本文關(guān)鍵詞：PPV和PRV診斷方法的建立及PPV-PRV二聯(lián)滅活疫苗免疫效力試驗(yàn)

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【摘要】：豬細(xì)小病毒病和偽狂犬病都是引起母豬繁殖障礙的主要疾病。豬細(xì)小病毒病是由豬細(xì)小病毒(Porcine Parvovirus,PPV)引起的,豬偽狂犬病是由偽狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)引起的。這兩種疾病在世界范圍內(nèi)廣泛分布,給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。為了有效預(yù)防這兩種疾病,本試驗(yàn)建立了檢測(cè)PPV和PRV的TaqMan熒光定量PCR方法以及檢測(cè)PPV抗體的ELISA方法,并利用豬細(xì)小病毒BQ-C株和豬偽狂犬病毒ΔgE株,試制了PPV-PRV二聯(lián)滅活疫苗,對(duì)試制的疫苗免疫效力進(jìn)行了初步試驗(yàn)。本研究針對(duì)PPV VP2基因和PRV gB基因序列,建立了檢測(cè)PPV和PRV的TaqMan熒光定量PCR方法。結(jié)果表明所建立的TaqMan熒光定量PCR檢測(cè)方法敏感性較高,特異性較好,批間、批內(nèi)變異系數(shù)均小于3%,其中針對(duì)PPV VP2基因的熒光定量PCR方法可檢測(cè)到13拷貝的初始模板,針對(duì)PRV gB基因的熒光定量PCR方法可檢測(cè)到167拷貝的初始模板,敏感性是常規(guī)PCR方法的100倍。本研究利用桿狀病毒載體表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)VP2蛋白(rVP2)作為抗原,建立了檢測(cè)PPV抗體的間接ELISA方法。經(jīng)條件優(yōu)化其最佳抗原包被濃度為10μg/mL,最佳酶標(biāo)二抗稀釋倍數(shù)為10000倍,最佳包被液為0.01mol/L碳酸鹽緩沖液(PH=9.6),最佳封閉液為5%的脫脂乳-PBS,最佳封閉時(shí)間為90 min,最佳血清稀釋倍數(shù)為200倍,其陽(yáng)性Cut-off值為0.3。用該方法與商品化ELISA試劑盒分別檢測(cè)360份臨床血清樣品,結(jié)果表明建立的ELISA方法檢測(cè)PPV抗體陽(yáng)性率為75.00%,商業(yè)化ELISA試劑盒檢測(cè)PPV抗體陽(yáng)性率為75.83%,二者符合率為94.17%。本研究利用本實(shí)驗(yàn)室保存的PPV-BQ-C毒株和rPRV-ΔgE毒株制備病毒液作為該二聯(lián)疫苗的抗原,利用β-丙內(nèi)酯將病毒液滅活,將上述滅活的兩種病毒液以PPV-BQ-C，

本文編號(hào)：812285