本文關(guān)鍵詞：神經(jīng)生長(zhǎng)因子NGF在綠殼蛋雞卵泡和輸卵管中的表達(dá)及對(duì)卵泡發(fā)育的調(diào)控

  更多相關(guān)文章： 綠殼蛋雞 神經(jīng)生長(zhǎng)因子 卵泡 輸卵管 激素 激素受體

【摘要】：鳥類的排卵過程為卵巢發(fā)育成熟并產(chǎn)生成熟的卵泡,卵泡脫離卵巢通過輸卵管的各個(gè)部分形成完整的蛋,并最終排出。而在這個(gè)過程中卵巢和輸卵管受到諸多的生長(zhǎng)因子和激素的調(diào)控。通過選育培養(yǎng)出的蛋雞在進(jìn)入高產(chǎn)期后幾乎每天產(chǎn)蛋,其原因在于蛋雞卵泡在生殖階段可持續(xù)發(fā)育、并排卵和受精,卵巢排卵后亦不形成黃體,生殖周期極短,是作為生殖系統(tǒng)研究的理想試驗(yàn)動(dòng)物。本試驗(yàn)以中國(guó)地方特色蛋雞品種綠殼蛋雞為試驗(yàn)材料,測(cè)定不同產(chǎn)蛋時(shí)期的等級(jí)前卵泡、優(yōu)勢(shì)等級(jí)卵泡和輸卵管中的神經(jīng)生長(zhǎng)因子NGF及其受體的mRNA表達(dá)量,并對(duì)產(chǎn)蛋期和就巢期的組織進(jìn)行NGF及其受體的表達(dá)對(duì)比,同時(shí)通過體外培養(yǎng)的方式對(duì)綠殼蛋雞的F1卵泡顆粒細(xì)胞培養(yǎng)并添加NGF蛋白,測(cè)定各個(gè)受體的mRNA表達(dá)量和性腺激素的分泌量。結(jié)果如下：通過對(duì)綠殼蛋雞不同產(chǎn)蛋階段(19W、33W、50W、64W)的生殖組織進(jìn)行采樣并提取mRNA,并進(jìn)行熒光定量對(duì)其卵泡和輸卵管的NGF及其受體的mRNA表達(dá)量測(cè)定。結(jié)果表明：NGF在綠殼蛋雞各個(gè)產(chǎn)蛋時(shí)期中的卵泡和輸卵管中都有表達(dá)；在等級(jí)前卵泡中,除了產(chǎn)蛋末期外,其他時(shí)期的小白卵泡SWF的NGF和其高親和力受體酪氨酸激酶A (TrkA)的mRNA表達(dá)量要顯著高于其他等級(jí)前卵泡(P0.05),且隨著等級(jí)前卵泡的發(fā)育,NGF的表達(dá)量呈現(xiàn)下降的趨勢(shì),而在整個(gè)產(chǎn)蛋時(shí)期中,NGF在產(chǎn)蛋高峰期表達(dá)量最高；在等級(jí)卵泡中,NGF及其受體在F4卵泡中表達(dá)量在各時(shí)期都較高,且在產(chǎn)蛋前期和高峰期,F1-F4的mRNA表達(dá)量都高于F5的mRNA表達(dá)量,而在整個(gè)產(chǎn)蛋周期中,NGF的表達(dá)量在產(chǎn)蛋高峰期處于峰值；每個(gè)時(shí)期的輸卵管各部位都有NGF的表達(dá),且表達(dá)量隨著綠殼蛋雞產(chǎn)蛋周期的變化而變化,在產(chǎn)蛋后期NGF及其高親和力受體表達(dá)量最高。以上結(jié)果說明,NGF的表達(dá)量與蛋雞的生殖狀況和產(chǎn)蛋性能相關(guān),推測(cè)NGF可能參與了調(diào)控卵巢和輸卵管生長(zhǎng)發(fā)育并有助于蛋雞產(chǎn)蛋。利用熒光定量測(cè)定方法對(duì)綠殼蛋雞產(chǎn)蛋期和就巢期各組織的NGF及其受體的表達(dá)進(jìn)行研究。結(jié)果表明：產(chǎn)蛋期的卵巢大于就巢期卵巢,且具有小黃卵泡SYF和F1-F6卵泡,而就巢期卵巢處于萎縮形態(tài),沒有優(yōu)勢(shì)卵泡；在產(chǎn)蛋期的卵巢基質(zhì)中,NGF及其受體顯著高于就巢期(P0.05)；在等級(jí)前卵泡中,SWF和LWF中的NGF及其高親和力受體在產(chǎn)蛋期的mRNA的表達(dá)量顯著高于就巢期(P0.05)。以上結(jié)果說明NGF及其受體在卵巢組織中的表達(dá)與禽類產(chǎn)蛋周期有影響,并可能參與了禽類產(chǎn)蛋時(shí)期與就巢時(shí)期的調(diào)控,NGF的表達(dá)有助于激活非發(fā)情期卵巢并改變卵巢形態(tài),促使等級(jí)前卵泡發(fā)育成為等級(jí)優(yōu)勢(shì)卵泡。通過對(duì)F1卵泡顆粒細(xì)胞離體培養(yǎng),添加NGF蛋白并進(jìn)行受體基因的熒光定量及激素的Elisa檢查,探究NGF蛋白在蛋雞卵泡發(fā)育過程中的作用。結(jié)果表明：在添加不同濃度NGF蛋白處理后,顆粒細(xì)胞中的p75受體的表達(dá)量顯著升高(P0.05),且隨著NGF蛋白的濃度升高而升高；處理不同濃度的NGF蛋白后,顆粒細(xì)胞中的FSHR和LHR也顯著升高(P0.05),且存在正相關(guān)關(guān)系；通過Elisa檢查發(fā)現(xiàn),添加NGF蛋白處理后的顆粒細(xì)胞中雌激素的分泌顯著升高(P＜0.05),而孕激素則相反;在依次添加NGF和FSH處理后發(fā)現(xiàn),雌激素的分泌在單獨(dú)添加NGF和FSH時(shí)都將顯著升高(P0.05),而且同時(shí)添加有疊加效果,而孕激素的分泌則相反。以上結(jié)果表明,NGF在禽類卵泡中能促進(jìn)其LHR和FSHR的表達(dá),通過加強(qiáng)細(xì)胞對(duì)激素的敏感性來調(diào)控卵泡的發(fā)育和排卵,并且影響動(dòng)物的生理周期。綜上所述,NGF及其受體能促進(jìn)禽類早期卵巢和輸卵管的生長(zhǎng)和發(fā)育,并在卵巢和輸卵管成熟后,促進(jìn)卵巢卵泡的發(fā)育以及排卵,同時(shí)在也影響雞的生殖周期。
【關(guān)鍵詞】：綠殼蛋雞 神經(jīng)生長(zhǎng)因子 卵泡 輸卵管 激素 激素受體
【學(xué)位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S831
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 縮寫對(duì)照表10-13
• 1 文獻(xiàn)綜述13-26
• 1.1 NTs家族及其受體14-17
• 1.1.1 NTs家族成員14-15
• 1.1.2 NTs家族受體15-16
• 1.1.3 NTs家族與其受體的結(jié)合方式16-17
• 1.2 神經(jīng)生長(zhǎng)因子及其受體17-21
• 1.2.1 神經(jīng)生長(zhǎng)因子結(jié)構(gòu)17-18
• 1.2.2 神經(jīng)生長(zhǎng)因子受體結(jié)構(gòu)18-19
• 1.2.3 神經(jīng)生長(zhǎng)因子的作用機(jī)制19-21
• 1.3 神經(jīng)生長(zhǎng)因子及其受體在雌性生殖系統(tǒng)中的作用21-23
• 1.3.1 卵巢21-23
• 1.3.2 輸卵管23
• 1.4 禽類生殖系統(tǒng)的發(fā)育23-26
• 1.4.1 禽類的卵泡發(fā)育23-24
• 1.4.2 禽類輸卵管發(fā)育24
• 1.4.3 性腺激素24-26
• 1.5 本研究的目的意義26
• 2 材料與方法26-33
• 2.1 試驗(yàn)材料26-29
• 2.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物選擇26-27
• 2.1.2 主要試劑及試劑盒27
• 2.1.3 主要試劑配制27-28
• 2.1.4 主要儀器設(shè)備28-29
• 2.2 試驗(yàn)方法29-33
• 2.2.1 樣品采集29
• 2.2.2 雞卵巢顆粒細(xì)胞培養(yǎng)29-30
• 2.2.3 顆粒細(xì)胞NGF蛋白處理30
• 2.2.4 顆粒細(xì)胞NGF蛋白及FSH處理30
• 2.2.5 總RNA提取30-31
• 2.2.6 總RNA質(zhì)量和濃度的檢測(cè)31
• 2.2.7 逆轉(zhuǎn)錄31-32
• 2.2.8 實(shí)時(shí)熒光定量(參照寶生物說明書)32
• 2.2.9 Elisa檢測(cè)(參照Elisa說明書)32-33
• 2.3 數(shù)據(jù)分析33
• 3 結(jié)果與分析33-43
• 3.1 不同產(chǎn)蛋階段綠殼蛋雞NGF及其受體mRNA組織表達(dá)量33-37
• 3.1.1 等級(jí)前卵泡NGF及其受體的表達(dá)33-34
• 3.1.2 等級(jí)卵泡NGF及其受體的表達(dá)34-35
• 3.1.3 輸卵管NGF及其受體的表達(dá)35-36
• 3.1.4 不同階段NGF及其受體的表達(dá)趨勢(shì)36-37
• 3.2 綠殼蛋雞產(chǎn)蛋期和就巢期NGF及其受體的組織表達(dá)差異37-40
• 3.3 NGF對(duì)顆粒細(xì)胞的影響40-43
• 3.3.1 NGF對(duì)顆粒細(xì)胞TrkA和p75受體基因表達(dá)影響40
• 3.3.2 NGF對(duì)顆粒細(xì)胞激素受體表達(dá)影響40-41
• 3.3.3 NGF對(duì)顆粒細(xì)胞雌激素和孕激素分泌影響41-42
• 3.3.4 NGF和FSH對(duì)顆粒細(xì)胞雌激素和孕激素分泌影響42-43
• 4 討論43-48
• 4.1 NGF及其受體在卵巢中的表達(dá)43-44
• 4.2 NGF及其受體在輸卵管中的表達(dá)44-45
• 4.3 NGF對(duì)產(chǎn)蛋周期的調(diào)節(jié)45-46
• 4.4 NGF對(duì)顆粒細(xì)胞受體基因表達(dá)影響46-47
• 4.5 NGF對(duì)顆粒細(xì)胞雌激素和孕激素分泌影響47-48
• 5 結(jié)論48-49
• 參考文獻(xiàn)49-56
• 致謝56-57
• 攻讀碩士研究生期間發(fā)表的論文和專利57

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本文編號(hào)：911555