本文關(guān)鍵詞：豬TGEV HN-2012株ORF3a和ORF3b基因遺傳變異分析及其真核表達研究

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【摘要】：【目的】研究豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)HN-2012株ORF3a和ORF3b基因的遺傳變異情況。【方法】根據(jù)GenBank公布的豬傳染性胃腸炎病毒ORF3a和ORF3b基因序列,分別設(shè)計合成1對特異性引物,通過RTPCR從豬傳染性胃腸炎病毒HN-2012株的cDNA中擴增ORF3a和ORF3b基因,經(jīng)克隆測序后,將其基因序列與NCBI中不同來源的TGEV毒株的相應序列進行同源性分析,構(gòu)建系統(tǒng)進化樹并進行遺傳變異分析,然后將ORF3a和ORF3b基因亞克隆至真核表達載體,構(gòu)建pCAGGS-ORF3a-flag和pCAGGS-ORF3b-flag載體,轉(zhuǎn)染293T細胞進行表達,利用flag標簽抗體對2個基因的蛋白表達情況進行Western blot分析。【結(jié)果】TGEV HN-2012株的ORF3a基因與其他毒株間核苷酸的同源性為92.6%~100%,ORF3b基因與其他毒株間核苷酸的同源性為98.6%~99.7%。Western blot結(jié)果表明,ORF3a蛋白和ORF3b蛋白的分子質(zhì)量約為8ku和28ku�！窘Y(jié)論】TGEV HN-2012株的ORF3a基因與CH/JLY2/08、CH/HLJH/08株等親緣關(guān)系較近,ORF3b基因與TS株、Miller M6株等親緣關(guān)系較近,與我國其他毒株關(guān)系較遠;成功實現(xiàn)了ORF3a和ORF3b蛋白在293T細胞中的表達。
【作者單位】： 河南農(nóng)業(yè)大學牧醫(yī)工程學院;河南省動物性食品安全重點實驗室;
【關(guān)鍵詞】： TGEV河南分離株(HN-) ORFa和ORFb基因 T細胞 真核表達
【基金】：國家自然科學基金項目“Ⅰ型干擾素在TGEV與樹突狀細胞相互作用中的免疫功能及調(diào)控機制研究”(31101796) 河南省基礎(chǔ)與前沿技術(shù)研究計劃項目“豬傳染性胃腸炎病毒感染對ST細胞免疫生物學特性的影響”(112300410161)
【分類號】：S852.65
【正文快照】： Genetic variation and eukaryotic expression of ORF3aandORF3bfrom porcine TGEV HN-2012 strain豬傳染性胃腸炎病毒(Porcine transmissiblegastroenteritis virus,TGEV)屬冠狀病毒科冠狀病毒屬成員,可導致豬傳染性胃腸炎(Transmissiblegastroenteritis,TGE)。TGE是豬的一

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本文編號：787563