本文關(guān)鍵詞：副豬嗜血桿菌病重組亞單位疫苗候選抗原蛋白的免疫保護(hù)效力評(píng)價(jià)

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【摘要】：副豬嗜血桿菌(Haemophilus parasuis,H.parasuis)定殖于豬上呼吸道,為一種條件致病菌,急性感染可導(dǎo)致全身性疾病,感染后主要的病理表現(xiàn)為關(guān)節(jié)炎、肺炎、漿膜炎和腦膜炎。對(duì)我國乃至全世界養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失,是目前危害全球養(yǎng)豬業(yè)最嚴(yán)重的細(xì)菌病之一。按照瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)和間接血凝試驗(yàn)(IHA)對(duì)H.parasuis進(jìn)行血清分型,H.parasuis至少可分為15個(gè)血清型,但約20%的分離株無法分型。目前,市場(chǎng)上還沒有一種疫苗對(duì)所有血清型的H.parasuis感染都能產(chǎn)生有效的免疫保護(hù)作用。H.parasuis的一些分泌蛋白和外膜蛋白被認(rèn)為是有效的保護(hù)性抗原,有作為有效疫苗的候選抗原的潛力。最近,本實(shí)驗(yàn)室通過蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)從H.parasuis血清5型參考菌株Nagasaki中篩選到7個(gè)分泌蛋白(CdtB,CdtC,AfuA,HbpA,OppA,HktE,HPS-04307),為了評(píng)價(jià)上述7個(gè)蛋白用于制備重組亞單位疫苗的潛力,本研究將cdtB和cdtC基因進(jìn)行了克隆(另5個(gè)蛋白的重組載體已由本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建完成),并以His融合蛋白的形式進(jìn)行了表達(dá)和純化。初期以各蛋白對(duì)小鼠進(jìn)行免疫攻毒試驗(yàn),從中篩選到5個(gè)保護(hù)作用較好的重組蛋白(rCdtB,rCdtC,rAfuA,rOppA,rHPS-04307),并再次以小鼠模型評(píng)價(jià)了這5個(gè)蛋白混合后的免疫保護(hù)效力。在小鼠模型中,所有蛋白都能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生體液免疫反應(yīng)并對(duì)血清5型HN10菌株和13型ZD12菌株的H.parasuis攻毒產(chǎn)生不同程度的免疫保護(hù)作用,5個(gè)蛋白混合后對(duì)小鼠的保護(hù)率最高(對(duì)H.parasuis血清5型HN10和13型ZD12菌株的免疫保護(hù)率分別為85%和60%)。此外,全血?dú)⒕鷮?shí)驗(yàn)結(jié)果表明各蛋白的抗血清能夠有效地抑制H.parasuis的生長(zhǎng),淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)結(jié)果表明各蛋白能夠顯著刺激小鼠T淋巴細(xì)胞增殖。本研究表明rCdtB,rCdtC,rAfuA,rOppA,rHPS-04307能夠?qū)χ滤绖┝康腍.parasuis血清5型HN10和13型ZD12感染產(chǎn)生有效的免疫保護(hù)作用,為新一代多組分疫苗的研制提供了重要參考。
【關(guān)鍵詞】：副豬嗜血桿菌 抗原篩選 亞單位疫苗 免疫保護(hù)
【學(xué)位授予單位】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S858.28
【目錄】：

• 摘要6-7
• abstract7-10
• 英文縮略表10-11
• 第一章 引言11-22
• 1.1 副豬嗜血桿菌研究概述11-17
• 1.1.1 病原學(xué)11-12
• 1.1.2 病理學(xué)12
• 1.1.3 致病機(jī)理12-13
• 1.1.4 血清型13-14
• 1.1.5 流行病學(xué)14
• 1.1.6 副豬嗜血桿菌病的診斷與防治14-17
• 1.2 副豬嗜血桿菌病疫苗研制進(jìn)展17-19
• 1.3 重組亞單位疫苗候選抗原蛋白研究進(jìn)展19-20
• 1.4 研究的目的和意義20-22
• 第二章 副豬嗜血桿菌抗原蛋白的制備22-26
• 2.1 材料22
• 2.1.1 菌株和質(zhì)粒22
• 2.1.2 主要試劑和儀器設(shè)備22
• 2.2 方法22-24
• 2.2.1 H.parasuis血清5型Nagasaki參考菌株基因組的提取22-23
• 2.2.2 目的基因的PCR擴(kuò)增23
• 2.2.3 重組質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定23-24
• 2.2.4 重組蛋白的表達(dá)、純化及鑒定24
• 2.3 結(jié)果24-26
• 2.3.1 目的基因的PCR擴(kuò)增24-25
• 2.3.2 重組蛋白的原核表達(dá)、純化及鑒定25-26
• 第三章 副豬嗜血桿菌重組蛋白免疫效果評(píng)價(jià)26-37
• 3.1 材料26
• 3.1.1 菌株及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物26
• 3.1.2 主要試劑和儀器設(shè)備26
• 3.2 方法26-30
• 3.2.1 半數(shù)致死劑量（LD50）的測(cè)定26-27
• 3.2.2 小鼠免疫攻毒試驗(yàn)27
• 3.2.3 血清抗體的檢測(cè)27-28
• 3.2.4 淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)（MTT法）28
• 3.2.5 細(xì)胞因子的檢測(cè)28-29
• 3.2.6 小鼠肝臟載菌量檢測(cè)試驗(yàn)29-30
• 3.2.7 全血?dú)⒕囼?yàn)30
• 3.3 結(jié)果30-35
• 3.3.1 H. parasuis LD50的測(cè)定結(jié)果30
• 3.3.2 小鼠免疫、攻毒試驗(yàn)結(jié)果30-31
• 3.3.3 血清抗體檢測(cè)結(jié)果31-32
• 3.3.4 小鼠脾臟T淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)結(jié)果32-33
• 3.3.5 細(xì)胞因子檢測(cè)結(jié)果33
• 3.3.6 小鼠肝臟載菌量試驗(yàn)結(jié)果33-34
• 3.3.7 全血?dú)⒕囼?yàn)結(jié)果34-35
• 3.4 討論35-37
• 第四章 全文結(jié)論37-38
• 參考文獻(xiàn)38-46
• 致謝46-47
• 作者簡(jiǎn)介47

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 蔡旭旺,劉正飛,陳煥春,吳斌,金梅林,Pat Blackall;副豬嗜血桿菌的分離培養(yǎng)和血清型鑒定[J];華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);2005年01期

2 蔡旭旺,陳煥春,吳斌,劉正飛;副豬嗜血桿菌病的危害與防治[J];養(yǎng)殖與飼料;2003年05期

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本文編號(hào)：847593