本文關(guān)鍵詞：攜病毒柔嫩艾美耳球蟲(chóng)誘導(dǎo)宿主TLRs表達(dá)及細(xì)胞因子分泌的研究

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【摘要】：雞球蟲(chóng)病是由頂復(fù)門艾美耳屬的球蟲(chóng)寄生于雞的腸上皮細(xì)胞內(nèi)所引起的一種原蟲(chóng)病,是世界范圍內(nèi)最嚴(yán)重的家禽寄生蟲(chóng)病之一,嚴(yán)重危害養(yǎng)禽業(yè)發(fā)展。雞球蟲(chóng)病被美國(guó)農(nóng)業(yè)部列為對(duì)禽類危害最為嚴(yán)重的五大疾病之一,對(duì)我國(guó)乃至全世界的養(yǎng)禽業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。Toll樣受體(Toll-like receptors,TLR)是一類高度保守的蛋白質(zhì)家族,通過(guò)啟動(dòng)宿主的免疫應(yīng)答對(duì)病原體進(jìn)行識(shí)別,在減少和清除病原體中起重要作用。在雞體內(nèi)已經(jīng)鑒定出的TLR基因至少10個(gè),Ch TLR3、Ch TLR7和Ch TLR21為識(shí)別病毒的受體。周作勇等(2011)、秦波等(2012)、Zhang等(2012)報(bào)道柔嫩艾美耳球蟲(chóng)在感染過(guò)程中能夠被天然免疫系統(tǒng)所識(shí)別,引起多種Ch TLRs的表達(dá)變化。Han等(2011)報(bào)道首次在柔嫩艾美耳球蟲(chóng)中發(fā)現(xiàn)病毒樣粒子。Wu等(2016)破譯柔嫩艾美耳球蟲(chóng)病毒全基因組。病毒粒子的存在可能影響宿主天然免疫系統(tǒng)對(duì)柔嫩艾美耳球蟲(chóng)的識(shí)別。目前關(guān)于攜病毒柔嫩艾美耳球蟲(chóng)誘導(dǎo)宿主TLRs表達(dá)的變化等研究尚未見(jiàn)報(bào)道。本試驗(yàn)通過(guò)攜病毒和無(wú)病毒柔嫩艾美耳球蟲(chóng)誘導(dǎo)宿主TLRs表達(dá)的變化、炎性因子分泌和雛雞盲腸病變的觀察研究,以初步確定攜病毒柔嫩艾美耳球蟲(chóng)感染激活宿主天然免疫TLRs信號(hào)通路的作用。為揭示雞體抗柔嫩艾美耳球蟲(chóng)感染的天然免疫機(jī)理等奠定基礎(chǔ)。主要研究?jī)?nèi)容如下:攜病毒和無(wú)病毒柔嫩艾美耳球蟲(chóng)誘導(dǎo)雞巨噬細(xì)胞TLRs m RNA表達(dá)的變化用攜病毒和無(wú)病毒柔嫩艾美耳球蟲(chóng)刺激雞巨噬細(xì)胞,分別于不同時(shí)間(0h,1h,2h,4h,6h,8h)收集雞巨噬細(xì)胞提取總RNA,然后用q RT-PCR檢測(cè)雞TLRs(Ch TLRs)表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化。結(jié)果表明,攜病毒柔嫩艾美耳球蟲(chóng)刺激雞巨噬細(xì)胞引起Ch TLR1、4、7、15和21 m RNA表達(dá)水平上調(diào),Ch TLR2、3和5 m RNA表達(dá)水平下調(diào)。無(wú)病毒柔嫩艾美耳球蟲(chóng)刺激雞巨噬細(xì)胞引起Ch TLR1、4、15和21 m RNA表達(dá)水平上調(diào),Ch TLR2、3、5和7 m RNA表達(dá)水平下調(diào)。表明攜病毒和無(wú)病毒柔嫩艾美耳球蟲(chóng)刺激雞巨噬細(xì)胞后誘導(dǎo)多種TLRs表達(dá)水平的動(dòng)態(tài)變化。與無(wú)病毒組相比,在8h時(shí)攜病毒組Ch TLR3 m RNA表達(dá)水平明顯升高,攜病毒組Ch TLR7表達(dá)水平上調(diào)而無(wú)病毒組下調(diào),攜病毒組Ch TLR21表達(dá)水平上調(diào)比無(wú)病毒組顯著,表明Ch TLR3、Ch TLR7、Ch TLR21可能與雞體抗柔嫩艾美耳球蟲(chóng)病毒的先天性免疫應(yīng)答有關(guān)。攜病毒和無(wú)病毒柔嫩艾美耳球蟲(chóng)誘導(dǎo)雛雞盲腸TLRs m RNA表達(dá)的變化用攜病毒和無(wú)病毒柔嫩艾美耳球蟲(chóng)分別感染雛雞,并設(shè)置健康對(duì)照組。采用q RT-PCR方法檢測(cè)感染后2h,6h,12h,24h,48h,72h雛雞盲腸組織TLRs m RNA表達(dá)水平。結(jié)果表明,攜病毒和無(wú)病毒柔嫩艾美耳球蟲(chóng)感染雛雞后均可誘導(dǎo)盲腸上皮細(xì)胞多種Ch TLR1、2、3、4、5、7、15和21 m RNA表達(dá)水平的動(dòng)態(tài)變化。攜病毒柔嫩艾美耳球蟲(chóng)感染雞后,Ch TLR1、2、4、5、7、15和21 m RNA表達(dá)水平在感染后第6h均達(dá)到最高值。而無(wú)病毒柔嫩艾美耳球蟲(chóng)感染雞后,Ch TLR1、2、4、5、7、15和21 m RNA表達(dá)水平均在感染后24h達(dá)到最高值。這種時(shí)間差異表明感染攜病毒柔嫩艾美耳球蟲(chóng)組比感染無(wú)病毒柔嫩艾美耳球蟲(chóng)組更早的引起免疫應(yīng)答。攜病毒組在感染后24h Ch TLR3 m RNA的表達(dá)水平上調(diào)并達(dá)到高峰。識(shí)別病毒的受體Ch TLR3、Ch TLR7和Ch TLR21變化可能與雞體抗柔嫩艾美耳球蟲(chóng)病毒的先天性免疫應(yīng)答有關(guān)。感染攜病毒和無(wú)病毒柔嫩艾美耳球蟲(chóng)雛雞IL-6和IFN-β的分泌及盲腸病變觀察采集感染攜病毒和無(wú)病毒柔嫩艾美耳球蟲(chóng)雛雞血清,用ELISA方法檢測(cè)IL-6和IFN-β的分泌水平,并將感染后的雛雞盲腸制作石蠟切片觀察病變。結(jié)果表明,感染攜病毒和無(wú)病毒柔嫩艾美耳球蟲(chóng)組IL-6和IFN-β均有上調(diào),攜病毒組IL-6和IFN-β分泌水平較無(wú)病毒組高。感染攜病毒柔嫩艾美耳球蟲(chóng)的雛雞盲腸較感染無(wú)病毒柔嫩艾美耳球蟲(chóng)的雛雞表現(xiàn)出更為嚴(yán)重的水腫、腸上皮細(xì)胞碎裂崩解、腸黏膜破損斷裂等病理變化。初步推斷宿主抗攜病毒和無(wú)病毒柔嫩艾美耳球蟲(chóng)感染和蟲(chóng)體致病機(jī)制可能不同。
【關(guān)鍵詞】：攜病毒柔嫩艾美耳球蟲(chóng) 無(wú)病毒柔嫩艾美耳球蟲(chóng) Toll樣受體 細(xì)胞因子 病理變化
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S852.7
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-13
• 前言13-15
• 第一篇 文獻(xiàn)綜述15-26
• 第1章 雞球蟲(chóng)病的免疫學(xué)研究15-19
• 1.1 艾美耳球蟲(chóng)的免疫原性15-16
• 1.2 宿主對(duì)艾美耳球蟲(chóng)的免疫應(yīng)答16-19
• 第2章 雞TLRs及其與病原感染研究概況19-24
• 2.1 ChTLRs的結(jié)構(gòu)、特點(diǎn)及識(shí)別的配體20-21
• 2.2 ChTLRs與細(xì)菌感染21
• 2.3 ChTLRs與病毒感染21-22
• 2.4 ChTLRs與寄生蟲(chóng)感染22-24
• 第3章 艾美耳球蟲(chóng)病毒的研究進(jìn)展24-26
• 第二篇 研究?jī)?nèi)容26-57
• 第1章 攜病毒和無(wú)病毒柔嫩艾美耳球蟲(chóng)誘導(dǎo)雞巨噬細(xì)胞TLRsmRNA表達(dá)的變化26-40
• 1.1 材料與方法26-32
• 1.2 結(jié)果32-37
• 1.3 討論37-39
• 1.4 小結(jié)39-40
• 第2章 攜病毒和無(wú)病毒柔嫩艾美耳球蟲(chóng)誘導(dǎo)雛雞盲腸TLRsmRNA表達(dá)的變化40-50
• 2.1 材料與方法40-42
• 2.2 結(jié)果42-47
• 2.3 討論47-48
• 2.4 小結(jié)48-50
• 第3章 感染攜病毒和無(wú)病毒柔嫩艾美耳球蟲(chóng)雛雞IL-6 和IFN-β 的分泌及盲腸病變觀察50-57
• 3.1 材料與方法50-52
• 3.2 結(jié)果52-55
• 3.3 討論55-56
• 3.4 小結(jié)56-57
• 結(jié)論57-58
• 參考文獻(xiàn)58-66
• 導(dǎo)師簡(jiǎn)介66-67
• 作者簡(jiǎn)介及科研成果67-68
• 致謝68

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：911549