丸組織冷凍保護劑研究進展14-15
• 1.3 細胞的冷凍損傷機理15-16
• 1.3.1 細胞冷凍損傷的兩因素假說15-16
• 1.3.2 電解質(zhì)失衡假說16
• 1.3.3 物理屏障假說16
• 1.3.4 結(jié)構(gòu)水假說16
• 1.3.5 生物膜傷害假說16
• 1.4 冷凍保護劑的保護機制16-17
• 1.5 睪丸內(nèi)激素17-18
• 1.5.1 睪酮17
• 1.5.2 抑制素17-18
• 1.6 睪丸組織的標志性酶18-19
• 1.6.1 堿性磷酸酶18
• 1.6.2 酸性磷酸酶18
• 1.6.3 乳酸脫氫酶18
• 1.6.4 γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶18-19
• 1.7 睪丸組織冷凍過程中的氧化損傷19
• 1.8 睪丸組織的關(guān)鍵基因19-20
• 1.8.1 Oct-419
• 1.8.2 GDNF19-20
• 1.8.3 Caspase-320
• 1.8.4 CD9020
• 1.9 睪丸組織冷凍在新的生殖技術(shù)方面的應(yīng)用20-21
• 1.9.1 生殖細胞的移植20-21
• 1.9.2 睪丸組織的異體移植21
• 1.9.3 生殖細胞的體外培養(yǎng)21
• 1.10 本研究的目的和意義21-22
• 試驗研究22-46
• 第二章 DMSO和EG中添加BSA對凍后羔羊睪丸組織形態(tài)和激素釋放量的影響22-30
• 2.1 材料與方法23-25
• 2.1.1 羔羊睪丸組織的采集23
• 2.1.2 主要試劑23
• 2.1.3 主要儀器設(shè)備23
• 2.1.4 羔羊睪丸組織的冷凍與解凍23-24
• 2.1.5 細胞活率、曲細精管完整率測定24
• 2.1.6 睪丸組織的體外培養(yǎng)24
• 2.1.7 睪酮和抑制素釋放量測定24
• 2.1.8 數(shù)據(jù)分析24-25
• 2.2 結(jié)果與分析25-28
• 2.2.1 DMSO和EG中添加BSA對凍后羔羊睪丸組織細胞活率的影響25
• 2.2.2 DMSO和EG中添加BSA對凍后睪丸組織曲細精管完整性的影響25-26
• 2.2.3 DMSO和EG中添加BSA對凍后睪丸組織睪酮釋放量的影響26-27
• 2.2.4 DMSO和EG中添加BSA對凍后睪丸組織抑制素釋放量的影響27-28
• 2.3 討論28-29
• 2.4 小結(jié)29-30
• 第三章 DMSO和EG中添加BSA對凍后羔羊睪丸組織標志性酶和抗氧化能力的影響30-38
• 3.1 材料與方法31-32
• 3.1.1 羔羊睪丸組織的采集31
• 3.1.2 主要試劑31
• 3.1.3 主要儀器設(shè)備31
• 3.1.4 羔羊睪丸組織的冷凍與解凍31
• 3.1.5 睪丸組織的體外培養(yǎng)31
• 3.1.6 睪丸組織懸液的制備31
• 3.1.7 AKP、ACP、LDH、γ-GT、MDA和T-AOC的活性的測定31-32
• 3.1.8 數(shù)據(jù)分析32
• 3.2 結(jié)果與分析32-35
• 3.2.1 DMSO和EG中添加BSA對凍后羔羊睪丸組織AKP活性的影響32
• 3.2.2 DMSO和EG中添加BSA對凍后羔羊睪丸組織ACP活性的影響32-33
• 3.2.3 DMSO和EG中添加BSA對凍后羔羊睪丸組織LDH活性的影響33
• 3.2.4 DMSO和EG中添加BSA對凍后羔羊睪丸組織 γ-GT活性的影響33-34
• 3.2.5 DMSO和EG中添加BSA對凍后羔羊睪丸組織T-AOC活性的影響34
• 3.2.6 DMSO和EG中添加BSA對凍后羔羊睪丸組織MDA活性的影響34-35
• 3.3 討論35-37
• 3.4 小結(jié)37-38
• 第四章 DMSO和EG中添加BSA對凍后羔羊睪丸組織關(guān)鍵基因相對表達量的影響38-46
• 4.1 材料與方法38-41
• 4.1.1 羔羊睪丸組織的采集38
• 4.1.2 主要試劑38-39
• 4.1.3 主要儀器設(shè)備39
• 4.1.4 羔羊睪丸組織的冷凍與解凍39
• 4.1.5 睪丸組織的體外培養(yǎng)39
• 4.1.6 總RNA的提取和檢測39
• 4.1.7 RNA的反轉(zhuǎn)錄39-40
• 4.1.8 引物設(shè)計與合成40
• 4.1.9 實時熒光定量PCR40
• 4.1.10 統(tǒng)計分析40-41
• 4.2 結(jié)果與分析41-44
• 4.2.1 總RNA提取結(jié)果的檢測41
• 4.2.2 實時熒光定量結(jié)果分析41-42
• 4.2.3 DMSO和EG中添加BSA對羔羊睪丸組織Caspase-3、CD90、GDNF和Oct-4 相對表達量的影響42-44
• 4.3 討論44-45
• 4.4 小結(jié)45-46
• 結(jié)論46
• 進一步研究內(nèi)容46-47
• 參考文獻47-54
• 附錄54-58
• 縮略詞58-59
• 致謝59-60
• 作者簡介60

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1 付偉;李彩霞;黃林;劉文靜;金素鈺;林亞秋;鄭玉才;;成年牦牛與雙性牦牛睪丸蛋白質(zhì)雙向電泳的比較研究[J];四川動物;2014年01期

2 于立穎;劉莉;張易祥;王杏龍;采克俊;;雞睪丸組織移植初步研究[J];上海畜牧獸醫(yī)通訊;2008年06期

3 陳乃仁;牛的睪丸大小與繁殖力及其陰囊周長測定法[J];國外畜牧學(xué)(草食家畜);1985年02期

4 黃偉玲;宋銳;陶勇;張運海;曹鴻國;章孝榮;;Oct4在不同時期牛睪丸組織中的表達[J];畜牧與獸醫(yī);2011年01期

5 李麗芳;張映;郝玉娟;李桂蘭;;神經(jīng)生長因子在雄雞睪丸組織中的定量表達[J];激光生物學(xué)報;2012年06期

6 鄭鵬;于磊;田亞光;黃賀;張貴學(xué);;犢牛睪丸組織培養(yǎng)及PGP 9.5基因的檢測[J];中國畜牧雜志;2010年15期

7 李吉霞;王軼敏;丁向彬;葛秀國;;成年牛睪丸組織體外無血清培養(yǎng)研究[J];中國畜牧獸醫(yī);2013年06期

8 汪濤;李中圣;劉宇;;動物生殖細胞移植術(shù)和睪丸組織異種植皮術(shù)的研究進展[J];中國獸醫(yī)雜志;2008年03期

9 姚銀竹;肖榕;吳群;鄭之琬;卿麗娟;徐茂森;鄭小波;;仔豬睪丸組織c-jun mRNA表達量與其血漿睪酮水平關(guān)系研究[J];中國畜牧獸醫(yī);2011年03期

10 付偉;李彩霞;劉文靜;馬曉琴;任亮;黃林;金素鈺;鄭玉才;;利用雙向電泳-質(zhì)譜技術(shù)鑒定牦牛和犏牛睪丸中的差異表達蛋白質(zhì)[J];西南民族大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2014年01期

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1 于立穎;劉莉;張易祥;曹訪;丁志麗;采克俊;;雞睪丸組織移植研究[A];第二屆中國醫(yī)學(xué)細胞生物學(xué)學(xué)術(shù)大會暨細胞生物學(xué)教學(xué)改革會議論文集[C];2008年

2 鐘金城;姬秋梅;柴志欣;劉仲娜;曾賢彬;宋喬喬;楊琴;馬志杰;;基于轉(zhuǎn)錄組測序?qū)﹃：完笈２G丸組織的分析研究[A];中國遺傳學(xué)會第九次全國會員代表大會暨學(xué)術(shù)研討會論文摘要匯編（2009-2013）[C];2013年

3 農(nóng)謙;吳天鵬;歐陽海;;香煙煙霧致睪丸氧化應(yīng)激與iNOS表達的相關(guān)性研究[A];第十五屆全國泌尿外科學(xué)術(shù)會議論文集[C];2008年

4 余振東;唐愛發(fā);桂耀庭;張立兵;張鍵榮;葉炯賢;蔡志明;;睪丸特異性新基因TSCPA在小鼠和人睪丸組織中的表達分析[A];中華醫(yī)學(xué)會第八次全國男科學(xué)學(xué)術(shù)會議論文集[C];2007年

5 鄭新民;劉子明;楊志偉;李世文;胡禮泉;;大鼠單側(cè)睪丸扭轉(zhuǎn)對側(cè)睪丸生精損傷的神經(jīng)-血管反射機制[A];中華醫(yī)學(xué)會第八次全國男科學(xué)學(xué)術(shù)會議論文集[C];2007年

6 莫亞勤;李麓蕓;盧光t;;利用電子差異展示方法克隆人類睪丸高表達新基因SPATA11[A];第一屆中華醫(yī)學(xué)會生殖醫(yī)學(xué)分會、中國動物學(xué)會生殖生物學(xué)分會聯(lián)合年會論文匯編[C];2007年

7 譚付清;陳昭典;鄭祥毅;;膠質(zhì)細胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子mRNA在大鼠移植睪丸組織的表達[A];第十五屆全國泌尿外科學(xué)術(shù)會議論文集[C];2008年

8 譚付清;陳昭典;鄭祥毅;;膠質(zhì)細胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子mRNA在大鼠移植睪丸組織的表達[A];中華醫(yī)學(xué)會第八次全國男科學(xué)學(xué)術(shù)會議論文集[C];2007年

9 譚付清;陳昭典;鄭祥毅;;膠質(zhì)細胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子mRNA在大鼠移植睪丸組織的表達[A];2009年浙江省男科、泌尿外科學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2009年

10 譚付清;陳昭典;鄭祥毅;;膠質(zhì)細胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子mRNA在大鼠移植睪丸組織中的表達[A];21世紀男科學(xué)——中華醫(yī)學(xué)會第五次全國男科學(xué)學(xué)術(shù)會議論文集[C];2004年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 欣華;英國科學(xué)家擬從睪丸中提取干細胞[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2006年

2 作者為北京煤炭總醫(yī)院泌尿外科主任醫(yī)師 鐘偉;睪丸“犯擰”趕快就醫(yī)[N];中國人口報;2003年

3 副主任醫(yī)師 呂開華;睪丸的三種特殊細胞[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報;2009年

4 記者 張夢然;日首次用冷凍睪丸組織培育出小鼠后代[N];科技日報;2014年

5 羅沂 副主任醫(yī)師;“無精”男性細查因 對癥才能巧治病[N];上海中醫(yī)藥報;2009年

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1 廉傳江;豬睪丸組織microRNA的鑒定與差異表達研究[D];吉林大學(xué);2011年

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1 韓海軍;氟中毒對小鼠下丘腦—垂體—睪丸軸結(jié)構(gòu)及生殖相關(guān)基因的影響[D];山西農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

2 張藝寶;仔鼠睪丸組織移植與冷凍保存試驗[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

3 劉一輝;豬睪丸組織的miRNA表達譜分析[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

4 朱慶超;DMSO和EG中添加BSA對羔羊睪丸組織冷凍保存效果的影響[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2016年

5 李德宏;高原牦牛睪丸的形態(tài)學(xué)研究[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年

6 蔡春紅;未成熟睪丸組織體外生殖細胞發(fā)育的實驗研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2014年

7 洪潔峗;冷凍保護劑對犢牛睪丸組織標志性酶活性及關(guān)鍵基因表達量的影響[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2014年

8 黃偉玲;SSCs相關(guān)抗原在不同家畜睪丸組織中的定位[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

9 趙麗娜;PRP基因在睪丸中的表達及其生物學(xué)功能初步研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2011年

10 王亭;睪丸組織移植對內(nèi)分泌衰退癡呆型小鼠學(xué)習(xí)記憶的保護作用[D];安徽大學(xué);2015年

，

本文編號：911981