本文關(guān)鍵詞：豬TGEV HN-2012株ORF3a和ORF3b基因遺傳變異分析及其真核表達(dá)研究

  更多相關(guān)文章： TGEV河南分離株(HN-) ORFa和ORFb基因 T細(xì)胞 真核表達(dá)

【摘要】：【目的】研究豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)HN-2012株ORF3a和ORF3b基因的遺傳變異情況。【方法】根據(jù)GenBank公布的豬傳染性胃腸炎病毒ORF3a和ORF3b基因序列,分別設(shè)計(jì)合成1對(duì)特異性引物,通過(guò)RTPCR從豬傳染性胃腸炎病毒HN-2012株的cDNA中擴(kuò)增ORF3a和ORF3b基因,經(jīng)克隆測(cè)序后,將其基因序列與NCBI中不同來(lái)源的TGEV毒株的相應(yīng)序列進(jìn)行同源性分析,構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)并進(jìn)行遺傳變異分析,然后將ORF3a和ORF3b基因亞克隆至真核表達(dá)載體,構(gòu)建pCAGGS-ORF3a-flag和pCAGGS-ORF3b-flag載體,轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞進(jìn)行表達(dá),利用flag標(biāo)簽抗體對(duì)2個(gè)基因的蛋白表達(dá)情況進(jìn)行Western blot分析�！窘Y(jié)果】TGEV HN-2012株的ORF3a基因與其他毒株間核苷酸的同源性為92.6%~100%,ORF3b基因與其他毒株間核苷酸的同源性為98.6%~99.7%。Western blot結(jié)果表明,ORF3a蛋白和ORF3b蛋白的分子質(zhì)量約為8ku和28ku。【結(jié)論】TGEV HN-2012株的ORF3a基因與CH/JLY2/08、CH/HLJH/08株等親緣關(guān)系較近,ORF3b基因與TS株、Miller M6株等親緣關(guān)系較近,與我國(guó)其他毒株關(guān)系較遠(yuǎn);成功實(shí)現(xiàn)了ORF3a和ORF3b蛋白在293T細(xì)胞中的表達(dá)。
【作者單位】： 河南農(nóng)業(yè)大學(xué)牧醫(yī)工程學(xué)院;河南省動(dòng)物性食品安全重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： TGEV河南分離株(HN-) ORFa和ORFb基因 T細(xì)胞 真核表達(dá)
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目“Ⅰ型干擾素在TGEV與樹(shù)突狀細(xì)胞相互作用中的免疫功能及調(diào)控機(jī)制研究”(31101796) 河南省基礎(chǔ)與前沿技術(shù)研究計(jì)劃項(xiàng)目“豬傳染性胃腸炎病毒感染對(duì)ST細(xì)胞免疫生物學(xué)特性的影響”(112300410161)
【分類號(hào)】：S852.65
【正文快照】： Genetic variation and eukaryotic expression of ORF3aandORF3bfrom porcine TGEV HN-2012 strain豬傳染性胃腸炎病毒(Porcine transmissiblegastroenteritis virus,TGEV)屬冠狀病毒科冠狀病毒屬成員,可導(dǎo)致豬傳染性胃腸炎(Transmissiblegastroenteritis,TGE)。TGE是豬的一

【相似文獻(xiàn)】

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