發(fā)布時(shí)間：2017-08-29 00:01

  本文關(guān)鍵詞：黃體期與卵泡期肉牛陰道菌群結(jié)構(gòu)的比較研究

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【摘要】：很多研究表明,牛陰道菌群對(duì)牛生殖道健康起著至關(guān)重要的作用,目前,有關(guān)肉牛陰道菌群結(jié)構(gòu)的報(bào)道還較少,本研究應(yīng)用變性梯度凝膠電泳(denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE)及熒光定量PCR(Real-time PCR)對(duì)肉牛黃體期與卵泡期陰道菌群進(jìn)行研究,比較分析肉牛不同生理時(shí)期陰道微生物結(jié)構(gòu)差異和種群數(shù)量變化。本文研究的主要結(jié)論如下:1、利用PCR-DGGE技術(shù)明確肉牛陰道菌群結(jié)構(gòu)并比較黃體期和卵泡期的差異。選擇7頭肉牛,分別采集黃體期和卵泡期陰道分泌物,提取細(xì)菌總DNA,采用巢式PCR對(duì)細(xì)菌16S rDNA的V3區(qū)進(jìn)行擴(kuò)增,將PCR產(chǎn)物進(jìn)行DGGE。對(duì)DNA指紋圖譜特異性條帶切膠回收并進(jìn)行克隆測(cè)序,通過(guò)BLAST與已知序列對(duì)比,鑒定細(xì)菌菌種,分析比較黃體期和卵泡期肉牛陰道菌群結(jié)構(gòu)。結(jié)果表明,健康肉牛陰道內(nèi)存在陰道氣球菌(Aerococcus vaginalis str.)、綠色氣球菌(Aerococcus viridans str.)、睡眠嗜血桿菌(Haemophilus somnus str.)、多動(dòng)物鏈球菌(Streptococcus pluranimalium str.)、嗜冷桿菌(Psychrobacter marincola str.)、大腸桿菌(Escherichia coli O157:H7 str.)和鞘氨醇單胞菌(Sphingomonas roseiflava str.)等。2、為明確肉牛黃體期與卵泡期陰道菌群結(jié)構(gòu)差異,本研究應(yīng)用熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)了健康肉牛黃體期和卵泡期陰道主要細(xì)菌的數(shù)量。選取7頭健康肉牛,分別采集黃體期和卵泡期陰道分泌物,提取細(xì)菌總DNA,根據(jù)DGGE克隆測(cè)序結(jié)果,選擇5種特異性細(xì)菌,即:大腸桿菌、鞘氨醇單胞菌、鏈球菌屬、乳酸桿菌屬和睡眠嗜血桿菌。利用熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)各細(xì)菌數(shù)量。結(jié)果表明,總菌、大腸桿菌、鞘氨醇單胞菌和睡眠嗜血桿菌菌群數(shù)量在兩組間無(wú)顯著差異(P0.05),但黃體期鏈球菌屬數(shù)量顯著高于卵泡期(P0.01),卵泡期乳桿菌屬數(shù)量顯著高于黃體期(P0.05)。結(jié)果提示,肉牛黃體期與卵泡期的陰道菌群結(jié)構(gòu)存在顯著差異。本研究利用分子生物學(xué)技術(shù)研究了肉牛黃體期和卵泡期陰道菌群結(jié)構(gòu),明確了二者間的差異,鑒定出健康肉牛陰道主要菌群,定量分析不同生理時(shí)期陰道菌群數(shù)量差異,研究結(jié)果不僅為揭示發(fā)情周期對(duì)肉牛陰道菌群的影響及機(jī)制奠定了基礎(chǔ),而且也為開(kāi)發(fā)新型微生態(tài)機(jī)制提供了參考。
【關(guān)鍵詞】：肉牛 黃體期 卵泡期 陰道 PCR-DGGE Real-time PCR 菌
【學(xué)位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S823
【目錄】：

• 摘要3-4
• Abstract4-7
• 引言7-9
• 第一篇 文獻(xiàn)綜述9-18
• 1 生殖道微生物多樣性的研究方法9-12
• 2 牛生殖道菌群的研究現(xiàn)狀與進(jìn)展12-16
• 3 研究目的與意義16-18
• 第二篇 研究?jī)?nèi)容18-46
• 第一章 黃體期與卵泡期肉牛陰道內(nèi)菌群種類分析18-32
• 1.1 材料18-19
• 1.2 方法19-25
• 1.3 結(jié)果25-30
• 1.4 討論30-31
• 1.5 小結(jié)31-32
• 第二章 黃體期與卵泡期肉牛陰道菌群結(jié)構(gòu)的定量分析32-45
• 2.1 材料32
• 2.2 方法32-35
• 2.3 結(jié)果35-43
• 2.4 討論43-44
• 2.5 小結(jié)44-45
• 第三章 結(jié)論45-46
• 參考文獻(xiàn)46-51
• 作者簡(jiǎn)介51-52
• 致謝52

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 劉暢;王軍;楊雨江;呂文發(fā);;利用PCR-DGGE技術(shù)分析肉牛陰道菌群結(jié)構(gòu)[J];中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào);2016年01期

2 趙靜;孫城濤;王軍;劉暢;李向楠;王全凱;;熒光定量PCR法比較研究健康和子宮內(nèi)膜炎奶牛陰道菌群結(jié)構(gòu)[J];中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào);2014年10期

3 蔣微;張坤琳;王靜;谷巍;;奶牛生殖道微生態(tài)學(xué)的研究進(jìn)展[J];飼料廣角;2013年08期

4 李潤(rùn)元;娜日蘇;迎春;何雯娟;;錫林浩特市周邊地區(qū)奶牛子宮內(nèi)膜炎病原菌的分離鑒定[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2012年23期

5 彭青;謝冰;袁琦;黃智婷;崔璐璐;王文婷;;青草沙水庫(kù)蓄水期間細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)變化的初步研究[J];環(huán)境科學(xué);2012年10期

6 周麗沙;李慧;張穎;王亞菲;徐慧;;石油污染土壤鞘氨醇單胞菌遺傳多樣性16S rDNA-PCR-DGGE分析[J];土壤學(xué)報(bào);2011年04期

7 郭世奎;包維民;龔昆梅;胡大春;邵劍春;陳弟;王昆華;;實(shí)時(shí)熒光定量PCR法研究結(jié)直腸癌患者腸道擬桿菌屬、梭桿菌屬和梭菌屬量的變化[J];中國(guó)微生態(tài)學(xué)雜志;2010年01期

8 徐義剛;崔麗春;;乳酸菌作為基因工程受體菌的研究展望[J];中國(guó)微生態(tài)學(xué)雜志;2007年01期

9 蘇勇;朱偉云;;分子生物學(xué)技術(shù)在胃腸道微生態(tài)中應(yīng)用研究進(jìn)展[J];生物技術(shù)通報(bào);2006年04期

10 張維軍;馬廣強(qiáng);林樹(shù)乾;欒婧婧;趙宏坤;楊少華;王洪梅;高運(yùn)東;仲躋峰;;健康奶牛產(chǎn)道內(nèi)正常菌群的研究[J];家畜生態(tài)學(xué)報(bào);2006年04期

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 劉珊;雌二醇和孕酮對(duì)牛子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞TLRs表達(dá)及功能的影響[D];吉林大學(xué);2012年

2 王永生;奶牛子宮內(nèi)膜炎真菌病原nest PCR-DGGE檢測(cè)方法建立及臨床應(yīng)用效果研究[D];吉林大學(xué);2011年

3 趙紅霞;奶牛子宮內(nèi)膜炎致病大腸桿菌的分離、鑒定及耐藥性研究[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 劉勛;基于高通量測(cè)序的健康與子宮內(nèi)膜炎奶牛陰道菌群差異性研究[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

2 李向楠;奶牛生殖道內(nèi)益生乳酸菌的分離、篩選及功能特性研究[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

3 孫城濤;健康與子宮內(nèi)膜炎奶牛陰道菌群結(jié)構(gòu)的比較研究[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

4 曾慶賀;布魯氏菌實(shí)時(shí)熒光定量PCR快速檢測(cè)方法的建立和臨床應(yīng)用的初步研究[D];吉林大學(xué);2014年

5 劉超遜;健康與患子宮內(nèi)膜炎水牛子宮內(nèi)細(xì)菌組的比較分析[D];廣西大學(xué);2013年

6 彭宇;體外培養(yǎng)和分子生物學(xué)技術(shù)研究奶牛產(chǎn)后子宮內(nèi)菌群的動(dòng)態(tài)變化[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

7 侯榮倫;奶牛生殖道菌群分析和乳酸菌的分離與鑒定及其生物學(xué)特性研究[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

8 黃介鑫;乳酸菌泡騰片的制備及其對(duì)患子宮內(nèi)膜炎奶牛子宮內(nèi)菌群結(jié)構(gòu)影響的研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2009年

9 李炳志;奶牛子宮內(nèi)膜炎菌群分析及微生態(tài)制劑對(duì)其療效觀察[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2008年

10 張維軍;奶牛子宮內(nèi)膜炎病原菌的分離鑒定及其快速診斷方法的研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

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本文編號(hào)：750183