本文關(guān)鍵詞：玉米赤霉烯酮對(duì)斷奶仔豬小腸ghrelin、PCNA和Hsp70表達(dá)的影響

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【摘要】：玉米赤霉烯酮(ZEN)是由鐮孢屬真菌產(chǎn)生的類(lèi)雌激素毒素,在我國(guó)污染廣泛,豬對(duì)其最為敏感。以往有關(guān)ZEN的研究主要關(guān)注其對(duì)豬生殖系統(tǒng)的影響,鑒于小腸是ZEN重要的代謝場(chǎng)所,本研究通過(guò)ghrelin,PCNA和Hsp70三個(gè)指標(biāo)來(lái)研究ZEN對(duì)小腸的影響。Ghrelin可促進(jìn)動(dòng)物對(duì)物質(zhì)的消化吸收,PCNA為細(xì)胞增殖的重要衡量指標(biāo),Hsp70則是動(dòng)物機(jī)體對(duì)抗各種應(yīng)激因素的重要蛋白。本試驗(yàn)旨在通過(guò)檢測(cè)ZEN對(duì)斷奶仔豬十二指腸、空腸和回腸內(nèi)ghrelin、PCNA和Hsp70蛋白的分布及其mRNA相對(duì)表達(dá)量,探究ZEN對(duì)斷奶仔豬小腸的內(nèi)分泌及消化吸收等生理功能的影響。試驗(yàn)選擇28d、平均體重為8.74±0.26 kg健康的三元(杜×長(zhǎng)×約)雜交斷奶雌性仔豬20頭,隨機(jī)分為兩組,對(duì)照組10頭,處理組10頭,所有試驗(yàn)仔豬初始體重差異不顯著(P0.05)。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)飼糧,處理組飼糧中添加1.04 mg/kg ZEN,預(yù)試期7d,正試期35d,采集小腸樣本。通過(guò)HE染色觀察小腸的組織結(jié)構(gòu),免疫組織化學(xué)法研究ghrelin、PCNA和Hsp70在小腸中的分布規(guī)律,通過(guò)qRT-PCR方法,檢測(cè)ghrelin、PCNA和Hsp70 mRNA的相對(duì)表達(dá)量。試驗(yàn)結(jié)果顯示ZEN可導(dǎo)致斷奶仔豬小腸組織學(xué)結(jié)構(gòu)發(fā)生變化,發(fā)育受到抑制,十二指腸、空腸、回腸絨毛發(fā)育遲緩,其中空腸絨毛長(zhǎng)度顯著縮短(P0.01),回腸絨毛出現(xiàn)明顯的變短、變粗、數(shù)量減少,且存在分支不全的現(xiàn)象,回腸粘膜下層內(nèi)淋巴小結(jié)增多。Ghrelin陽(yáng)性反應(yīng)在小腸內(nèi)主要在各段的絨毛上皮,而在小腸腺上陽(yáng)性反應(yīng)較弱,添加ZEN后,十二指腸、空腸的陽(yáng)性反應(yīng)減弱,累積光密度(IOD)值顯著降低(P0.01),但回腸的IOD值增加(P0.01)。PCNA陽(yáng)性反應(yīng)主要位于小腸腺細(xì)胞和絨毛基底部細(xì)胞以及回腸的集合淋巴結(jié)內(nèi),添加ZEN后,三段小腸PCNA陽(yáng)性反應(yīng)降低,IOD結(jié)果均顯著降低(P0.01)。Hsp70陽(yáng)性反應(yīng)在小腸內(nèi)主要分布在絨毛上皮、小腸腺以及腸壁內(nèi)的神經(jīng)元,添加ZEN后三段小腸的陽(yáng)性反應(yīng)和IOD值均顯著增強(qiáng)(P0.01)。各蛋白mRNA相對(duì)表達(dá)量的檢測(cè)結(jié)果同免疫組化觀察結(jié)果基本一致。綜上所述,斷奶仔豬小腸可通過(guò)降低ghrelin的分泌的反應(yīng),減弱自身的消化吸收能力,同時(shí)小腸通過(guò)降低細(xì)胞分裂能力,減少小腸對(duì)ZEN的吸收,進(jìn)而抵抗ZEN的毒性作用;而小腸絨毛長(zhǎng)度縮短、數(shù)量減少和分支發(fā)育不完全的變化也是機(jī)體抵抗ZEN的生理反應(yīng)的結(jié)果。此外,Hsp70的合成增強(qiáng),是機(jī)體抵抗ZEN對(duì)小腸的細(xì)胞損傷作用的強(qiáng)有力證據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：玉米赤霉烯酮 斷奶仔豬 小腸 ghrelin PCNA Hsp70
【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：S858.28
【目錄】：

• 符號(hào)說(shuō)明4-7
• 中文摘要7-9
• Abstract9-11
• 1 前言11-20
• 1.1 ZEN11-13
• 1.1.1 ZEN的產(chǎn)生與污染現(xiàn)狀11
• 1.1.2 ZEN的理化性質(zhì)和毒性11-13
• 1.1.3 ZEN的吸收與代謝13
• 1.2 Ghrelin13-15
• 1.2.1 Ghrelin的發(fā)現(xiàn)與結(jié)構(gòu)13-14
• 1.2.2 Ghrelin的分布14
• 1.2.3 Ghrelin的功能14-15
• 1.3 PCNA15-16
• 1.3.1 PCNA的發(fā)現(xiàn)和結(jié)構(gòu)15
• 1.3.2 PCNA的功能15-16
• 1.4 Hsp7016-19
• 1.4.1 Hsp70的發(fā)現(xiàn)和概述16
• 1.4.2 Hsp70的功能16-17
• 1.4.3 影響Hsp70表達(dá)的因素17-18
• 1.4.4 Hsp70與腸道18-19
• 1.5 小腸結(jié)構(gòu)與功能19-20
• 1.6 本研究的目的和意義20
• 2 材料和方法20-29
• 2.1 試驗(yàn)材料20-24
• 2.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物20
• 2.1.2 飼養(yǎng)管理20
• 2.1.3 試驗(yàn)飼糧20-21
• 2.1.4 樣品采集21-22
• 2.1.5 主要試劑和試驗(yàn)用品22-24
• 2.2 試驗(yàn)方法及內(nèi)容24-26
• 2.2.1 切片制備24-25
• 2.2.2 HE法染色25
• 2.2.3 免疫組化法25-26
• 2.3 qRT-PCR法26-29
• 2.3.1 總RNA的提取26
• 2.3.2 RNA質(zhì)量的鑒定26
• 2.3.3 引物設(shè)計(jì)及qRT-PCR擴(kuò)增26-28
• 2.3.4 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)與分析28-29
• 3 結(jié)果及分析29-45
• 3.1 斷奶仔豬的生產(chǎn)性能29
• 3.2 斷奶仔豬小腸組織學(xué)結(jié)構(gòu)29-33
• 3.3 斷奶仔豬小腸中g(shù)hrelin、PCNA和Hsp70分布規(guī)律33-44
• 3.3.1 斷奶仔豬小腸中的ghrelin免疫陽(yáng)性細(xì)胞的分布33-37
• 3.3.2 斷奶仔豬小腸中的PCNA免疫陽(yáng)性細(xì)胞的分布37-40
• 3.3.3 斷奶仔豬小腸中的Hsp70免疫陽(yáng)性細(xì)胞的分布40-44
• 3.4 qRT-PCR試驗(yàn)結(jié)果44-45
• 4 討論45-50
• 4.1 ZEN對(duì)斷奶仔豬小腸發(fā)育的影響45-46
• 4.2 ZEN對(duì)斷奶仔豬小腸內(nèi)ghrelin的 影響46-47
• 4.3 ZEN對(duì)斷奶仔豬小腸內(nèi)PCNA的影響47-48
• 4.4 ZEN對(duì)斷奶仔豬小腸內(nèi)Hsp70的影響48-50
• 5 結(jié)論50-51
• 6 參考文獻(xiàn)51-60
• 7 致謝60

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本文編號(hào)：853805