本文關(guān)鍵詞：新型鴨呼腸孤病毒σB蛋白的原核表達及其多克隆抗體制備

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【摘要】：為制備新型鴨呼腸孤病毒(new-type duck reovirus,NDRV)XX株σB蛋白的多克隆抗體,試驗經(jīng)RT-PCR擴增NDRV XX株σB基因編碼序列,構(gòu)建原核表達質(zhì)粒pET-32a(+)-σB,將其轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21(DE3)感受態(tài)細胞后,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)獲得His-σB重組蛋白。SDS-PAGE顯示成功表達出約55ku的融合蛋白,主要以包涵體形式存在,其表達時的最佳誘導(dǎo)時間、IPTG誘導(dǎo)濃度分別為3h和0.25mmol/L。經(jīng)Ni 2+柱親和層析純化獲得可溶性重組蛋白,將蛋白經(jīng)Western blotting和蛋白質(zhì)譜鑒定為高純度的σB重組蛋白,將純化后σB重組蛋白按合理免疫程序免疫家兔,獲得多抗隆抗體經(jīng)Western blotting分析顯示出特異性的反應(yīng)。本試驗結(jié)果為NDRVσB蛋白功能的深入研究及基因工程疫苗的研發(fā)奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 佛山科學(xué)技術(shù)學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 新型鴨呼腸孤病毒 σB蛋白 原核表達 多克隆抗體
【基金】：基金項目:廣東省家禽重大傳染病控制技術(shù)研究(2012A020100001)
【分類號】：S852.65
【正文快照】： 禽源呼腸孤病毒(avian reovirus,ARV)近年來已呈現(xiàn)出宿主多樣性的特點,自然感染不僅局限于傳統(tǒng)的雞和火雞,已經(jīng)引起各種水禽不同程度的發(fā)病死亡,給養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展造成了巨大的經(jīng)濟損失[1]。番鴨呼腸孤病毒(muscovy duck reovirus,MDRV)能夠引起番鴨產(chǎn)生番鴨呼腸孤病毒病(俗稱“

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