本文關(guān)鍵詞：草酸鈣對(duì)體外培養(yǎng)犬腎小管上皮細(xì)胞的作用

  更多相關(guān)文章： 草酸鈣 MDCK細(xì)胞 結(jié)晶粘附 細(xì)胞活力 氧化損傷

【摘要】：尿石癥是犬貓常見的泌尿道疾病。近20年來(lái),犬草酸鈣尿結(jié)石的發(fā)病率已超過(guò)了磷酸銨鎂結(jié)石成為最常見的犬尿結(jié)石病類型。其成因多樣,與飲食和品種均有關(guān)系。隨著對(duì)人類草酸鈣尿結(jié)石的研究不斷深入,研究人員在草酸鈣尿結(jié)石成因的研究方面出現(xiàn)了大量理論和實(shí)踐成果。本論文根據(jù)已被廣泛認(rèn)同的草酸鈣結(jié)石形成理論:結(jié)石形成需要經(jīng)過(guò)礦物成核、生長(zhǎng)、聚集、礦物與腎小管上皮細(xì)胞的粘附四個(gè)過(guò)程,設(shè)計(jì)了本實(shí)驗(yàn),以探討犬草酸鈣尿結(jié)石形成過(guò)程中草酸鈣對(duì)犬腎小管上皮細(xì)胞的作用。本研究通過(guò)體外傳代培養(yǎng)犬腎小管上皮細(xì)胞(MDCK細(xì)胞),在細(xì)胞培養(yǎng)液中加入終濃度分別為300μg/mL、600μg/mL、900μg/mL的草酸鈣,各自培養(yǎng)1h、2h、6h、12h、24h、48h,用顯微鏡觀察各作用時(shí)間下細(xì)胞在培養(yǎng)皿里的貼壁情況、細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化和草酸鈣結(jié)晶在細(xì)胞內(nèi)外的粘附和聚集情況;然后將各時(shí)間段各濃度相應(yīng)細(xì)胞樣本收集起來(lái)進(jìn)行超聲破碎,通過(guò)CCK-8法測(cè)定細(xì)胞活性;用試劑盒測(cè)定MDCK細(xì)胞內(nèi)蛋白含量、過(guò)氧化氫含量、丙二醛含量、乳酸脫氫酶含量、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶活力和超氧化物歧化酶活力,測(cè)定細(xì)胞氧化損傷和抗氧化情況。將所得結(jié)果整理對(duì)比分析,探討草酸鈣刺激MDCK細(xì)胞后,細(xì)胞活力的變化、草酸鈣結(jié)晶粘附和聚集情況以及細(xì)胞氧化損傷/抗氧化能力三者之間的關(guān)系。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,同一濃度作用下,MDCK細(xì)胞活力和細(xì)胞SOD活性都隨草酸鈣作用時(shí)間延長(zhǎng)而下降,而細(xì)胞受氧化損傷程度隨實(shí)驗(yàn)延長(zhǎng)而加深,草酸鈣結(jié)晶在細(xì)胞內(nèi)外粘附和聚集增多;在同一作用時(shí)間下,草酸鈣濃度越高,MDCK細(xì)胞活力和細(xì)胞SOD活性越低,細(xì)胞受氧化損傷及草酸鈣的粘附和聚集越嚴(yán)重。由此得到結(jié)論:草酸鈣對(duì)犬腎小管上皮細(xì)胞具有細(xì)胞毒性,其中包括草酸鈣能引起細(xì)胞產(chǎn)生有害氧自由基而發(fā)生氧化損傷。此過(guò)程中,草酸鈣結(jié)晶開始粘附和聚集,而且隨著細(xì)胞損傷加劇和細(xì)胞碎片增多,結(jié)晶粘附和聚集更快更多。因此,草酸鈣在犬尿液中濃度越高,含草酸鈣尿液在腎臟中時(shí)間越長(zhǎng),越容易導(dǎo)致犬腎臟出現(xiàn)損傷并加劇草酸鈣結(jié)晶粘附,促進(jìn)犬草酸鈣結(jié)石形成。
【關(guān)鍵詞】：草酸鈣 MDCK細(xì)胞 結(jié)晶粘附 細(xì)胞活力 氧化損傷
【學(xué)位授予單位】：華南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S858.292
【目錄】：

• 摘要3-4
• Abstract4-9
• 1．前言9-16
• 1.1 結(jié)晶與細(xì)胞粘附的影響因素10-11
• 1.1.1 結(jié)晶與細(xì)胞粘附的作用模式10
• 1.1.2 腎小管上皮細(xì)胞損傷對(duì)結(jié)晶細(xì)胞粘附的影響10-11
• 1.1.3 前列腺素對(duì)細(xì)胞結(jié)晶粘附的影響11
• 1.1.4 基質(zhì)對(duì)細(xì)胞結(jié)晶粘附的影響11
• 1.2 細(xì)胞膜損傷誘導(dǎo)草酸鈣結(jié)石的形成機(jī)制11-12
• 1.2.1 細(xì)胞膜磷脂失去不對(duì)稱性11-12
• 1.2.2 引起腎小管細(xì)胞表面表達(dá)透明質(zhì)酸12
• 1.3 細(xì)胞損傷誘導(dǎo)草酸鈣結(jié)晶粘附實(shí)驗(yàn)12-14
• 1.3.1 細(xì)胞損傷后的結(jié)果12-13
• 1.3.2 線粒體介導(dǎo)細(xì)胞凋亡13
• 1.3.3 尿激酶抑制結(jié)石的機(jī)理13-14
• 1.4 腎小管上皮細(xì)胞氧化損傷模型的建立14
• 1.4.1 HKC氧化損傷模型的建立14
• 1.4.2 Vero氧化損傷模型的建立14
• 1.5 草酸和草酸鈣造成MDCK的損傷14-16
• 1.5.1 MDCK細(xì)胞系介紹14-15
• 1.5.2 不同濃度草酸和草酸鈣對(duì)MDCK的損傷差異15
• 1.5.3 草酸鈣結(jié)晶在MDCK上聚積及對(duì)腎臟的影響15-16
• 2 材料與方法16-26
• 2.1 細(xì)胞株16
• 2.2 試驗(yàn)藥物、試劑及儀器16-17
• 2.2.1 試驗(yàn)藥物及主要試劑16
• 2.2.2 主要試劑的配制16
• 2.2.3 主要試驗(yàn)儀器與器材16-17
• 2.3 細(xì)胞培養(yǎng)17-18
• 2.3.1 MDCK細(xì)胞的復(fù)蘇17
• 2.3.2 MDCK細(xì)胞的傳代17-18
• 2.3.3 細(xì)胞計(jì)數(shù)18
• 2.4 試驗(yàn)分組18-19
• 2.4.1 細(xì)胞活性檢測(cè)試驗(yàn)18
• 2.4.2 細(xì)胞損傷檢測(cè)試驗(yàn)18-19
• 2.5 不同濃度草酸鈣和不同作用時(shí)間對(duì)細(xì)胞活力的影響19-20
• 2.5.1 CCK-8 法原理19
• 2.5.2 細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的測(cè)定19
• 2.5.3 細(xì)胞活力的測(cè)定19-20
• 2.6 不同濃度草酸鈣和不同作用時(shí)間對(duì)細(xì)胞損傷的影響20-26
• 2.6.1 草酸鈣刺激細(xì)胞20
• 2.6.2 顯微鏡下觀察細(xì)胞變化20
• 2.6.3 細(xì)胞樣本前處理20-21
• 2.6.4 細(xì)胞蛋白定量測(cè)定（TP）21
• 2.6.5 細(xì)胞超氧化物歧化酶（SOD）活性測(cè)定21-22
• 2.6.6 細(xì)胞微量丙二醛（MDA）測(cè)定22-23
• 2.6.7 細(xì)胞過(guò)氧化氫（H_2O_2）的測(cè)定23-24
• 2.6.8 細(xì)胞乳酸脫氫酶（LDH）含量測(cè)定24-25
• 2.6.9 細(xì)胞 γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（γ-GT/GGT）活力的測(cè)定25-26
• 2.7 數(shù)據(jù)處理26
• 3.結(jié)果26-47
• 3.1 不同濃度草酸鈣和不同作用時(shí)間對(duì)細(xì)胞形態(tài)學(xué)的影響26-40
• 3.1.1 草酸鈣對(duì)MDCK細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)的影響26-33
• 3.1.2 草酸鈣在細(xì)胞表面附著和聚積情況33-40
• 3.2 不同濃度草酸鈣和不同作用時(shí)間影響MDCK細(xì)胞活力的測(cè)定結(jié)果40-42
• 3.2.1 MDCK細(xì)胞生長(zhǎng)曲線40-41
• 3.2.2 草酸鈣對(duì) MDCK 細(xì)胞活力的影響41-42
• 3.3 不同濃度草酸鈣和不同作用時(shí)間細(xì)胞損傷的測(cè)定42-47
• 3.3.1 草酸鈣對(duì)細(xì)胞蛋白含量的影響42-43
• 3.3.2 草酸鈣對(duì)細(xì)胞中超氧化物歧化酶（SOD）活性的影響43-44
• 3.3.3 草酸鈣對(duì)細(xì)胞中丙二醛（MDA）含量的影響44-45
• 3.3.4 草酸鈣對(duì)細(xì)胞中過(guò)氧化氫(H_2O_2)含量的影響45-46
• 3.3.5 草酸鈣對(duì)細(xì)胞中乳酸脫氫酶（LDH）含量的影響46-47
• 3.3.6 草酸鈣對(duì)細(xì)胞中 γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（γ-GT/GGT）活力的影響47
• 4 分析與討論47-54
• 4.1 草酸鈣對(duì)細(xì)胞的毒性47-49
• 4.2 草酸鈣對(duì)MDCK細(xì)胞活力的影響49-51
• 4.3 草酸鈣在MDCK細(xì)胞內(nèi)外的聚集51-52
• 4.4 草酸鈣對(duì)MDCK細(xì)胞造成的氧化損傷52-54
• 全文結(jié)論54-55
• 致謝55-56
• 參考文獻(xiàn)56-59

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本文編號(hào)：847352