本文關(guān)鍵詞：雞傳染性支氣管炎病毒S1蛋白MHCⅠ分子限制性T細(xì)胞表位的鑒定

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【摘要】：利用生物結(jié)構(gòu)技術(shù)預(yù)測傳染性支氣管炎S1蛋白的1條細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)表位,并合成相應(yīng)的候選多肽(Sp6)。為了確定S1蛋白中確實(shí)存在該T細(xì)胞表位,并鑒定這條T細(xì)胞表位的正確性,構(gòu)建了含有S1基因的重組質(zhì)粒pCAGGS-S1,通過間接免疫熒光和Western blot確定該重組質(zhì)粒可以在真核細(xì)胞表達(dá)后,將該重組質(zhì)粒免疫SPF雞,間接ELISA檢測血清中的抗體。采集免疫雞的脾淋巴細(xì)胞并用合成的候選多肽刺激,通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測脾淋巴細(xì)胞中IFN-γ的分泌量以及流式細(xì)胞術(shù)檢測CD8+T淋巴細(xì)胞的增殖情況,初步確定該候選肽的正確性。間接免疫熒光、Western blot和間接ELISA試驗(yàn)結(jié)果表明,S1蛋白能夠在293T細(xì)胞中獲得表達(dá)并能夠引起機(jī)體的體液免疫,說明S1蛋白具有反應(yīng)原性,為進(jìn)一步驗(yàn)證T細(xì)胞表位打下了基礎(chǔ);熒光定量PCR結(jié)果顯示Sp6刺激后的雞的脾淋巴細(xì)胞中IFN-γ的分泌量明顯增加;流式細(xì)胞檢測發(fā)現(xiàn)經(jīng)Sp6和不相關(guān)多肽NP89-97刺激后及空白對照,CD8+T淋巴細(xì)胞增殖分別為34.8%、2.6%、0。以上結(jié)果表明,多肽Sp6能在體外誘導(dǎo)活化的雞淋巴細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞反應(yīng),是IBV S1的CTL表位。該研究結(jié)果對傳染性支氣管炎病毒免疫機(jī)制和通用疫苗研究具有借鑒意義。此次研究結(jié)果表明多肽Sp6能在體外誘導(dǎo)活化的雞淋巴細(xì)胞產(chǎn)生CTL,是IBV S1的CTL表位。該研究結(jié)果對傳染性支氣管炎病毒免疫機(jī)制和通用疫苗研究具有借鑒意義。
【作者單位】： 山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所山東省畜禽疫病防治與繁育重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院;山東濰坊工程職業(yè)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 禽傳染性支氣管炎病毒 S蛋白 CTL表位
【基金】：現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系(CARS-42-Z12) 公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專項(xiàng)(201303033) 十二五國家科技支撐計(jì)劃(2015BAD12B03)
【分類號】：S852.65
【正文快照】： 傳染性支氣管炎病毒(IBV)是威脅養(yǎng)禽行業(yè)的主要病原之一,各日齡的雞均易感[1]。雖然用活疫苗或滅活疫苗能在一定程度上預(yù)防傳染性支氣管炎的發(fā)生,但由于變異株的不斷出現(xiàn),傳染性支氣管炎仍然呈經(jīng)常流行性暴發(fā),給養(yǎng)殖行業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。多重疫苗的頻繁使用等因素使IBV，

本文編號：811705