本文關鍵詞：玉米赤霉烯酮對斷奶仔豬小腸ghrelin、PCNA和Hsp70表達的影響

  更多相關文章： 玉米赤霉烯酮 斷奶仔豬 小腸 ghrelin PCNA Hsp70

【摘要】：玉米赤霉烯酮(ZEN)是由鐮孢屬真菌產(chǎn)生的類雌激素毒素,在我國污染廣泛,豬對其最為敏感。以往有關ZEN的研究主要關注其對豬生殖系統(tǒng)的影響,鑒于小腸是ZEN重要的代謝場所,本研究通過ghrelin,PCNA和Hsp70三個指標來研究ZEN對小腸的影響。Ghrelin可促進動物對物質(zhì)的消化吸收,PCNA為細胞增殖的重要衡量指標,Hsp70則是動物機體對抗各種應激因素的重要蛋白。本試驗旨在通過檢測ZEN對斷奶仔豬十二指腸、空腸和回腸內(nèi)ghrelin、PCNA和Hsp70蛋白的分布及其mRNA相對表達量,探究ZEN對斷奶仔豬小腸的內(nèi)分泌及消化吸收等生理功能的影響。試驗選擇28d、平均體重為8.74±0.26 kg健康的三元(杜×長×約)雜交斷奶雌性仔豬20頭,隨機分為兩組,對照組10頭,處理組10頭,所有試驗仔豬初始體重差異不顯著(P0.05)。對照組飼喂基礎飼糧,處理組飼糧中添加1.04 mg/kg ZEN,預試期7d,正試期35d,采集小腸樣本。通過HE染色觀察小腸的組織結(jié)構(gòu),免疫組織化學法研究ghrelin、PCNA和Hsp70在小腸中的分布規(guī)律,通過qRT-PCR方法,檢測ghrelin、PCNA和Hsp70 mRNA的相對表達量。試驗結(jié)果顯示ZEN可導致斷奶仔豬小腸組織學結(jié)構(gòu)發(fā)生變化,發(fā)育受到抑制,十二指腸、空腸、回腸絨毛發(fā)育遲緩,其中空腸絨毛長度顯著縮短(P0.01),回腸絨毛出現(xiàn)明顯的變短、變粗、數(shù)量減少,且存在分支不全的現(xiàn)象,回腸粘膜下層內(nèi)淋巴小結(jié)增多。Ghrelin陽性反應在小腸內(nèi)主要在各段的絨毛上皮,而在小腸腺上陽性反應較弱,添加ZEN后,十二指腸、空腸的陽性反應減弱,累積光密度(IOD)值顯著降低(P0.01),但回腸的IOD值增加(P0.01)。PCNA陽性反應主要位于小腸腺細胞和絨毛基底部細胞以及回腸的集合淋巴結(jié)內(nèi),添加ZEN后,三段小腸PCNA陽性反應降低,IOD結(jié)果均顯著降低(P0.01)。Hsp70陽性反應在小腸內(nèi)主要分布在絨毛上皮、小腸腺以及腸壁內(nèi)的神經(jīng)元,添加ZEN后三段小腸的陽性反應和IOD值均顯著增強(P0.01)。各蛋白mRNA相對表達量的檢測結(jié)果同免疫組化觀察結(jié)果基本一致。綜上所述,斷奶仔豬小腸可通過降低ghrelin的分泌的反應,減弱自身的消化吸收能力,同時小腸通過降低細胞分裂能力,減少小腸對ZEN的吸收,進而抵抗ZEN的毒性作用;而小腸絨毛長度縮短、數(shù)量減少和分支發(fā)育不完全的變化也是機體抵抗ZEN的生理反應的結(jié)果。此外,Hsp70的合成增強,是機體抵抗ZEN對小腸的細胞損傷作用的強有力證據(jù)。
【關鍵詞】：玉米赤霉烯酮 斷奶仔豬 小腸 ghrelin PCNA Hsp70
【學位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S858.28
【目錄】：

• 符號說明4-7
• 中文摘要7-9
• Abstract9-11
• 1 前言11-20
• 1.1 ZEN11-13
• 1.1.1 ZEN的產(chǎn)生與污染現(xiàn)狀11
• 1.1.2 ZEN的理化性質(zhì)和毒性11-13
• 1.1.3 ZEN的吸收與代謝13
• 1.2 Ghrelin13-15
• 1.2.1 Ghrelin的發(fā)現(xiàn)與結(jié)構(gòu)13-14
• 1.2.2 Ghrelin的分布14
• 1.2.3 Ghrelin的功能14-15
• 1.3 PCNA15-16
• 1.3.1 PCNA的發(fā)現(xiàn)和結(jié)構(gòu)15
• 1.3.2 PCNA的功能15-16
• 1.4 Hsp7016-19
• 1.4.1 Hsp70的發(fā)現(xiàn)和概述16
• 1.4.2 Hsp70的功能16-17
• 1.4.3 影響Hsp70表達的因素17-18
• 1.4.4 Hsp70與腸道18-19
• 1.5 小腸結(jié)構(gòu)與功能19-20
• 1.6 本研究的目的和意義20
• 2 材料和方法20-29
• 2.1 試驗材料20-24
• 2.1.1 試驗動物20
• 2.1.2 飼養(yǎng)管理20
• 2.1.3 試驗飼糧20-21
• 2.1.4 樣品采集21-22
• 2.1.5 主要試劑和試驗用品22-24
• 2.2 試驗方法及內(nèi)容24-26
• 2.2.1 切片制備24-25
• 2.2.2 HE法染色25
• 2.2.3 免疫組化法25-26
• 2.3 qRT-PCR法26-29
• 2.3.1 總RNA的提取26
• 2.3.2 RNA質(zhì)量的鑒定26
• 2.3.3 引物設計及qRT-PCR擴增26-28
• 2.3.4 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計與分析28-29
• 3 結(jié)果及分析29-45
• 3.1 斷奶仔豬的生產(chǎn)性能29
• 3.2 斷奶仔豬小腸組織學結(jié)構(gòu)29-33
• 3.3 斷奶仔豬小腸中ghrelin、PCNA和Hsp70分布規(guī)律33-44
• 3.3.1 斷奶仔豬小腸中的ghrelin免疫陽性細胞的分布33-37
• 3.3.2 斷奶仔豬小腸中的PCNA免疫陽性細胞的分布37-40
• 3.3.3 斷奶仔豬小腸中的Hsp70免疫陽性細胞的分布40-44
• 3.4 qRT-PCR試驗結(jié)果44-45
• 4 討論45-50
• 4.1 ZEN對斷奶仔豬小腸發(fā)育的影響45-46
• 4.2 ZEN對斷奶仔豬小腸內(nèi)ghrelin的 影響46-47
• 4.3 ZEN對斷奶仔豬小腸內(nèi)PCNA的影響47-48
• 4.4 ZEN對斷奶仔豬小腸內(nèi)Hsp70的影響48-50
• 5 結(jié)論50-51
• 6 參考文獻51-60
• 7 致謝60

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